茶多酚對牙周膜細胞作用的研究.pdf

1、目的：研究茶多酚(TP)對原代牙周膜細胞(PDLC)的增殖作用；建立SD大鼠牙周炎模型，觀察TP對大鼠牙周炎模型的作用。
　　 方法：⑴原代培養(yǎng)人PDLC獲得PDLC株，波形絲蛋白(Vimentin)、角蛋白(Keratin，CK)、DAB購自武漢博士德生物有限公司，SP試劑盒購自福州邁新生物科技有限公司，TP購自杭州天誠藥業(yè)有限公司，LPS購自上?；巧锟萍加邢薰?產(chǎn)自Sigma公司)，ALP試劑盒購自美國Synermed

2、公司，人Ⅰ型膠原蛋白ELISA試劑盒購自上海西塘生物科技有限公司(產(chǎn)自美國SBA公司)，SD大鼠購自浙江大學動物中心。⑵分體內(nèi)和體外實驗。用實驗用PBS液配制不同濃度的TP水溶液，用蓋玻片+酶消化組織塊法培養(yǎng)原代PDLC，第三代細胞進行細胞鑒定，以第四代PDLC為體外藥效的實驗模型，用LPS刺激PDLC，分別通過MTT法，觀察不同濃度下的TP水溶液對PDLC的增殖和LPS的抑制作用；通過堿性磷酸酶(ALP)活性測定法觀察TP對PDLC的

3、分化作用；通過ELISA法檢測TP作用于PDLC后，Ⅰ型膠原纖維蛋白含量的變化。以結扎絲結扎牙周、注射激素并高糖飲食，建立的SD大鼠實驗性牙周炎癥為體內(nèi)藥效的實驗模型，通過組織切片HE染色觀察牙周組織形態(tài)學的變化，初步探討TP對牙周炎癥的作用。
　　 結果：TP對PDLC有增殖作用，且成濃度依賴性(p=0.00)：5ug/ml，10ug/ml，50ug/ml，100ug/ml和200ug/mlTP水溶液與對照組相比較能促進PDL

4、C的增殖，200ug/ml作用效果最好(p=0.00)，300 ug/ml時細胞增殖率下降(p=0.00)，Tp作用于PDLC，24h即可起作用，且24h與48h無時間差異(p=0.05)。LPS對PDLC有抑制作用，有濃度依賴性(p=0.00)和時間依賴性(p=0.017)，200ug/mlTP水溶液對LPS刺激PDLC4.8h后的炎癥有顯著的抑制作用(p=0.04，p=0.019)。ALP活性測定及Ⅰ型膠原纖維蛋白含量測定結果表明：

5、TP作用于PDLC后24h，能提高PDLC的分化能力，且呈濃度依賴性(p=0.005)，200ug/ml效果最好。24h和48h比較，p=0.07，無統(tǒng)計學意義。TP隨著濃度的增加和時間的延長，Ⅰ型膠原纖維蛋白含量增加，PDLC經(jīng)LPS刺激后，TP對其有顯著的抑制作用，TP能有效抑制LPS對牙周Ⅰ型膠原纖維蛋白的破壞，TP對PDLC作用48h效果較24h好(p=0.003，p=0.001)。TP對實驗性牙周炎模型的療效：2mg/ml濃度

6、的水溶液，能緩解實驗性牙周炎模型的牙周破壞，促進牙周膜的再生，對牙周炎有一定的治療作用，可以作為牙周炎治療的輔助性藥物。
　　 結論：TP水溶液可以促進PDLC的增殖、體外分化，促進牙周組織中Ⅰ型膠原纖維蛋白含量增加。24h，200ug/ml濃度的TP水溶液效果最好。TP水溶液可以抑制LPS對PDLC的破壞，促進Ⅰ型膠原纖維蛋白的增加。TP水溶液作用于經(jīng)LPS刺激的PDLC48h，其抑制效果最好。牙周結扎、牙周激素注射及高糖飲食