板藍(lán)根根腐病生防因子的篩選與研究.pdf

1、近年來(lái)，板藍(lán)根根腐病在一些主產(chǎn)區(qū)發(fā)生逐年加重，成為板藍(lán)根生產(chǎn)的限制因素之一。本研究試圖從從多種作物的根際土壤和中草藥粗提液中篩選到能夠用于防治板藍(lán)根根腐病的有益生防物質(zhì)，為板藍(lán)根根腐病的有效控制提供新的線索。
　　 以板藍(lán)根根腐病的主要致病菌-茄腐鐮刀菌為指示菌，對(duì)從全國(guó)各地采集的137個(gè)土壤樣品進(jìn)行了拮抗細(xì)菌的分離篩選，獲得了201株拮抗細(xì)菌，其中拮抗細(xì)菌172株，真菌29株。經(jīng)過(guò)平板對(duì)峙培養(yǎng)，獲得了對(duì)茄腐鐮刀菌的抑制效果最好

2、的3個(gè)菌株Bs-28，Bs-84和Bl-105。
　　 采用常規(guī)方法結(jié)合分子生物學(xué)方法對(duì)Bs-28、Bs-84和Bl-105菌株進(jìn)行了鑒定。根據(jù)Bs-28、Bs-84和Bl-105的16S rDNA序列與芽孢桿菌的同源性，初步將菌株Bs-28、Bs-84和Bl-105鑒定為芽孢桿菌。又根據(jù)菌株Bs-28、Bs-84和Bl-105的形態(tài)特征、培養(yǎng)性狀以及生理生化反應(yīng)，根據(jù)伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)（第八版），最終將Bs-28和Bs-84鑒

3、定為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）的兩個(gè)菌株，將菌株Bl-105鑒定為地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis）。
　　 對(duì)菌株Bs-28、Bs-84和Bl-105的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化。①Bs-28的優(yōu)化培養(yǎng)條件為：碳源為2％的玉米粉，氮源為2％的酵母粉，無(wú)機(jī)鹽為0.2％磷酸二氫鈉+磷酸氫二鈉；最適裝液量為30 mL/300 mL，最適初始接種量為1 mL，最適初始pH值為7.5；②Bs-8

4、4的優(yōu)化培養(yǎng)條件為：碳源為2％的玉米粉，氮源為2％的酵母粉，不添加無(wú)機(jī)鹽，最適裝液量為10 mL/300 mL，最適初始接種量為0.5 mL，最適初始pH值為8.0；③Bl-105的優(yōu)化培養(yǎng)條件為：碳源為0.5％的玉米粉，氮源為1％的酵母粉，無(wú)機(jī)鹽0.4％ MgSO4，最適裝液量為10 mL/300 mL，最適初始接種量為0.5 mL，最適初始pH值為6.0。
　　 以茄腐鐮刀菌為指示菌，測(cè)試了123種中草藥粗提液對(duì)菌絲生長(zhǎng)及分

5、生孢子萌發(fā)的抑制作用。結(jié)果表明：粗提液濃度為0.01 g/mL時(shí)，有99種粗提液對(duì)菌落生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用，其中北沙參的抑制率達(dá)到了100％；苦楝皮和威靈仙的抑制率大于50％，有112種粗提液對(duì)分生孢子萌發(fā)具有顯著的抑制作用，其中11種粗提液的抑制率在50％以上，而且北沙參和牛膝的抑制率達(dá)到100％。將抑制率大于50％的11種粗提液稀釋為0.005 g/mL，進(jìn)行二次篩選，發(fā)現(xiàn)北沙參對(duì)菌落生長(zhǎng)抑制率仍為100％；0.005 g/mL北

6、沙參粗提液對(duì)分生孢子萌發(fā)抑制率為74.50％，苦楝皮的次之為59.39％。北沙參和苦楝皮對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制中濃度（EC50）為3.62 mg/mL和6.63 mg/mL。
　　 將拮抗細(xì)菌與植物提取液混合發(fā)酵，分別測(cè)定了混合和單一的拮抗菌發(fā)酵液對(duì)茄腐鐮刀菌的菌絲生長(zhǎng)的抑制作用。結(jié)果顯示，混合發(fā)酵處理“Bs-28+Bs-84+Bl-105+北沙參”效果最優(yōu)。
　　 2008年在河北唐山進(jìn)行的田間試驗(yàn)測(cè)試了3株拮抗細(xì)菌和2種植