重組人干擾素α長效注射微球的研究.pdf

1、該課題設計采用體內可生物降解的高分子材料聚乳酸羥基乙酸嵌段共聚物(PLGA)將IFN-α包被成微球,通過微球內部的孔道以及高分子材料的融蝕降解來調控IFN-α在體內外的釋放,以期達到一次給藥后4周持續(xù)釋放藥物的長效緩釋效果,從而提高用藥質量和病人用藥的順應性.課題工作首先研究了復乳法(w/o/w)制備IFN-α PLGA微球的制備工藝及其影響因素.通過單因素實驗設計考察了制備復乳時的攪拌速度、外水相聚乙烯醇(PVA)濃度、油相PLGA濃

2、度、內水相滲透壓以及PLGA的平均分子量等因素對微球形態(tài)、平均粒徑和包封率的影響.結果表明制備復乳時的攪拌速度、PVA濃度、PLGA濃度、內水相滲透壓和緩沖系統(tǒng)都對微球的外觀和粒徑有顯著影響.微球形態(tài)和粒徑是微球釋藥調控的重要因素,微球粒徑越小,突釋效應越明顯.該試驗進一步研究了固體/油/油法(s/o/o)制備IFN-α PLGA微球的處方及制備工藝.試驗中首先制備了Zn<'2+>與IFN-α復合物,并證明了Zn<'2+>與IFN-α復

3、合物是一種可溶性沉淀,溶解后在電泳和凝膠色譜上的行為與IFN-α原液一致.根據文獻報道采用相凝聚法成功地制備了IFN-α及其Zn<'2+>復合物的微粉,并將其包被成微球.通過單因素實驗考察了PLGA濃度、攪拌速度、IFN微粉粒徑、油相中的添加劑等因素對微球粒徑、外觀以及包封率的影響.試驗中發(fā)現PLGA濃度、攪拌速度以及甘露醇等添加劑對微球粒徑和外觀影響顯著.由于蛋白質在外油相中不溶解,因而包封率通常較高(90﹪以上.)IFN-α經Zn<

4、'2+>處理形成復合物、油相中加入甘露醇、伯洛沙姆188(F-68)等添加劑則可顯著地改變微球的釋藥特性,尤其對突釋效應影響顯著.以BCA(Bicinchoninic acid,二喹啉甲酸)分析法測定了釋放介質中IFN-α的濃度,考察了微球的體外釋放特性.體外釋放試驗表明微球具有顯著的長效作用,可以緩慢釋放藥物30天左右.用二二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、分子排阻色譜以及細胞病變抑制法(CPE)等方法考察了制備工

5、藝和釋放過程中IFN-α的穩(wěn)定性.試驗表明IFN-α溶液在37℃條件下放置一個月可形成少量聚集產物和降解產物.復乳法制備工藝對IFN-α的穩(wěn)定性影響較小,微球中的IFN-α比活性較高,但在微球的體外釋放過程中IFN-α的比活性明顯下降.用s/o/o法制備的IFN-α和Zn<'2+>復合物微球中的IFN-α比活性較低,SDS-PAGE試驗也表明微球中的復合物用EDTA溶解后仍有少量二聚體產生,可能與IFN和Zn<'2+>復合物本身溶解性較