生物科學(xué)畢業(yè)論文曼氏無(wú)針烏賊兩種顏色受精卵卵膜營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)比分析

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　曼氏無(wú)針烏賊兩種顏色受精卵卵膜營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)比分析</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí)

2、 生物科學(xué) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目錄</

3、b></p><p>　　摘要錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　Abstract錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p><b>　　引言1</b></p><p><b>　　1材料與方法3</b></p><p><b>　　1.1樣品3&l

4、t;/b></p><p>　　1.2實(shí)驗(yàn)原理3</p><p>　　1.2.1水分的測(cè)定3</p><p>　　1.2.2總灰分的測(cè)定3</p><p>　　1.2.3脂肪含量的測(cè)定3</p><p>　　1.2.4蛋白質(zhì)含量的測(cè)定4</p><p>　　1.2.5蛋白質(zhì)的氨

5、基酸及微量元素測(cè)定5</p><p>　　1.3 試劑及儀器5</p><p><b>　　1.3.1試劑5</b></p><p><b>　　1.3.2儀器6</b></p><p><b>　　1.4方法步驟7</b></p><p>　

6、　1.4.1水分的測(cè)定7</p><p>　　1.4.2灰分的測(cè)定8</p><p>　　1.4.3粗脂肪的測(cè)定9</p><p>　　1.4.4粗蛋白的測(cè)定9</p><p>　　1.4.5氨基酸及微量元素測(cè)定10</p><p><b>　　2實(shí)驗(yàn)結(jié)果12</b></p>

7、;<p>　　2.1檢測(cè)環(huán)境參數(shù)12</p><p>　　2.2檢測(cè)結(jié)果12</p><p>　　2.2.1水分側(cè)定數(shù)據(jù)12</p><p>　　2.2.2灰分?jǐn)?shù)據(jù)12</p><p>　　2.2.3粗脂肪測(cè)定數(shù)據(jù)13</p><p>　　2.2.4蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)14</p><

8、;p>　　2.2.5氨基酸及微量元素?cái)?shù)據(jù)14</p><p>　　3結(jié)果分析與討論16</p><p><b>　　3.1水分16</b></p><p><b>　　3.2灰分16</b></p><p><b>　　3.3粗脂肪16</b></p>

9、;<p><b>　　3.4粗蛋白16</b></p><p><b>　　3.5氨基酸16</b></p><p>　　3.6微量元素17</p><p>　　3.7本章小結(jié)17</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)19</b></p>

10、<p>　　致謝錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p><b>　　摘要</b></p><p>　　[摘要]本實(shí)驗(yàn)通過(guò)干燥法、550℃高溫灼燒法、索氏提取法、凱氏定氮法和儀器分析對(duì)曼氏無(wú)針烏賊（Sepiella maindroni）兩種顏色受精卵卵膜中的水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪及部分微量元素等成分進(jìn)行了分析。結(jié)果表明：曼氏無(wú)針烏賊黑色卵膜含水量為92.27

11、%，灰分含量為1.71%，粗脂肪含量為0.32%，蛋白質(zhì)含量為5.12%；曼氏無(wú)針烏賊白化卵膜含水量為92.34%，灰分含量為1.76%，粗脂肪含量為0.34%，蛋白質(zhì)含量為5.28%；曼氏無(wú)針烏賊卵膜蛋白質(zhì)中含有17種氨基酸，其中黑色卵膜含天冬氨酸（Asp），蘇氨酸（THR）和異亮氨酸（ILR)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，分別占0.50 %、0.46 %和0.43%。而白色卵膜中谷氨酸（GLU），天門冬氨酸（ASP）和亮氨酸（LEU）所占比例最高

12、，分別為14.32%、10.65%和7.95%。黑色卵膜微量元素中鎂、鉀、鈣的含量相對(duì)較高，含量分別為1100mg∕kg、367mg∕kg、528mg∕kg；其中硒的含量最低為0.23mg∕kg。白色卵膜微量元素中磷、鈣、鎂含量相對(duì)較高，含量分別為1423.2mg∕kg、313.2mg∕kg、241</p><p>　　[關(guān)鍵詞] 曼氏無(wú)針烏賊；卵膜；營(yíng)養(yǎng)成分</p><p><b

13、>　　Abstract</b></p><p>　　[abstract]By using oven drying method, 550℃ high temperature ignition method, solex method, Kjeldahl method and instrumental analysis, the contents of water, ash, crude prot

14、ein, crude fat and trace elements in two color types of egg membrane were analysised in Sepiella.maindroni.The results showed that in the black egg membrane of S.maindroni, the contents of water, ash, Fatty acids, protei

15、n were correspondingly 92.27 %, 1.71 %, 0.23 % and 5.12 %; while in the white egg membrane, the correspondi</p><p>　　[Key words] Sepiella maindroni;egg membrane;nutritional components </p><p>&l

16、t;b>　　引言</b></p><p>　　曼氏無(wú)針烏賊(Sepiella maindroni de Rochebruns),屬軟體動(dòng)物門(Mollusca)、頭足綱(Cephalopoda)、烏賊目(Sepioidea)、烏賊科(Sepiidae)動(dòng)物，為中型烏賊。個(gè)體較金烏賊小，一般胴體長(zhǎng)15cm。眼部橢圓形，后部端圓，長(zhǎng)度為寬度的2倍。眼部后面有一脈孔，常流出近紅色的腥臭腺體。肉鰭前段狹

17、窄，向后部漸寬，位于胸部?jī)蓚?cè)全緣，末端分離。腕5對(duì)，4對(duì)長(zhǎng)度相近，第4對(duì)腕較其他腕長(zhǎng)。各腕吸盤大小也相近。其膠質(zhì)環(huán)外緣具尖錐形小齒。觸腕一般超過(guò)胭長(zhǎng)，穗狹小。眼背白花斑明顯。石灰質(zhì)內(nèi)骨長(zhǎng)橢圓形，長(zhǎng)度約為寬度的3倍，角質(zhì)緣發(fā)達(dá)，后端無(wú)骨針[1]。曼氏無(wú)針烏賊的可食部分約占總體的92%。其肉潔白如玉，具有鮮、嫩、脆的特點(diǎn)，營(yíng)養(yǎng)豐富每百克肉含蛋白質(zhì)13g、脂肪0.7g以及豐富的鈣、磷、鐵。除鮮食外，還可加工制成罐頭食品或干制品。烏賊的干制品南

18、方叫螟蚨鲞，北方叫墨魚干，雄性生殖腺干品叫烏魚穗，雌性纏卵腺干品叫烏魚蛋，均為海味佳品[2]，深受百姓喜愛(ài)。其不僅肉味鮮美,營(yíng)養(yǎng)豐富,而且還具有重要的藥用價(jià)值。烏賊骨即中藥海螵蛸，具有藥用價(jià)值。我國(guó)著名的“墨</p><p>　　Correia et al，2005)。曼氏無(wú)針烏賊曾是我國(guó)傳統(tǒng)的四大海產(chǎn)之一,浙江歷史上最高年產(chǎn)量曾達(dá)6萬(wàn)多噸,占海洋捕撈產(chǎn)量的9.3%。20世紀(jì)70年代末以來(lái),產(chǎn)量連續(xù)降至最低水平,

19、占全省海洋捕撈產(chǎn)量的比重從60年代的9.3%降至3.0%以下(烏賊資源增殖研究課題組,1986)。80年代中后期，浙江沿海漁場(chǎng)曼氏無(wú)針烏賊已經(jīng)無(wú)法形成漁汛，并逐步絕跡。近年來(lái)，曼氏無(wú)針烏賊在市場(chǎng)上供不應(yīng)求，其市場(chǎng)價(jià)格也一路攀升，前景看好。修復(fù)曼氏無(wú)針烏賊資源，逐步恢復(fù)我國(guó)四大海產(chǎn)，是廣大消費(fèi)者盼望已久的迫切要求，也是海洋漁業(yè)工作者的歷史使命。</p><p>　　每年春夏之際，烏賊由深水游向淺水內(nèi)灣燈產(chǎn)卵，此謂生

20、殖徊游。產(chǎn)卵后的烏賊在近海大批死亡。我國(guó)烏賊種類較多，洄游明顯的為曼氏無(wú)針烏賊（Sepiella maindroni），盛產(chǎn)于浙江南部沿海及福建沿海；臺(tái)灣槍烏賊（Loligo formosana），分布于臺(tái)灣海峽以南海區(qū)，汕頭外海及北部灣為產(chǎn)卵場(chǎng)所。烏賊喜歡把卵產(chǎn)在海藻或木片上面，像一串串葡萄似的掛在上面。因此，沿海的漁民常把樹枝之類的東西捆成一束一束的，投入海中，引誘烏賊來(lái)產(chǎn)卵，待成群的烏賊游來(lái)產(chǎn)卵時(shí)，再?gòu)埦W(wǎng)捕撈，獲益甚厚。據(jù)青島附近

21、情況，產(chǎn)卵時(shí)適宜溫度為15℃～20℃，鹽分為30%以上。產(chǎn)卵前雌雄交配，即雄性以莖化腕將精莢送入雌體外套腔中，精莢破裂，釋放出里面的精子，精卵在外套腔內(nèi)受精。交配后不久，雌性即排出受精卵，圓形，一端稍尖，長(zhǎng)徑10mm許，成串聚積一起，表面黑色，粘于外物上俗稱“海葡萄”。烏賊卵含大量卵黃，屬端黃卵。經(jīng)不完全卵裂（盤式卵裂）以外包法形成原腸胚，直接發(fā)育。孵化出幼體與成體相似。</p><p>　　卵膜是指包繞在發(fā)育中

22、卵母細(xì)胞、成熟卵和發(fā)育中胚胎外面的單層、雙層和三層被膜,即初級(jí)卵膜、次級(jí)卵膜和三級(jí)卵膜。初級(jí)卵膜源于卵母細(xì)胞，次級(jí)卵膜和三級(jí)卵膜分別由濾泡細(xì)胞和輸卵管分泌形成。</p><p>　　為迅速恢復(fù)我國(guó)的曼氏無(wú)針烏賊資源，以人工增殖和養(yǎng)殖為手段的資源修復(fù)工作已迅速在我國(guó)部分省市展開。曼氏無(wú)針烏賊人工育苗，是目前急需了解的問(wèn)題。大量研究明，人工養(yǎng)殖雖然可以快速增加漁業(yè)產(chǎn)量，提高生產(chǎn)效率，而曼氏無(wú)針烏賊人工育苗，對(duì)于曼氏無(wú)

23、針烏賊養(yǎng)殖開發(fā)而言是極其關(guān)鍵的一環(huán)，在人工養(yǎng)殖的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖幾代后的曼氏無(wú)針烏賊出現(xiàn)白化卵，使得孵化率下降。但到目前為止，我國(guó)還從未對(duì)曼氏無(wú)針烏賊卵膜的營(yíng)養(yǎng)成分做過(guò)相應(yīng)的系統(tǒng)全面的研究。本文擬采用生化測(cè)定方法，對(duì)曼氏無(wú)針烏賊正常的受精卵卵膜和白化的受精卵卵膜中的營(yíng)養(yǎng)成分構(gòu)成進(jìn)行研究，希望通過(guò)研究更清楚全面地了解曼氏無(wú)針烏賊卵膜的營(yíng)養(yǎng)成分構(gòu)成，減少白化卵的產(chǎn)生，為以后的人工育苗做出一些貢獻(xiàn)。</p><p>&l

24、t;b>　　材料與方法</b></p><p><b>　　樣品</b></p><p>　　檢測(cè)樣品曼氏無(wú)針烏賊卵膜，采自浙江舟山大海洋科技有限公司秀山養(yǎng)殖基地，采樣時(shí)間為2010年4月20號(hào)。</p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)原理</b></p><p>　　1.2.1水分的測(cè)

25、定</p><p>　　直接干燥法:基于曼氏無(wú)針烏賊卵膜中的水分受熱以后，產(chǎn)生的蒸汽壓高于空氣在電熱干嫌箱中的分壓，使曼氏無(wú)針烏賊卵膜中的水分蒸發(fā)出來(lái)，同時(shí)，由于不斷的加熱和排走水蒸汽，而達(dá)到完全干燥的目的，曼氏無(wú)針烏賊卵膜干燥的速度取決于這個(gè)壓差的大小。</p><p>　　1.2.2總灰分的測(cè)定</p><p>　　把一定量的樣品經(jīng)炭化后放入高溫爐內(nèi)灼燒，使有機(jī)

26、物質(zhì)被氧化分解，以二氧化碳、氮的氧化物及水等形式逸出，而無(wú)機(jī)物質(zhì)以硫酸鹽、磷酸鹽、碳酸鹽、氯化物等無(wú)機(jī)鹽和金屬氧化物的形式殘留下來(lái)，這些殘留物即為灰分，稱量殘留物的重量即可計(jì)算出樣品中總灰分的含量。</p><p>　　1.2.3脂肪含量的測(cè)定</p><p>　　將經(jīng)前處理而分散且干燥的樣品用無(wú)水乙醚或者石油醚等溶劑回流提取，使樣品中的脂肪進(jìn)入溶劑中，回收溶劑后所得到的殘留物，即為脂肪（

27、或粗脂肪）。</p><p>　　一般食品用有機(jī)溶劑浸提，揮干有機(jī)溶劑后稱得的重量主要是游離脂肪，此外還含有磷脂、色素、樹脂、蠟狀物、揮發(fā)油、糖脂等物質(zhì)，所以用索氏提取法測(cè)得的脂肪，也稱粗脂肪。</p><p>　　此法適用于脂類含量較高結(jié)合態(tài)的脂類含量較少，能烘干磨細(xì)，不宜稀釋結(jié)塊的樣品的測(cè)定。食品中的游離脂肪一般都能直接被乙醚、石油醚等有機(jī)溶劑抽提，而結(jié)合態(tài)脂肪不能直接被乙醚、石油醚提

28、取，需要在一定的條件下進(jìn)行水解等處理，使之轉(zhuǎn)化成游離脂肪后方能提取，故索氏抽提法測(cè)得的知識(shí)游離態(tài)脂肪，而結(jié)合態(tài)脂肪測(cè)不出來(lái)。</p><p>　　1.2.4蛋白質(zhì)含量的測(cè)定</p><p>　　樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，其中碳和氫被氧化成二氧化碳和水，而樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)換成氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。然后加堿蒸餾，使氨逸出用硼酸吸收后再以標(biāo)準(zhǔn)鹽酸或硫酸滴定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)酸消耗

29、量可計(jì)算出蛋白質(zhì)的含量。</p><p>　　樣品消化：消化反應(yīng)方程式： </p><p>　　2NH2(CH2)2COOH+13H2SO4 =(NH4)2S04 + 6C02+12S02+16H20</p><p>　　濃硫酸具有脫水性，使有機(jī)物脫水后被炭化為碳、氫、氮。濃硫酸又有氧化性，將有機(jī)物炭化后的碳化為二氧化碳，硫酸則被還原成二氧化硫：</p>

30、;<p>　　2 H2SO4+C=2S02+2H20+CO2↑</p><p>　　二氧化硫使氮還原為氨，本身則被氧化為三氧化硫，氨隨之與硫酸作用生成硫酸銨留在酸性溶液中：</p><p>　　K2SO4﹢2NH3 = (NH4)2SO4</p><p>　　在消化反應(yīng)中，為了加速蛋白質(zhì)的分解，縮短消化時(shí)間，常加入下列物質(zhì)：</p>

31、<p>　　1)硫酸鉀 加入硫酸鉀可以提高溶液的沸點(diǎn)而加快有機(jī)物分解，它與硫酸作用生成硫酸氫鉀可提高反應(yīng)溫度，一般純硫酸的沸點(diǎn)在340℃左右，而添加硫酸鉀后，可使溫度提高至400℃以上，原因主要在于隨著消化過(guò)程中硫酸不斷地被分解、水分不斷逸出而使硫酸硫酸鉀濃度增大，故沸點(diǎn)升高，其反應(yīng)式如下：</p><p>　　K2SO4+ H2SO4=2KHSO4</p><p>　　2

32、KHSO4=K2SO4+H2O↑十+SO 3</p><p>　　但硫酸鉀加入量不能太大，否則消化體系溫度過(guò)高，又會(huì)引起已生成的銨鹽發(fā)生熱分解放出氨而造成損失：</p><p>　　(NH4)2SO4=NH3↑十(NH4)HSO4</p><p>　　2(NH4)HSO4→2NH3↑+2SO3↑十2H2O</p><p>　　除硫酸鉀外，也可

33、以加入硫酸鈉、氯化鉀等鹽類來(lái)提高沸點(diǎn)，但效果不如硫酸鉀。</p><p>　　2)硫酸銅CuS04 硫酸銅起催化劑的作用。凱氏定氮法中可用的催化劑種類很多，除硫酸銅外，還有氧化汞、汞、硒粉、二氧化鈦等，但考慮到效果、價(jià)格及環(huán)境污染等多種因素，應(yīng)用最廣泛的是硫酸銅、使用時(shí)常加入少量過(guò)氧化氫、次氯酸鉀等作為氧化劑以加速有機(jī)物氧化，硫酸銅的作用機(jī)理如下所示：</p><p>　　2Cu SO4

34、→Cu SO4+ SO2↑+O2</p><p>　　C+2CuSO4→Cu2 SO4+S02↑ +CO2↑</p><p>　　Cu2SO+2H2SO4→2CuSO4+2H2O+SO2↑</p><p>　　此反應(yīng)不斷進(jìn)行，待有機(jī)物全部被消化完后，不再有硫酸亞銅生成，溶液呈現(xiàn)清澈的藍(lán)綠色。故硫酸銅除起催化劑的作用外，還可指示消化終點(diǎn)的到達(dá)，以及下一步蒸餾時(shí)作為堿性

35、反應(yīng)的指示劑。</p><p>　　⑴蒸餾：在消化完全的樣品溶液中加入濃氫氧化鈉使呈堿性，加熱蒸餾即可釋放出氨氣反應(yīng)方程式如下：</p><p>　　2NaOH+(NH4) SO4=2NH3↑+ Na2SO4+2H2O</p><p>　?、莆张c滴定：加熱蒸餾所放出氨可甩硼酸溶液進(jìn)行吸收，待吸收完全后，再用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，因硼酸呈微弱酸性，用酸滴定不影響指示劑的

36、變色反應(yīng)，但它有吸收氨的作用，吸收及滴定反應(yīng)方程式如下：</p><p>　　2NH3+4H3BO3=(NH4) 2B4O7+5H2O</p><p>　　(NH4) 2B4O7+5H2O+2HCl=2NH4C1+4H3BO3</p><p>　　蒸餾釋放出來(lái)的氨，也可以采用硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液吸收，然后再用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液反滴定吸收液中過(guò)剩的硫酸或鹽酸，計(jì)算出總氮量

37、。</p><p>　　1.2.5蛋白質(zhì)的氨基酸及微量元素測(cè)定</p><p>　　基酸和微量元素鉀、 鈣、 納、 鎂、磷、鐵、銅、鋅、錳、硒的測(cè)定委托上海譜尼測(cè)試技術(shù)有限公司(Pony Testing International Group www.ponytesting.com)和浙江大學(xué)飼料研究所測(cè)定。</p><p>　　參照標(biāo)準(zhǔn) GB/T 50

38、09.124-2003 GB/T 5009.93-2003 </p><p>　　GB/T 5009.91-2003 GB/T 5009.90-2003 GB/T 5009.13-2003 GB/T 5009.87-2003</p><p><b>　　1.3 試劑及儀器</b>

39、;</p><p><b>　　1.3.1試劑</b></p><p>　　(1)1：4鹽酸溶液</p><p>　　(2)0.5％三氯化鐵溶液和等量藍(lán)墨水的混合液</p><p>　　(3)6mol/L硝酸</p><p>　　(4)36％過(guò)氧化氫</p><p>　　(

40、5)辛醇或純植物油</p><p>　　(6)無(wú)水乙醚或石油醚</p><p>　　(7)海砂(同水分測(cè)定)</p><p><b>　　(8)濃硫酸，</b></p><p><b>　　(9)硫酸銅，</b></p><p><b>　　(10)硫酸鉀，<

41、/b></p><p>　　(11)40％氫氧化鈉溶液</p><p>　　(12)4%硼酸吸收液：稱取29g硼酸溶解于500ml熱水中，搖勻備用。</p><p>　　(13)甲基紅—溴甲酚綠混合指示劑：5份0.2%溴甲酚綠95%乙醇溶液與1份0.2%甲基紅乙醇溶液混合均勻。</p><p>　　(14)0.1000mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)

42、溶液</p><p><b>　　1.3.2儀器</b></p><p><b>　　(1)高溫爐</b></p><p><b>　　(2)坩堝</b></p><p><b>　　(3)坩堝鉗</b></p><p><b

43、>　　(4)干燥器</b></p><p><b>　　(5)分析天平</b></p><p><b>　　(6)恒溫烘箱</b></p><p><b>　　(7)稱量瓶</b></p><p><b>　　(8)研缽</b></

44、p><p><b>　　(9)凱氏定氮儀</b></p><p><b>　　(10)索氏抽提器</b></p><p>　　凱氏定氮蒸餾裝置，如圖所示</p><p><b>　　1.4方法步驟</b></p><p>　　1.4.1水分的測(cè)定</p

45、><p>　　固態(tài)樣品必須磨碎，混勻，在磨碎過(guò)程中，要防止樣品中水分含量的變化。一般水分含量在14%一下時(shí)稱為安全水分，即在實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行粉碎過(guò)篩等處理，水分含量一般不會(huì)發(fā)生變化。但要求動(dòng)作迅速。制備好的樣品存于干燥潔凈的磨口瓶中備用。</p><p>　　測(cè)定時(shí)，精確稱取上述樣品5-10g（視樣品性質(zhì)和水分含量而定）置于已干燥、冷卻并稱至恒重的有蓋稱量瓶中，移入95-105℃常溫烘箱中，開

46、蓋烘2-4小時(shí)后取出，加蓋置干燥冷卻器內(nèi)冷卻0.5小時(shí)后稱重。重復(fù)此操作，直至前后兩次質(zhì)量差不超過(guò)2mg即算恒重。測(cè)定結(jié)果胺下式計(jì)算</p><p><b>　　水分（%）=</b></p><p>　　式中 m1——干燥前樣品與稱量瓶質(zhì)量，g</p><p>　　m2——干燥后樣品與稱量瓶質(zhì)量，g；</p><p>　

47、　m3——稱量瓶質(zhì)量，g。</p><p>　　1.4.2灰分的測(cè)定</p><p><b>　　(1)瓷坩堝的準(zhǔn)備</b></p><p>　　將坩堝用鹽酸(1：4)煮1～2小時(shí)，洗凈晾干后，用三氯化鐵與藍(lán)墨水的混合液在坩堝外壁及蓋上寫上編號(hào)，置于規(guī)定溫度(500～550℃)的高溫爐中灼燒1小時(shí)，移至爐口冷卻到200℃左右后，再移入干燥器中，

48、冷卻至室溫后，準(zhǔn)確稱重，再放入高溫爐內(nèi)灼燒30分鐘，取出冷卻稱重，直至恒重(兩次稱量之差不超過(guò)0．5mg)。準(zhǔn)確記錄坩堝重量。</p><p>　　樣品的預(yù)處理：先粉碎成均勻的試樣，取適量試樣于已知重量的坩堝中直接進(jìn)行碳化。</p><p><b>　　(2)樣品預(yù)處理</b></p><p><b>　　(3)炭化</b>

49、;</p><p>　　試樣經(jīng)上述預(yù)處理后，在放入高溫爐灼燒前要先進(jìn)行碳化處理，防止在灼燒時(shí)，因溫度高試樣中的水分急劇蒸發(fā)使試樣飛揚(yáng)；防止糖、蛋白質(zhì)、淀粉等易發(fā)泡膨脹的物質(zhì)在高溫下發(fā)泡膨脹而溢出坩堝；不經(jīng)炭化而直接灰化，碳粒易被包住，灰化不完全。炭化操作一般在電爐上進(jìn)行。把坩堝置于電爐上，半蓋坩堝蓋，小心加熱使試樣在通氣情況下逐漸炭化，直至無(wú)黑煙產(chǎn)生。對(duì)于特別容易膨脹的試樣（如含糖多的食品），可先于試樣上加數(shù)滴辛

50、醇或植物油，再進(jìn)行炭化。</p><p><b>　　(4)灰化</b></p><p>　　炭化后，把坩堝移入已達(dá)規(guī)定溫度(500～550℃)的高溫爐爐口處，稍停留片刻，再慢慢移入爐膛內(nèi)，坩堝蓋斜倚在坩堝口,關(guān)閉爐門，灼燒1小時(shí)，至灰中無(wú)碳粒存在。打開爐門，將坩堝移至爐口處冷卻至200℃左右，移入干燥器中冷卻至室溫，準(zhǔn)確稱重，再灼燒、冷卻、稱重，直至達(dá)到恒重。<

51、;/p><p><b>　　(5)結(jié)果計(jì)算</b></p><p><b>　　灰分（%）=</b></p><p>　　式中 m1——空坩堝質(zhì)量，g；</p><p>　　m2——樣品加空坩堝質(zhì)量，g；</p><p>　　m3——?dú)埢壹永污釄遒|(zhì)量，g。</p>

52、<p>　　1.4.3粗脂肪的測(cè)定</p><p>　　(1)樣品處理：精密稱取干燥并研細(xì)的樣品1-3g，無(wú)損地移入濾紙筒內(nèi)。</p><p>　　(2)抽提將濾紙筒放入索氏抽提器內(nèi)，連接已干燥至恒重的脂肪接受瓶，由冷凝管上端加入無(wú)水乙醚或石油醚，加量為接受瓶的2／3體積，于水浴上(溫度保持在80℃左右)加熱使乙醚或石油醚不斷的回流提取，提取時(shí)間為6～12小時(shí)，至抽提完全為止

53、。</p><p>　　(3)回收溶劑、烘干、稱重索氏提取器 取下接受瓶，回收乙醚或石油醚，待接受瓶?jī)?nèi)乙醚剩1～2ml時(shí)，在水浴上蒸干，再于105℃的恒溫箱中干燥2小時(shí)，取出放干燥器內(nèi)冷卻30分鐘，稱重，并重復(fù)操作至恒重。</p><p><b>　　結(jié)果計(jì)算 </b></p><p><b>　　脂肪（%）=</b

54、></p><p>　　式中： m2——接受瓶和脂肪的質(zhì)量，g；</p><p>　　m1——接受瓶的質(zhì)量，g；</p><p>　　m——樣品的質(zhì)量(如為測(cè)定水分后的樣品，以測(cè)定水分前的質(zhì)量計(jì))，g。</p><p>　　1.4.4粗蛋白的測(cè)定</p><p><b>　　(1)蒸餾操作</b&

55、gt;</p><p>　　將自來(lái)水經(jīng)(1)注入到蒸餾瓶夾層(2)中，使水面稍低于蒸餾瓶頸部的轉(zhuǎn)彎處。把裝有標(biāo)準(zhǔn)酸溶液的接收瓶(5)置于冷凝器(6)的下放，冷凝器的尖端插入酸液面以下，接收瓶?jī)?nèi)須先事先加入指示劑。先將樣品由漏斗(4)注入蒸餾瓶(3)中，并以少量的蒸餾水沖洗漏斗。再把氫氧化鈉溶液由漏斗(4)注入蒸餾瓶(3)中，并以少量的蒸餾水沖洗漏斗，然后用少量蒸餾水將漏斗封閉。最后加熱，將蒸餾瓶夾層(2)內(nèi)的水煮

56、沸。從蒸餾瓶(3)內(nèi)的水溶液沸騰開始計(jì)算時(shí)間，大約10分鐘即可蒸餾完畢。移開接收瓶后，再移去火源，以防倒吸。</p><p><b>　　(2)蒸餾瓶的洗滌</b></p><p>　　當(dāng)把火源移去后，蒸餾瓶(3)內(nèi)的廢液立刻六到蒸餾瓶的夾層(2)內(nèi)并經(jīng)排水管(7)排出。再把裝有蒸餾水的三角瓶置于冷凝器(6)下方，并將冷凝器的簡(jiǎn)短插入水的液面以下，再加熱至沸，然后移去

57、火源，三角瓶中的蒸餾水流到蒸餾瓶(3)內(nèi)，再倒流至蒸餾瓶的夾層(2)，由排水管(7)排出。按上述方法將一起洗滌2~3次。 </p><p><b>　　(3)消化</b></p><p>　　稱取曼氏無(wú)針烏賊肌肉樣品12.0926g于100mL凱氏燒瓶中，加入0.5gCuSO4、10gK2SO4及20mLH2SO4，搖勻進(jìn)行消化操作，小火加熱至完全炭化后加大火進(jìn)行消化

58、，溶液呈藍(lán)綠色為終點(diǎn)，冷卻后用蒸餾水定容至100ml。</p><p><b>　　(4)吸收和蒸餾</b></p><p>　　取消化稀釋液5ml于反應(yīng)管內(nèi)，經(jīng)漏斗再加入5 mL40%Naoh溶液至強(qiáng)堿性，加少量蒸餾水洗漏兜次，夾好漏斗夾用水密封，蒸餾水冷凝管預(yù)先插入盛用10ml4%硼酸吸收液中，蒸餾至混合液變綠色。</p><p>　　注：

59、蒸餾大約10min即可，將冷凝管提高液面，并用蒸餾水洗滌冷凝管尖端后停止蒸餾。</p><p><b>　　(5)滴定</b></p><p>　　用0.1000mol/LHCl滴定至微紅色為終點(diǎn)，同時(shí)作空白對(duì)照。</p><p><b>　　(6)結(jié)果計(jì)算</b></p><p><b>

60、;　　蛋白質(zhì)（％）：</b></p><p><b>　　式中： </b></p><p>　　C——鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L</p><p>　　Vl——滴定樣品吸收液時(shí)消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，ml</p><p>　　V2——滴定空白吸收液時(shí)消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，ml</p><

61、p>　　V3——用于蒸餾的消化稀釋液體積，ml</p><p><b>　　m——樣品質(zhì)量，g</b></p><p>　　M氮——氮的摩爾質(zhì)量，14.01g/mol</p><p>　　F——氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)，6.23。</p><p>　　1.4.5氨基酸及微量元素測(cè)定</p><p&g

62、t;<b>　　(1)氨基酸的測(cè)定</b></p><p>　　氨基酸用酸水解法測(cè)定，儀器：日立L-8900，準(zhǔn)確稱取一定量樣品，使樣品氨基酸總量在50～75mg范圍內(nèi)，置于20-30mL安瓿瓶中，加入10mL的6mol/L鹽酸，振搖使樣品溶解或使樣品均勻分散于溶液中，將安瓿瓶充氮后封口，然后置110±1℃烘箱中水解24小時(shí)，取出冷卻，打開安瓿瓶，在氮吹儀上吹至近干，將水解液全部轉(zhuǎn)

63、移到50mL容量瓶?jī)?nèi)，用超純水或去離子水定容至刻度，混勻，供衍生使用。</p><p>　　由于測(cè)定了色氨酸,因此本法還采用了堿水解法。</p><p><b>　　(2)脂肪酸的測(cè)定</b></p><p>　　脂肪酸用氣相色譜分析法測(cè)定：稱取適量的肌肉樣品,放入組織搗碎機(jī)中攪碎,真空干燥,干燥樣品用苯)石油醚(1B1體積比)提取脂肪后,用0

64、.4mol#L-1氫氧化鉀)甲醇液酯化30min,然后熱水浴濃縮,加水分層,取上層液在氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀上測(cè)定分析,由微機(jī)按面積歸一化法自動(dòng)計(jì)算脂肪酸各組分含量"氣相色譜條件:色譜柱美國(guó)J&W公司產(chǎn)的DB-WAX交聯(lián)石英毛細(xì)管柱(柱長(zhǎng)30mm,內(nèi)徑0.25mm);起始柱溫180e,以1e#min-1程序升溫至220e直至所有組分全部流出,進(jìn)樣口離子源溫度200e,EI70Ev,載氣為高純氦,流量1mL#min-1&l

65、t;/p><p><b>　　2實(shí)驗(yàn)結(jié)果</b></p><p><b>　　2.1檢測(cè)環(huán)境參數(shù)</b></p><p>　　以上檢測(cè)環(huán)境均在室溫20℃,濕度30﹪RH的環(huán)境下進(jìn)行的檢測(cè)。</p><p><b>　　2.2檢測(cè)結(jié)果</b></p><p>

66、　　2.2.1水分側(cè)定數(shù)據(jù)</p><p><b>　　表2.1黑色卵膜</b></p><p>　　Tab2.1black egg membrane</p><p><b>　　表2.2白色卵膜</b></p><p>　　Tab2.2white egg membrane</p>&

67、lt;p>　　M1---干燥瓶重 g</p><p>　　M2---樣品重量 g</p><p>　　N--- M1+ M2 g</p><p>　　m1--- m5為干燥后樣品和干燥瓶的重量 g</p><p>　　2.2.2 灰分?jǐn)?shù)據(jù) </p><p><b>　　表2.3黑色卵膜

68、</b></p><p>　　Tab2.3black egg membrane</p><p><b>　　表2.4白色卵膜</b></p><p>　　Tab2.4white egg membrane</p><p>　　M---坩堝重量 g</p><p>　　N--坩堝和樣品

69、的重量 g</p><p>　　m1--- m4為炭化后坩堝和樣品的重量 g</p><p>　　2.2.3 粗脂肪測(cè)定數(shù)據(jù)</p><p><b>　　表2.5黑色卵膜</b></p><p>　　Tab2.5black egg membrane</p><p><b>　

70、　表2.6白色卵膜</b></p><p>　　Tab2.6white egg membrane</p><p>　　M---燒瓶重量 g</p><p>　　N--樣品的重量 g</p><p>　　m1--- m4為抽提后燒瓶和樣品的重量 g</p><p>　　2.2.4 蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)&

71、lt;/p><p><b>　　表2.7黑色卵膜</b></p><p>　　Tab2.7black egg membrane</p><p><b>　　表2.8白色卵膜</b></p><p>　　Tab2.8white egg membrane</p><p>　　2.2.

72、5氨基酸及微量元素?cái)?shù)據(jù)</p><p>　　表2.9氨基酸和微量元素</p><p>　　Tab2.9 amino acids and trace elements</p><p><b>　　3結(jié)果分析與討論</b></p><p>　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明曼氏無(wú)針烏賊兩種顏色的受精卵卵膜的營(yíng)養(yǎng)成分中水分，灰分，脂肪和蛋白質(zhì)的

73、含量基本相似，含量相近，但是在氨基酸和微量元素的含量上具有很大的差異。</p><p><b>　　3.1水分</b></p><p>　　曼氏無(wú)針烏賊的卵膜中的主要成分為水分，黑色卵膜和白色卵膜中的水分含量均高達(dá)92.27%和92.32%。水是生命活動(dòng)所必需的物質(zhì)，含水量的多少與其生存環(huán)境有著密切的關(guān)系。烏賊胚胎的整個(gè)的胚胎發(fā)育過(guò)程均是在水中進(jìn)行的，含水量多有利于營(yíng)

74、養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸和代謝[10]。在胚胎發(fā)育的后期，水分有利于卵膜內(nèi)壓力的增大，可以幫助幼體破膜而出，這一點(diǎn)在甲殼類胚胎中也有相關(guān)的報(bào)道[11，12]。</p><p><b>　　3.2灰分</b></p><p>　　黑色的曼氏無(wú)針烏賊中的灰分含量為1.71%白色的卵膜的灰分含量為1.76%灰分含量的多少表明該物質(zhì)中無(wú)機(jī)元素含量的豐富程度，灰分含量越多表示該物質(zhì)中無(wú)機(jī)物

75、的含量越高。</p><p><b>　　3.3粗脂肪</b></p><p>　　曼氏無(wú)針烏賊的卵膜中的粗脂肪含量相對(duì)較少，黑色卵膜和白色卵膜中的粗脂肪的含量分別為0.32%和0.34%脂類是胚胎發(fā)育的主要能量物質(zhì)，為胚胎發(fā)育中組織、器官的構(gòu)成提供物質(zhì)基礎(chǔ)，又是構(gòu)成生物膜的重要成分。卵膜中的脂肪在該階段可能只要用于生物膜的構(gòu)建，不是作為能量物質(zhì)，所以不需要太大的能量

76、消耗。</p><p><b>　　3.4粗蛋白</b></p><p>　　粗蛋白的數(shù)據(jù)顯示黑色卵膜的蛋白質(zhì)含量為5.12%，白色卵膜的蛋白含量為5.28%。白色卵膜的蛋白含量比黑色卵膜的蛋白含量高0.16%，</p><p><b>　　3.5氨基酸</b></p><p>　　曼氏無(wú)針烏賊的兩

77、種顏色的受精卵的卵膜中均檢測(cè)出17種氨基酸。其中7種必須氨基酸(EAA)和10種非必須氨基酸(NEAA)。從氨基酸含量的表格中可以看出兩種顏色的卵膜的氨基酸含量相差較大。在曼氏無(wú)針烏賊的黑色卵膜中天門冬氨酸（Asp）、蘇氨酸（Thr）和異亮氨酸（Ile）含量最高，分別占0.5%、0.46%和0.43%。其中蛋氨酸（Met）和組氨酸（His）含量最少，均為0.13%。而白色卵膜中谷氨酸（GLU）、天門冬氨酸（ASP）和亮氨酸（LEU）所占

78、比例最高。分別為14.32%、10.65%和7.95%。組氨酸含量最低，為0.55%。天門冬氨酸普遍存在于生物合成作用中，它是生物體內(nèi)賴氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸等氨基酸及嘌呤、嘧啶堿基的合成前體，故天門冬氨酸在曼氏無(wú)針烏賊的兩種卵膜中含量均相對(duì)比較高。而組氨酸在兩者中含量均為最低，組氨酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)，對(duì)于成人它是非必須氨基酸，但對(duì)幼兒卻為必須氨基酸，對(duì)幼兒和動(dòng)物的成長(zhǎng)及其重要。其中兩種顏色的卵膜的氨基酸含量相差最大的是谷

79、氨酸（Glu），黑色卵膜含量為0.31%，白色卵膜為14.32%白色卵膜是黑色卵膜的56.19倍。曼氏無(wú)</p><p><b>　　3.6微量元素</b></p><p>　　曼氏無(wú)針烏賊的兩種顏色的卵膜中均檢測(cè)出9中微量元素。微量元素指動(dòng)植物體內(nèi)含量很少、需要量很少的必需元素。雖然生物體對(duì)微量元素的需求很少，但是確實(shí)生物體生長(zhǎng)發(fā)育必不可少的成分。在黑色的卵膜中鎂（

80、Mg）元素含量最高，高達(dá)1100 mg/kg，其次是鈣（Ca）元素和鉀（K）元素分別為528 mg/kg，367 mg/kg。其中硒（Se）元素含量最少，只有0.23 mg/kg。而在白色的卵膜中磷（P）元素高達(dá)1423.2 mg/kg，其次為鈣（Ca）元素和鎂（Mg）元素，含量為313.2 mg/kg和241.2 mg/kg而含量最低的則是銅(Cu)元素，含量為0.7 mg/kg。在微量元素中兩者相差最大的是硒(Se)元素，在白化的卵

81、膜中硒元素比黑色卵膜中的高117.43倍，除鉀、鈣、銅元素是黑色卵膜中含量較高之外，其他各種微量元素的含量均是白色卵膜中比較高。</p><p><b>　　3.7本章小結(jié)</b></p><p>　　綜上所述曼氏無(wú)針烏賊兩種顏色的受精卵的卵膜中水分，灰分，粗脂肪，粗蛋白含量基本相似，差別不大，但是氨基酸含量和微量元素含量的差別比較大，所有的氨基酸以及除鉀、鈣、銅以外

82、的所有微量元素全部是白色卵膜中的含量大于黑色卵膜中的含量。由此可見(jiàn)由于卵膜出現(xiàn)白化的現(xiàn)象，是的卵膜內(nèi)的氨基酸以及微量元素的含量出現(xiàn)大幅的變動(dòng)。也有可能是曼氏無(wú)針烏賊的卵內(nèi)部的營(yíng)養(yǎng)成分由于某些原因移動(dòng)到了卵膜上，使得卵膜的營(yíng)養(yǎng)成分尤其是氨基酸和微量元素的含量發(fā)生了大幅度的變化，以后應(yīng)進(jìn)一步研究白化卵形成的原因，也應(yīng)該進(jìn)一步對(duì)烏賊卵去除卵膜的那部分進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分的分析，了解是否是白化卵的內(nèi)部成分與正常的卵也存在著較大的差別。從而減少白化卵的形

83、成，增加曼氏無(wú)針烏賊育苗的成功率和成活率。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　?？姑? 吳常文等. 曼氏無(wú)針烏賊野生及養(yǎng)殖群體的生化特征及其形成機(jī)制的研究[J]. 海洋與湖澤2008, 39(3):145-151</p><p>　　董正之. 頭足類研究. 中國(guó)海洋科學(xué)研究及開發(fā). 曾呈奎, 周海鷗,李本川主編[

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