體外誘導人羊膜上皮細胞分化為結膜上皮樣細胞的實驗研究.pdf

1、目的:建立體外培養(yǎng)人羊膜上皮細胞(HAECs)和兔結膜上皮細胞的方法,通過將兩種細胞共培養(yǎng),觀察并檢測是否能將人羊膜上皮細胞誘導分化為結膜上皮樣細胞。
　　方法:①分別采用酶消化法和組織塊法獲得HAECs和兔結膜上皮細胞,并對培養(yǎng)的細胞進行形態(tài)學觀察;②將HAECs和兔結膜上皮細胞在Transwell非接觸共培養(yǎng)系統(tǒng)中共培養(yǎng)10天,以誘導HAECs分化;③通過倒置顯微鏡和原子力顯微鏡對誘導前后的HAECs進行形態(tài)學及超微結構比較,

2、對誘導前后的HAECs進行PAS染色、HE染色,免疫熒光法檢測誘導前后HAECs中CK4、MUC4、MUC5AC的表達,實時定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)檢測分化細胞MUC4、MUC5ACmRNA的表達。
　　結果:共培養(yǎng)后的人羊膜上皮細胞和兔結膜上皮細胞形態(tài)較為相似,誘導后的HAECs中可見少量 PAS陽性細胞,細胞免疫熒光法檢測到誘導后HAECs中 CK4、MUC4、MUC5AC呈陽性表達,qRT-PCR檢測到分化后細胞M