傳染性法氏囊病病毒的分子生物學(xué)快速鑒別診斷技術(shù)的研究.pdf

1、首先,研究根據(jù)已發(fā)表的IBDV各致病型毒株的序列,在病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP2編碼基因的高變區(qū)(VP2 variable domain,vVP2)兩端外側(cè)的保守序列內(nèi)設(shè)計合成了2條寡核苷酸引物,對各種不同致病型的12株參考毒株進行逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)的檢測.結(jié)果12個參考毒株均能擴增出約679np的目的片段,而陰性對照的常見5種雞病病原:雞新城疫病毒(NDV)、雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)、雞傳染性貧血病毒(CAIV)、大

2、腸桿菌和多殺性巴氏桿菌均沒有擴增到任何片段;應(yīng)用建立的技術(shù)對疑似IBD的34份臨床病料進行檢測,并同時在基礎(chǔ)RT-PCR擴增的片段內(nèi)設(shè)計另一對引物進行Nested-PCR.結(jié)果基礎(chǔ)RT-PCR方法檢測到其中11份病料為陽性,Nested-PCR則檢測到23份陽性.第二,該研究的基礎(chǔ)RT-PCR和Nested-PCR所擴增的片段均是橫跨IBDV的vVP2的,所以,可直接對PCR產(chǎn)物進行酶切分型研究.選用具有分型意義的兩種限制性內(nèi)切酶(Sa

3、cⅠ和SspⅠ)建立的REA,對5株屬于cIBDV的疫苗株和6株標(biāo)準(zhǔn)強毒株;屬于vvIBDV的毒株GX10、YL1、YL2和YLZ等分離毒;屬于vIBDV的美國變異E株進行酶切分析,結(jié)果與前人的研究相符.另外,針對不同強弱毒株的IBDV的VP2高變區(qū)序列的差異:設(shè)計合成了vvIBDV的型特異性引物(vvIBDa+vvIBDs),建立型特異的RT-PCR,只需一次反應(yīng)即可區(qū)分cIBDV和vvIBDV.第三,應(yīng)用該研究建立的REA和vvIB