NR2B在糖尿病神經(jīng)痛大鼠脊髓背角表達(dá)的變化.pdf

1、目的:糖尿病神經(jīng)病變是糖尿病最常見(jiàn)的慢性并發(fā)癥之一,其發(fā)病率逐年增高,感覺(jué)神經(jīng)病變即糖尿病神經(jīng)痛性病變是其中最為常見(jiàn)的,約占30％,其發(fā)病機(jī)制及病理生理機(jī)制十分復(fù)雜。脊髓背角的各種神經(jīng)遞質(zhì)和受體在糖尿病神經(jīng)病理性痛等慢性疼痛時(shí)可發(fā)生一系列改變。NMDA受體是一種配體門(mén)控離子型谷氨酸受體,是興奮性氨基酸受體系統(tǒng)的重要組成部分。NMDA受體不僅參與學(xué)習(xí)記憶、突觸可塑性及神經(jīng)發(fā)育等生理功能的調(diào)節(jié),而且,在疼痛、神經(jīng)退行性變、癲癇等病理過(guò)程中發(fā)

2、揮重要作用。NMDA受體是由NR1和NR2亞單位組成的異五聚體。NR2B亞單位對(duì)NMDA受體的結(jié)構(gòu)和功能起著十分重要的作用,通過(guò)多種方式調(diào)節(jié)NMDA受體的功能活性,其改變將影響機(jī)體NMDA受體系統(tǒng)的功能,進(jìn)而影響痛覺(jué)信息在脊髓背角的整合、傳遞和調(diào)控。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)左下腹腔注射鏈尿佐菌素(STZ),制備糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型。觀察比較糖尿病大鼠(DM)與正常大鼠(Control)在體重、空腹血糖和50％縮足反應(yīng)閾值(PWT)等方面的變化

3、。采用免疫組織化學(xué)染色方法,比較糖尿病神經(jīng)痛大鼠與正常大鼠脊髓背角NR2B的表達(dá)變化,從而探討NR2B在糖尿病神經(jīng)病理性痛形成中的變化及作用,以期發(fā)現(xiàn)新一代治療慢性疼痛藥物的治療靶點(diǎn)。
　　 方法:
　　 健康雄性SD大鼠60只,體重130克～150克,實(shí)驗(yàn)前測(cè)定所有大鼠的體重、空腹血糖和50％縮足反應(yīng)閾值(PWT)。隨機(jī)取48只大鼠左下腹腔注射STZ(60mg/kg)制備糖尿病模型。STZ注射7天后,30只大鼠所測(cè)空腹

4、血糖＞16.7mol/L,為成功的糖尿病大鼠模型,其余18只大鼠空腹血糖＜16.7mol/L被剔除實(shí)驗(yàn),模型制備成功率為:63％。STZ注射14天后,用von Frey針測(cè)定大鼠的50％縮足反應(yīng)閾值(PWT),PWT小于4g者為糖尿病神經(jīng)痛大鼠模型。另外12只正常大鼠腹腔注射相同量的生理鹽水(C組),用作與注射STZ相對(duì)比的正常對(duì)照組。
　　 隨機(jī)取糖尿病神經(jīng)痛大鼠20只(D組)和正常大鼠12只(C組)進(jìn)行行為學(xué)及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

5、。確定4個(gè)取材點(diǎn),分別定為注射STZ后2周、3周、5周、7周。根據(jù)取材時(shí)間點(diǎn)不同,將20只D組大鼠分成4組(n=5):D2組、D3組、D5組、D7組;12只正常大鼠也分為4組(n=3):C2組、C3組、C5組、C7組。兩組分別于腹腔注射后2周、3周、5周、7周測(cè)量各大鼠的體重、空腹血糖及50％縮足反應(yīng)閾值變化,然后取材。大鼠取材時(shí),均用4％多聚甲醛灌流固定,取脊髓胸腰段膨大處置于4％多聚甲醛固定,蠟塊包埋,進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,測(cè)定大鼠

6、脊髓背角NR2B的免疫陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞數(shù)。所得數(shù)據(jù)以平均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示,采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行秩和檢驗(yàn)、單因素方差分析、組內(nèi)t檢驗(yàn)和相關(guān)性分析,P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1：兩組大鼠在體重、空腹血糖、50％縮足反應(yīng)閾值方面的變化比較(見(jiàn)附表):腹腔注射前,兩組大鼠在體重、空腹血糖及50％縮足反應(yīng)閾值方面的無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。兩組大鼠各對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比,D組大鼠體重

7、明顯較C組大鼠降低(p＜0.05),D組大鼠空腹血糖明顯較C組大鼠增高(0＜0.05),D組大鼠PWT明顯較C組大鼠降低(p＜0.05)。
　　 2：NR2B在大鼠脊髓背角的表達(dá)變化(見(jiàn)附表):與C組正常對(duì)照組相比,D組注射STZ后2周、3周、5周、7周的糖尿病神經(jīng)痛大鼠脊髓背角NR2B免疫陽(yáng)性神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)明顯增加(p＜0.05),在3周時(shí)NR2B免疫陽(yáng)性.神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量達(dá)到最多,5周時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)下降,在7周時(shí)明顯下降。