家蠅酪氨酸酶生物化學(xué)性質(zhì)初步研究.pdf

1、本文就家蠅Muscadomestica酪氨酸酶(tyrosinase)的生物化學(xué)性質(zhì)和抑制動(dòng)力學(xué)參數(shù)做了基礎(chǔ)性研究。首先對(duì)家蠅成蟲(chóng)不同部位酪氨酸酶活性進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)家蠅三日齡成蟲(chóng)頭、胸、腹三部分酪氨酸酶的活力大小依次為：頭＞腹＞胸。不同蟲(chóng)態(tài)及蟲(chóng)齡家蠅酪氨酸酶的活性大小依次為：3齡幼蟲(chóng)＞2齡幼蟲(chóng)＞1齡幼蟲(chóng)＞成蟲(chóng)＞蛹。以鄰苯二酚為底物，研究了pH和溫度對(duì)酪氨酸酶活力的影響，結(jié)果表明，酶催化底物氧化均有一個(gè)最適pH區(qū)域和溫度，以家蠅3齡幼蟲(chóng)

2、為例酪氨酸酶最適的pH為7.4，最適溫度為45℃。以硫酸銨、聚乙二醇-400(PEG-400)、聚乙二醇-10000(PEG-10000)、聚乙二醇-20000(PEG-20000)為沉淀劑對(duì)家蠅酪氨酸酶進(jìn)行分級(jí)沉淀，結(jié)果表明，用硫酸銨和PEG-400的效果優(yōu)于PEG-10000和PEG-20000。用G-25和G-150層析柱純化10％-15％的硫酸銨沉淀(透析后的酶液)，酪氨酸酶純化倍數(shù)可達(dá)16.26倍，是單用硫酸銨純化倍數(shù)的4.3

3、7倍。不同溫度對(duì)家蠅酪氨酸酶的活性影響不同。22℃下，12h內(nèi)活性變動(dòng)不大，24h后活性降低；4℃下，72h內(nèi)活性基本穩(wěn)定，此后活性開(kāi)始下降；-20℃，3天后活性逐漸減??；-80℃，7天內(nèi)活性基本保持不變。對(duì)家蠅酪氨酸酶活性抑制效果最明顯是苯基硫脲，其次為對(duì)硫磷和辛硫磷；抑制動(dòng)力學(xué)研究的結(jié)果表明，被對(duì)硫磷、辛硫磷抑制和對(duì)照的直線交點(diǎn)在第二象限，表明二者對(duì)家蠅酪氨酸酶的抑制均為混合型抑制；被苯基硫脲抑制和對(duì)照的直線相交于第三象限，也屬于混