淡色庫蚊和鯽魚體內(nèi)乙酰膽堿酯酶的生物化學(xué)性質(zhì)比較研究.pdf

1、本文以淡色庫蚊(Culexpipienspallens)和鯽魚(Carassiusauratus)為研究對象，系統(tǒng)研究了淡色庫蚊和鯽魚體內(nèi)乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase，AChE)的生物化學(xué)特性及其對抑制劑的敏感度以及一些殺蟲藥劑對淡色庫蚊幼蟲的毒力。用親和柱層析技術(shù)對雌雄鯽魚魚腦AChE進行了純化，比較分析了鯽魚性別之間的差別；并對雌雄鯽魚魚腦AChE基因進行了克隆和序列分析。研究結(jié)果如下： 1.研究了

2、淡色庫蚊體內(nèi)和雌雄鯽魚腦部AChE的粗酶液對碘化硫代乙酰膽堿(ATCh)、β-甲基硫代乙酰膽堿(β-MTCh)、丙酰硫代膽堿(PrTCh)、丁酰硫代膽堿(BuTCh)4種底物專一性，根據(jù)Km值，淡色庫蚊的AChE對4種底物親和性的差異不顯著(P＜0.05)，而鯽魚腦部AChE對4種底物親和性的差異顯著(P＜0.05)，其中對ATCh的Km最小，Vmax最大。Vmax顯示，淡色庫蚊和鯽魚的AChE對4種底物水解效率的高低順序為ATCh＞P

3、rTCh＞β-MTCh＞BuTCh。 2.毒扁豆堿、DDVP、涕滅威和滅多威對淡色庫蚊AChE以及3種氨基甲酸酯類農(nóng)藥對雄性和雌性魚腦AChE抑制的時間進程曲線是一致的。通過比較8種殺蟲藥劑對淡色庫蚊和鯽魚AChE的IC50值，發(fā)現(xiàn)淡色庫蚊和鯽魚的AChE都對克百威的敏感度最高，對涕滅威最低。 3.基于LC50值的比較，在實驗內(nèi)測定了9種藥劑對淡色庫蚊幼蟲的毒力，淡色庫蚊對毒死蜱的敏感度最高，LC50值為0.001μg/

4、mL，對硫雙滅多威的敏感性最低，LC50值為0.957μg/mL。滅多威、硫雙滅多威、克百威，丁硫克百威等4種藥劑對AChE的抑制能力(ki值和IC50)與其對淡色庫蚊毒力(LC50)值沒有一致的對應(yīng)關(guān)系。 4.以ATCh和BuTCh作為底物檢測雌雄鯽魚體內(nèi)不同組織器官中AChE和BuChE的活性，發(fā)現(xiàn)腦部所含的AChE的比活力最高，占所有組織的50％以上；鯽魚的肌肉中不但存在水解ATCh的AChE，也存在水解BuTCh的BuC

5、hE。 5.比較研究了不同性別鯽魚腦AChE對滅多威、硫雙滅多威、克百威，丁硫克百威等4種氨基甲酸酯類殺蟲劑的敏感度，硫雙滅多威對雌魚AChE的ki值顯著高于其對雄魚的ki值；4種藥劑對雌魚腦AChE的k2值都顯著大于對雄魚腦AChE的k2值。丁硫克百威抑制雌魚腦AChE的氨基甲?；疉ChE的恢復(fù)速率明顯比雄魚腦AChE快(基于k3值的比較)。 6.研究了氯磷定(2-PAM)，雙磷定(TMB4)，雙復(fù)磷(OBI)和酰胺磷

6、定(HI-6)等4種AChE恢復(fù)劑對魚腦磷酰化AChE的恢復(fù)能力?；谥鼗罨实谋容^，OBI對甲胺磷抑制AChE的恢復(fù)效果最好；OBI和TMB4對毒死蜱抑制AChE的恢復(fù)效果好，2-PAM對DDVP抑制AChE的恢復(fù)效果最好?；謴?fù)劑本身對AChE的活性都有一定的抑制作用，其中雙磷定(TMB4)對AChE的抑制率最高，在實驗條件下達到44.9％，HI-6對AChE的抑制率最低為11.5％。 7.用親和層析的方法對雌雄魚腦AChE進

7、行了較好的純化，對雌雄魚純化倍數(shù)分別為1521倍和2089.5倍。對純化前后的雌雄魚腦的AChE的生物化學(xué)特性及對藥劑的敏感性進行了比較，雌雄鯽魚純化后AChE對ATCh親和力比純化前增加了(基于Km值的比較)，純化后的AChE對DDVP和丁硫克百威的敏感度明顯增加100倍左右。 8.通過RT-PCR分別克隆了鯽魚腦AChE基因片段，長度為1060bp，編碼353個氨基酸(Genbank上注冊號為AY847745)，并對其進行了