Toll樣受體3活化對(duì)小鼠脂肪干細(xì)胞生物學(xué)功能的影響.pdf

1、脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(Adipose-derived stem cells，ASCs)能夠自發(fā)遷移至組織損傷或炎癥部位，通過(guò)細(xì)胞因子對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)控，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用;而且與研究最廣泛的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比，ASCs具備來(lái)源豐富、提取方便等優(yōu)勢(shì)。因此，ASCs已經(jīng)成為組織損傷修復(fù)、自身免疫性疾病等疾病治療的研究熱點(diǎn)。而如何進(jìn)一步提升ASCs的遷移能力、免疫調(diào)節(jié)能力和其抗炎能力，是干細(xì)胞治療領(lǐng)域的一個(gè)重要研究方向。
　　通過(guò)聚肌苷酸-聚

2、胞苷酸(Poly(I∶C))對(duì)ASCs Toll樣受體3(TLR3)的激活，本論文構(gòu)建了一種全新的脂肪干細(xì)胞表型（定義為ASC2）。本論文通過(guò)研究ASC2集落形成單位、成骨成脂分化能力、細(xì)胞表面抗原標(biāo)志的表達(dá)、免疫調(diào)節(jié)因子的表達(dá)以及遷移能力等，檢測(cè)TLR3的活化對(duì)ASCs生物學(xué)功能的影響。
　　本論文首先利用酶消化法，從健康小鼠供體的腹部脂肪組織中提取ASCs，通過(guò)體外培養(yǎng)擴(kuò)增、誘導(dǎo)分化、集落形成及細(xì)胞表面抗原標(biāo)志的分析，確定分離

3、出的細(xì)胞為ASCs。然后，將TLR3激活劑Poly(I∶C)加入ASCs培養(yǎng)液中，誘導(dǎo)出ASC2。通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)試、Real-time PCR、染色鑒定等多種檢測(cè)方法，將ASCs和ASC2在表面抗原標(biāo)志表達(dá)、細(xì)胞因子的分泌、集落形成單位、成骨成脂分化及遷移能力等方面進(jìn)行了對(duì)比。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ASCs與ASC2茜素紅、油紅O染色結(jié)果均呈陽(yáng)性，染色結(jié)果沒(méi)有明顯差距;流式分析結(jié)果顯示ASCs和ASC2均陽(yáng)性表達(dá)Sca1和CD106

4、，陰性表達(dá)CD11b、CD45、CD34和CD31;ASCs和ASC2集落形成單位測(cè)試沒(méi)有顯著性差異，說(shuō)明TLR3的活化對(duì)ASCs的成骨成脂分化能力、細(xì)胞表面標(biāo)志表達(dá)及體外增殖能力沒(méi)有造成顯著性影響。但是，Real-time PCR的結(jié)果表明TLR3的活化增強(qiáng)了IL-6、TGF-β、RANTES和VEGF的表達(dá)，抑制了KC、MCP-1和Eotaxin-1的表達(dá);趨化性實(shí)驗(yàn)則證實(shí)了TLR3的活化增強(qiáng)了ASCs的遷移能力。
　　本論文