鉛暴露AD模型大鼠腦不同區(qū)域NMDA受體亞基（NR1、NR2A、NR2B）表達(dá)的研究.pdf

1、N-甲基-D-天冬氨酸(N-methy-D-aspartate，NMDA)受體是離子型谷氨酸(Glutamatic acid)受體的一個(gè)亞型，通過(guò)對(duì)其藥理、生理、病理等方面的研究已經(jīng)證實(shí)，NMDA受體在生物發(fā)育過(guò)程中有著重要的生理作用，可調(diào)節(jié)神經(jīng)元的活性、樹突、軸突結(jié)構(gòu)的發(fā)育及突觸可塑性等，在神經(jīng)元回路的形成及學(xué)習(xí)和記憶的突觸機(jī)制中，NMDA受體亦起著關(guān)鍵作用。先前的研究表明，谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性可能干擾許多神經(jīng)障礙性疾病包括阿爾茨海默

2、癥(Alzheimer's disease,AD)，亨廷頓氏病(Huntington’s disease)，肌萎縮性側(cè)索硬化和癲癇中正常的谷氨酸傳遞和谷氨酸受體激活。也有報(bào)道表明谷氨酸受體能與淀粉樣前蛋白或β-淀粉樣蛋白相互作用，它們能對(duì)神經(jīng)元產(chǎn)生有益或有害的作用。這些結(jié)果表明NMDA受體在阿爾茨海默癥(AD)的神經(jīng)生物學(xué)中發(fā)揮重要的作用。 AD動(dòng)物模型的建立是研究AD的基礎(chǔ)。回顧對(duì)AD的研究，國(guó)內(nèi)外眾多的實(shí)驗(yàn)室，依據(jù)AD的臨床

3、特點(diǎn)和病理特征，分別從不同角度研制了多種動(dòng)物模型，然而，包括轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在內(nèi)的AD動(dòng)物模型，均不能完全模擬、復(fù)制出AD的主要病理、生化、神經(jīng)遞質(zhì)及行為學(xué)等方面特征性變化，嚴(yán)重制約著關(guān)于AD發(fā)病機(jī)制及防止作用的深入研究。因此，本研究采用了鉛暴露大鼠建立AD大鼠模型，研究NMDA受體在AD大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙中的變化，探討AD可能的發(fā)病機(jī)制。 方法： 1、動(dòng)物及模型制備實(shí)驗(yàn)在40只一月齡Sprague-Dawley(SD)中進(jìn)行，

4、將鼠雌雄不拘，隨機(jī)分成5組，其中對(duì)照組8只，喂蒸餾水。其余4組各8只為鉛暴露組，分飼0.1％、0.2％、0.5％、1.0％用蒸餾水配制的醋酸鉛。3周后娩出子鼠，子鼠21天起斷乳，喂以母鼠相同的飲水并單獨(dú)飼養(yǎng)。 2、被動(dòng)回避反應(yīng)(passive avoidance response，PAR)訓(xùn)練。 3、采用Western blot技術(shù)，測(cè)定NR1、NR2A和NR2B亞基蛋白在AD模型大鼠腦中額葉皮質(zhì)、新小腦、海馬及紋狀體中

5、的表達(dá)情況。 4、采用RT-PCR．技術(shù)，測(cè)定NR1、NR2A和NR2B亞基mRNA在AD模型大鼠腦中額葉皮質(zhì)、新小腦、海馬及紋狀體中的表達(dá)情況。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、AD模型大鼠中NR1、NR2A和NR2B亞基的蛋白水平在各個(gè)腦區(qū)均有不同程度的下調(diào)。 2、AD模型大鼠海馬區(qū)NR1亞基蛋白表達(dá)明顯減弱，額葉皮質(zhì)和紋狀體次之新小腦區(qū)無(wú)明顯減弱。 3、NR2A亞基蛋白水平在AD模型大鼠額葉皮質(zhì)、新小腦區(qū)、

6、海馬及紋狀體中均有不同程度的下調(diào)，其中海馬區(qū)的下調(diào)趨勢(shì)最為明顯，額葉皮質(zhì)和紋狀體次之，新小腦區(qū)最弱。 4、NR2B亞基蛋白水平在AD模型大鼠四個(gè)腦區(qū)中的表達(dá)也均有不同程度的下調(diào)，其中海馬區(qū)、額葉皮質(zhì)及紋狀體的下調(diào)趨勢(shì)均很明顯，新小腦區(qū)無(wú)明顯下調(diào)趨勢(shì)。 5、正常對(duì)照組大鼠NR1、NR2A亞基m RNA表達(dá)新小腦較強(qiáng)，其余各區(qū)無(wú)差異，NR2B亞基m RNA額葉皮質(zhì)及新小腦表達(dá)較強(qiáng)。 6、AD模型大鼠組三種亞基的m R

7、NA表達(dá)均有不同程度的下調(diào)。AD模型大鼠中各區(qū)NR1亞基m RNA表達(dá)均有所降低，其下調(diào)趨勢(shì)趨于一致；NR2A亞基m RNA在AD模型大鼠中額葉皮質(zhì)、新小腦區(qū)、海馬及紋狀體的表達(dá)下調(diào)趨勢(shì)均很明顯；NR2B亞基mRNA在額葉皮質(zhì)、新小腦區(qū)的表達(dá)趨勢(shì)下降最顯著，紋狀體次之，海馬最次之。 結(jié)論： NMDA受體亞基NRl，NR2A和NR2B的蛋白水平和m RNA水平在AD模型大鼠額葉皮質(zhì)、海馬、新小腦及紋狀體均有不同程度的下調(diào)。