甘藍(lán)型油菜隱性細(xì)胞核雄性不育恢復(fù)基因的精細(xì)定位.pdf

1、本研究以7-7365AB兩型系為材料，圍繞甘藍(lán)型油菜雄性不育育性恢復(fù)基因(Ms<,3>或Ms<,4>)開展了以下工作： 1)將13個標(biāo)記的差異片段回收、克隆、測序并根據(jù)序列設(shè)計SCAR引物。結(jié)果顯示：共有5個AFLP標(biāo)記成功轉(zhuǎn)成了SCAR標(biāo)記，并且分布在目的基因的兩側(cè)； 2)2006年3月田間取樣1997份(不育株)，用獲得的SCAR標(biāo)記掃描單株，對這些標(biāo)記進(jìn)行了精細(xì)定位；2006年7月田間取樣1861份(不育株)，用上

2、述標(biāo)記再次掃描，重復(fù)驗(yàn)證。結(jié)果顯示：標(biāo)記與目標(biāo)基因的相對位置跟初步定位結(jié)果相符，在兩個群體中兩側(cè)最近標(biāo)記都是SCAR11(AFLP11)和AFLP16，SCAR11的遺傳距離分別為0．3cM和0．1cM，AFLP16的遺傳距離分別為0.1cM和0.4 cM； 3)通過PCR walking技術(shù)分離了最近兩個標(biāo)記序列的側(cè)翼序列。BLAST分析顯示：有5個標(biāo)記的序列在擬南芥中找到了同源序列，它們位于擬南芥同一條染色體上。最近兩個標(biāo)記

3、的序列在延長之后依然能夠找到同源序列，并且位置不變； 4)以標(biāo)記鎖定的擬南芥區(qū)域的序列為基礎(chǔ)，查找了甘藍(lán)型油菜同源序列，并根據(jù)這些序列設(shè)計了15對引物。結(jié)果顯示：有1對顯示出了多態(tài)性； 5)對于一部分沒有顯示出多態(tài)性的引物，將其擴(kuò)增片段測序。有些引物在不育親本和可育親本中擴(kuò)增的片段序列完全相同，在這些序列內(nèi)設(shè)計了正反兩個方向的步行引物，從兩個方向分離這些序列的側(cè)翼序列。結(jié)果顯示：同一種內(nèi)切酶在兩個親本中酶切之后得到的序列