銅對(duì)豬肝細(xì)胞CuZn-SOD酶活性及mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、該試驗(yàn)以初生1日齡健康軍牧1號(hào)仔豬為試驗(yàn)動(dòng)物,研究不同銅濃度對(duì)CuZn-SOD酶活性及mRNA表達(dá)的影響.實(shí)驗(yàn)一利用24孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細(xì)胞,細(xì)胞培養(yǎng)液中添加10％牛血清,同時(shí)分別添加0、15.6、31.2、46.8、62.4、78、93.6μmol/LCu,觀察細(xì)胞形態(tài),測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中CuZn-SOD酶活性.結(jié)果顯示:各個(gè)試驗(yàn)組的酶活性均顯著增加,62.4μmol/Lcu時(shí)酶的活性最高(P<0.05).實(shí)驗(yàn)二利用RT-PCR方法測(cè)定

2、肝細(xì)胞CuZn-SODmRNA表達(dá)量.細(xì)胞培養(yǎng)液中添加10％小牛血清,同時(shí)分別添加0、31.2、62.4、93.6 μmol/LCu,利用Trizol法從肝細(xì)胞中提取總RNA,采用RT-PCR方法擴(kuò)增出SODcDNA,與pGEM-T載體相連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109,通過(guò)PCR鑒定及測(cè)序分析,證明所擴(kuò)增DNA片段為目的片段.PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳,用β-actin作內(nèi)參,用凝膠成像分析儀檢測(cè)SODmRNA的相對(duì)表達(dá)量.結(jié)果顯示,SO

3、DcDNA序列與基因庫(kù)中的相一致,重合性達(dá)98.8％.細(xì)胞培養(yǎng)液中添加31.2、62.4、93.6μmol/LCu,肝細(xì)胞中SODmRNA的表達(dá)量均顯著高于對(duì)照組(p<0.05),以62.4μmol/LCu組效果最為明顯.從兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果我們可以推測(cè),銅作為CuZn-SOD的活性中心,不僅可以直接提高SOD的酶活性,而且可以對(duì)其基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控,提高轉(zhuǎn)錄水平,使SODmRNA表達(dá)量增加,為后期的翻譯提供了條件,這對(duì)機(jī)體的抗氧化功能有重要