缺氧環(huán)境對(duì)骨髓來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能影響.pdf

1、目的：
　　本研究通過(guò)體外模擬缺氧微環(huán)境，旨在研究缺氧條件對(duì)骨髓來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞(BM-EPCs)形態(tài)學(xué)、抗凋亡能力、體外血管形成能力等生物學(xué)功能的影響.
　　方法：
　　1、無(wú)菌條件下分離6-8周齡(180-220g)雄性Wistar大鼠四肢長(zhǎng)骨，PBSE沖洗骨髓腔至白色透亮，經(jīng)密度梯度離心法獲得大鼠骨髓來(lái)源單核細(xì)胞，接種在包被有大鼠玻連蛋白的10cm培養(yǎng)皿中，加入特定內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基-2。
　　2、隨機(jī)分為常

2、規(guī)培養(yǎng)組和缺氧培養(yǎng)組，常規(guī)培養(yǎng)組于常規(guī)(37℃、5％CO2)條件下培養(yǎng)7d;缺氧培養(yǎng)72h、48h、24h組分別于常規(guī)(37℃、5％CO2)條件下培養(yǎng)4d、5d、6d后，缺氧(1％O2+5％CO2+94％N2)條件下繼續(xù)培養(yǎng)72h、48h、24h。
　　3、細(xì)胞形態(tài)觀察、細(xì)胞表面標(biāo)志物CD34+/CD133+雙陽(yáng)性標(biāo)記檢測(cè)、Dil標(biāo)記的乙?；兔芏戎鞍缀虵ITC標(biāo)記的荊豆凝集素-1共同染色，三種方法共同鑒定常規(guī)培養(yǎng)至第7天的BM

3、-EPCs細(xì)胞。
　　4、分別觀察常規(guī)培養(yǎng)組、缺氧72h組、缺氧48h組、缺氧24h組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，并對(duì)以上各組細(xì)胞進(jìn)行內(nèi)皮分化功能檢測(cè)(Matrigel Assay)、抗凋亡檢測(cè)(AnnexinⅤ/PI)，比較各組細(xì)胞生物學(xué)功能變化差異，明確缺氧條件對(duì)BM-EPCs的功能影響。
　　結(jié)果：
　　1、成功分離并獲得各組培養(yǎng)至第7天的大鼠骨髓來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞，BM-EPCs細(xì)胞吞噬Dil標(biāo)記的乙?；兔芏戎鞍缀虵ITC

4、標(biāo)記的荊豆凝集素-1，雙熒光染色細(xì)胞陽(yáng)性率為(90％±4％)，細(xì)胞表面標(biāo)志物CD34+/CD133+雙陽(yáng)性率為(86％±2％)。
　　2、隨著缺氧處理時(shí)間的延長(zhǎng)，BM-EPCs早期凋亡率明顯增加。與常規(guī)培養(yǎng)組(0.89±0.20)％相比，缺氧培養(yǎng)24 h組早期凋亡率(1.33±0.07)％改變不明顯（P＞0.05），缺氧培養(yǎng)48 h組(3.25±0.12)％、72 h組(7.48±1.53)％，早期凋亡率明顯增加（P＜0.05）。

5、
　　3、隨著缺氧處理時(shí)間的延長(zhǎng)，BM-EPCs體外血管形成能力變化明顯。與常規(guī)培養(yǎng)組比較，缺氧培養(yǎng)24 h組的體外血管形成能力增強(qiáng)(P＜0.01)，缺氧培養(yǎng)48 h、72 h組體外血管形成能力明顯下降(P＜0.01);與缺氧培養(yǎng)24 h組比較，缺氧培養(yǎng)48 h、72 h組體外血管形成能力明顯下降（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　缺氧預(yù)處理BM-EPCs24 h，BM-EPCs早期凋亡率增加不明顯，細(xì)胞體外血管形成能