甘藍型油菜細胞質(zhì)雄性不育系L04-05A育性分析及其恢復基因的SSR標記.pdf

1、本研究以甘肅農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院育成的甘藍型油菜細胞質(zhì)雄性不育系L04-05A與恢復材料L04-05C1、L04-05C2配制的F1、F2分離群體為材料，采用分離群體分組分析法（BSA），進行了油菜細胞質(zhì)雄性不育育性恢復基因分子標記的篩選及連鎖分析。同時，對SSR（Simple sequence repeat，簡單重復序列）技術在油菜分子育種中的應用做了探索。主要結果如下： 1．對不育材料PL CMS（L04-05A）與相同保持系的P

2、ol CMS（Pol5A）、Ogu CMS的花器形態(tài)特征等研究表明，PLCMS（L04-05A）在植物學形態(tài)特征方面表現(xiàn)為花冠直徑大、花瓣大，花瓣平展；不育性徹底、穩(wěn)定，盛花期鏡檢花藥，未發(fā)現(xiàn)可育花粉粒。PL CMS與Pol CMS具有明顯差異，與Ogu CMS也有一定差異，為不同于Pol CMS、Ogura CMS的一種新的不育細胞質(zhì)類型。 2．通過對甘藍型油菜細胞質(zhì)雄性不育系L04-05A育性恢復基因與恢復材料L04-05C

3、1，L04-05C2雜交的F2群體考查，發(fā)現(xiàn)兩群體可育株與不育株的分離比例為4，30：1和2．73：1，X2C值分別為2．5384和0．3898，均小于X20．05，1，符合3：1的分離比，呈孟德爾式遺傳。這表明PLCMS（L04-05A）育性恢復基因rfp受一對顯性基因控制的簡單遺傳。 3．以甘藍型油菜基因組DNA為模板，從DNA、Taq酶、dNTPs、引物4種因素對甘藍型油菜PCR反應體系進行優(yōu)化，建立了適合于甘藍型油菜的S

4、SR優(yōu)化反應體系，反應體積為25μl，Mg2+為2．0ul（濃度為2．5mM），dNTPs為2．0ul（濃度為2．5mM），10×buffer為2．5ul（濃度為7．5mM），Taq酶0．4ul（濃度為2．5 U/ul），引物為4ul（濃度為10uM），模板DNA為1ul（濃度為15-40 ng/L）。PCR反應程序為：94℃預變性3min；94℃變性30s，51℃復性30s，72℃延伸1min，30循環(huán)，72℃延伸5min。

5、4．分別利用6號F2群體和9號F2群體構建的可育DNA混合池和不育DNA混合池對60引物進行了篩選；再用在兩個DNA混合池之間顯示有差異條帶的一對引物，對用構建混合池所用的單株進行進一步驗證，發(fā)現(xiàn)引物0113-E08擴增的分子量為150bp的條帶為可育株特異標記，在不育單株中未擴增出該條帶，重復性好。進一步用引物0113-E08分別對6號和9號F2群體進行擴增，確定0113-E08-150bp為與PLCMS（L04-05A）育性恢復基因