秋水仙堿創(chuàng)制四倍體不結球白菜新材料.pdf

1、本文主要從同源四倍體不結球白菜的誘導、鑒定展開，并對二倍體和四倍體不結球白菜的主要農(nóng)藝性狀、營養(yǎng)品質、生理生化特性、抗壞血酸合成途徑相關基因表達進行比較分析，同時對二、四倍體不結球白菜進行了核型分析，為多倍體不結球白菜的遺傳育種及細胞遺傳學奠定了一定的理論基礎并提供了實踐方法。
　　1.用1.5g·L-1、2g·L-1這兩種濃度的秋水仙素對子葉期不結球白菜生長點進行不同次數(shù)的處理來進行多倍體誘導，根據(jù)形態(tài)學、解剖學、細胞學特征、農(nóng)

2、藝性狀和流式細胞儀進行倍性鑒定。結果表明，濃度為1.5g·L-1的秋水仙素處理6次的效果最好，四倍體加倍率達8.55％。與二倍體相比，四倍體葉片厚度、氣孔大小、花器官大小、花粉?？v橫徑、種子單粒徑等方面表現(xiàn)出“巨大性”，但四倍體株高減小。四倍體十葉厚、種子直徑、50粒重、花瓣長和寬、角果長、角果棱寬、角果喙長、角果橫寬、花粉粒長和寬、氣孔長和寬、氣孔保衛(wèi)細胞葉綠體數(shù)分別比二倍體增加23.2％、17.0％、31.3％、38.6％、66.3

3、％、19.6％、26.5％、54.5％、16.1％、31.2％、34.9％、64.3％、44.0％和87.5％,差異都達極顯著。四倍體的氣孔密度顯著降低。二倍體不結球白菜體細胞染色體數(shù)為2n=2x=20，四倍體染色體數(shù)為2n=4x=40。
　　2.對二、四倍體不結球白菜的主要農(nóng)藝性狀、營養(yǎng)品質和生理生化特性進行了研究。結果表明:與二倍體相比，四倍體植株顏色呈深綠色，束腰，整個生育期葉片寬度和葉柄寬度都顯著大于二倍體，而株高、葉數(shù)、

4、葉柄長度和葉片長度比二倍體有所減少。四倍體可溶性糖、可溶性蛋白、干物質和有機酸分別比二倍體增加15.7％、14.6％、16.9％和16.2％，粗纖維比二倍體減少36.4％，差異均達極顯著。四倍體的葉綠素含量、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和過氧化物酶活性均顯著高于二倍體。丙二醛含量顯著低于二倍體。
　　3.通過高效液相色譜儀對二、四倍體不結球白菜不同組織不同時期的抗壞血酸含量進行了測定，并利用實時定量PCR技術對不結球白菜中抗壞血酸L

5、-半乳糖合成途徑的6個相關基因的表達進行分析。結果表明:在幼苗時期，四倍體葉片中的還原性抗壞血酸和總抗壞血酸分別比二倍體高21.4％和10.8％，葉柄中的分別比二倍體高12.5％和10.3％，成熟時期四倍體葉片中的還原性抗壞血酸和總抗壞血酸分別比二倍體高10.3％和6.74％，葉柄中的分別比二倍體高25.9％和15.0％，差異都達極顯著水平。實時定量PCR表明無論是在幼苗時期還是在成熟時期，BcVTC1，BcGME，BcVTC2，BcV

6、TC4和BcGLDH這5個基因在葉片中和葉柄中的表達量都高于對照，而BcPMM沒有明顯變化。
　　4.以不結球白菜品種‘特矮青’的花蕾為材料，采用常規(guī)壓片法對花粉母細胞減數(shù)分裂終變期染色體進行核型分析，并與根尖有絲分裂中期的染色體核型進行比較。結果表明:二者的核型公式均為2n=2x=20=10m+8sm(2SAT)+2st，其中第1、2、3、4、6對為中著絲粒染色體，第5、7、8、9對為近中著絲粒染色體，第10對為近端著絲粒染色體

7、，第3對具有隨體，核型類型屬于2A型，為基本對稱型。長度在1.1-1.5mm的花蕾，容易獲得減數(shù)分裂終變期的分裂相。
　　5.以二、四倍體不結球白菜的幼嫩雌蕊及根尖為材料，采用常規(guī)壓片法對其進行染色體核型分析。無論是二倍體還是四倍體，幼嫩子房中處于有絲分裂中期的細胞都比根尖的多，且中期染色體形態(tài)與根尖的染色體無明顯區(qū)別，隨體均清晰可見。兩種材料獲得的二倍體不結球白菜核型公式均為2n=2x=20=10m+8sm(2SAT)+2st，