大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromal Cells，BMSCs)作為一種成體干細(xì)胞，具有一定的自我更新、高度增殖和多向分化的潛能。在適宜的條件下，可以誘導(dǎo)分化為神經(jīng)樣細(xì)胞。BMSCs來(lái)源方便，取材較容易，體外培養(yǎng)和擴(kuò)增的技術(shù)條件簡(jiǎn)便，具有向神經(jīng)樣細(xì)胞分化的潛能。本課題在建立大鼠BMSCs體外分離、培養(yǎng)、純化及擴(kuò)增體系的基礎(chǔ)上，研究BMSCs在體外培養(yǎng)中的生物學(xué)特性，以及向神經(jīng)樣細(xì)胞分化的能力，為下一步人骨髓基質(zhì)細(xì)胞的

2、體外分離培養(yǎng)奠定基礎(chǔ)，同時(shí)為進(jìn)一步臨床治療提供理論依據(jù)及治療基礎(chǔ)。方法：本實(shí)驗(yàn)采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法，利用BMSCs貼壁速率快的特點(diǎn)，接種早期更換培養(yǎng)基去掉非貼壁細(xì)胞，反復(fù)換液純化。經(jīng)原代及傳代培養(yǎng)擴(kuò)增BMSCs后，研究其在體外培養(yǎng)中的生長(zhǎng)曲線等生物學(xué)特性及其超微結(jié)構(gòu)，進(jìn)行瑞士染色觀察細(xì)胞形態(tài)，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)CD44從而對(duì)其鑒定。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor，bFG

3、F)、表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor，EGF)兩種誘導(dǎo)因子的作用，誘導(dǎo)BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化，觀察細(xì)胞形態(tài)變化，以免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)β-微管蛋白Ⅲ(β-TubulinⅢ)和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial acidic fibrillary pro-tein，GFAP)的表達(dá)作為觀測(cè)指標(biāo)。結(jié)果： 1.全骨髓接種培養(yǎng)，經(jīng)貼壁法分離純化得到BMSCs，原代可見(jiàn)許多混雜血細(xì)胞，生長(zhǎng)緩慢，14天達(dá)70-80％傳代，

4、至3代時(shí)細(xì)胞趨于一致，瑞士染色觀察細(xì)胞形態(tài)，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)CD44呈(+)．2.本實(shí)驗(yàn)采用bFGF、EGF兩種誘導(dǎo)因子誘導(dǎo)BMSCs向神經(jīng)樣細(xì)胞分化，觀察細(xì)胞有形態(tài)的變化，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)β-TubulinⅢ(+)和GFAP(+)。結(jié)論：1.在本實(shí)驗(yàn)，通過(guò)全骨髓貼壁法分離純化，BMSCs細(xì)胞易于獲得，成活率較高，增殖穩(wěn)定，原代呈多形性，至3代形態(tài)趨于一致。2.在體外bFGF、EGF兩種誘導(dǎo)因子可以誘導(dǎo)BMSCs向神經(jīng)樣細(xì)胞分化，分化過(guò)