hcv抗體檢測(cè)方法與檢測(cè)策略

1、概述,結(jié)合《丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（試行）》相關(guān)內(nèi)容介紹丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)方法與檢測(cè)策略丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制,《丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（試行）》抗體檢測(cè)相關(guān)部分解讀,《丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》,4,《丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》,《規(guī)范》共分9章，首次依據(jù)不同檢測(cè)目的制定了不同的檢測(cè)策略： 1．疫情監(jiān)測(cè)相關(guān)的檢測(cè)策略 2．臨床診斷相關(guān)的檢測(cè)策略

2、 3．血液篩查相關(guān)的檢測(cè)策略,5,《丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》,《規(guī)范》首次在臨床診斷中規(guī)定了HCV抗體篩查陽(yáng)性反應(yīng)后必須進(jìn)行補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)（免疫印跡或NAT）。《規(guī)范》首次在丙肝臨床診斷中引入S/CO比值的使用?！兑?guī)范》首次在血液篩查策略中規(guī)定了核酸檢測(cè)（含pooling PCR）?！兑?guī)范》首次明確丙肝檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制。,免疫診斷的特異性： NS3 > core > NS4 > NS5

3、,HCV免疫診斷抗原的策略,NS3+coreNS3+core+NS4NS3+core+NS4+NS5,HCV抗體檢測(cè)方法,篩查試驗(yàn)補(bǔ)充試驗(yàn)：蛋白印跡試驗(yàn),酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)化學(xué)發(fā)光試驗(yàn)?zāi)z體金法快速試驗(yàn),化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（CLEIA）:HRP標(biāo)記、ELEIA、ALP標(biāo)記免疫滲濾試驗(yàn)免疫層析試驗(yàn),,,,檢測(cè)模式的改進(jìn),雅培Axysm羅氏Elecsys,雅培Architec

4、t,9,增加了核心區(qū)（C22-3）和NS3（ C33C）區(qū)抗原，檢測(cè)的敏感性和特異性較第一代RIBA有所提高。,所用抗原由核心區(qū)的C22、NS3區(qū)的C33C、NS4區(qū)的5-1-1和C100及NS5抗原組成，較之第二代試劑增加了NS5。,1990年Chiron/Ortho公司聯(lián)合研制了第一代RIBA試劑 ，兩種HCV抗原即C100-3和5-1-1分別固定在硝酸纖維素膜上 。,,,第一代,第二代,第三代,HCV確證試劑的發(fā)展,Chiron

5、RIBA HCV 3.0 SIA,,Chiron RIBA HCV 3.0 SIA,高低兩個(gè)水平的人lgG內(nèi)部質(zhì)控，必須清晰可見(jiàn)，且2>1。陽(yáng)性對(duì)照條膜上雖有HCV帶必須是2+或更強(qiáng)，hSOD條帶必須明顯的比人lgG內(nèi)部質(zhì)控水平1淺（-or+/-）。陰性對(duì)照條膜必須能夠見(jiàn)到每個(gè)HCV和hSOD條帶，且比人lgG內(nèi)部質(zhì)控水平淺。,13,HCV Blot 3.0（MP）,,,,,,,,,,,,,,,,GST質(zhì)控帶,,HCV蛋白,,

6、確證試劑,包含HCV蛋白,血清質(zhì)控帶,血清轉(zhuǎn)換期樣本,注：1，2，3為陽(yáng)性樣本4為陰性樣本,14,HCV BLOT 3.0(MP)結(jié)果分析,萬(wàn)泰HCV 抗體確證試劑,本試劑應(yīng)用重組免疫印跡法原理，在硝酸纖維素膜條上預(yù)包被HCV合成抗原、重組抗原（Core，NS3，NS4，NS5）及對(duì)照線蛋白。將硝酸纖維素膜條浸泡在稀釋的血清或血漿樣品中反應(yīng)后，加入酶標(biāo)記的抗人IgG抗體溫育，如樣品中含有HCV特異性抗體，則會(huì)形成“包被抗原-抗體-酶標(biāo)

7、二抗”復(fù)合物，加入底物液顯色終止后，根據(jù)出現(xiàn)的不同條帶情況判斷結(jié)果。,Chiron,萬(wàn)泰,每條實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，對(duì)照線-2必須出現(xiàn)，如果對(duì)照線-2不出現(xiàn)，則此條的檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。,萬(wàn)泰HCV 抗體確證試劑,丙型肝炎病毒,丙肝抗體假陰性問(wèn)題,HCV窗口期,—TRANSFUSION Volume 40, February 2000,丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)策略,HCV感染疫情報(bào)告的檢測(cè)流程,HCV血液篩查的檢測(cè)流程,HCV核酸定性檢測(cè)用于血液篩查策略

8、及結(jié)果報(bào)告,HCV臨床診斷篩查的檢測(cè)流程,HCV臨床診斷補(bǔ)充試驗(yàn)檢測(cè)流程（1）,HCV臨床診斷補(bǔ)充試驗(yàn)檢測(cè)流程（2）,HCV核酸定性檢測(cè)用于臨床診斷策略及結(jié)果報(bào)告3,檢測(cè)結(jié)果的解釋,檢測(cè)結(jié)果的解釋,HCV檢測(cè)試劑使用要求,必須使用經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)的快速試劑{詳細(xì)信息可登錄國(guó)家藥品食品管理局網(wǎng)站（http://app1.sfda.gov.cn/）查詢}。 試劑必須在有效期內(nèi)使用。 推薦使用臨床評(píng)估質(zhì)量好的試劑{中

9、國(guó)疾病預(yù)防控制中心網(wǎng)站（http://www.chinaids.org.cn）}。,2011年HCV抗體診斷試劑質(zhì)量評(píng)估結(jié)果,HCV免疫學(xué)檢測(cè)試劑,,檢測(cè)目的 檢測(cè)方法 檢測(cè)策略及 結(jié)果報(bào)告 檢測(cè)的意義,HCV抗原檢測(cè),HCV抗原檢測(cè),檢測(cè)目的HCV感染的早期診斷：窗口期，HCV（+）母親所生的嬰兒； 免疫受損或缺陷； 抗-HCV陽(yáng)性患者的病毒血癥分析； 以流行病監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了解不同人群HCV感染率及其變化趨

10、勢(shì)。,HCV抗原檢測(cè)的方法發(fā)展：一,HCV抗原檢測(cè)原理示意圖,檢測(cè)策略及 結(jié)果報(bào)告,HCV抗原檢測(cè)結(jié)果解釋,a. HCV抗原檢測(cè)陰性：HCV(-)HCV抗原初次檢測(cè)（+），需雙孔復(fù)檢： 若均為（-）則報(bào)告為HCV（-）； 若雙孔有一孔為（+），則報(bào)告為HCV（+）,HCV抗原檢測(cè)的意義,丙型肝炎病毒抗原檢測(cè),丙型肝炎病毒抗原檢測(cè)結(jié)果解釋,HCV抗原檢測(cè)試劑,,質(zhì)量保證體系循環(huán),檢測(cè)前,檢測(cè),檢測(cè)后,,,,

11、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)驗(yàn)室的管理安全性客服,患者/客戶準(zhǔn)備采集樣本,樣品的接收與登記,樣本的遞送,質(zhì)量控制,檢驗(yàn)結(jié)果的保存,報(bào)告結(jié)果,對(duì)工作人員檢測(cè)能力的資格評(píng)估,檢測(cè),質(zhì)控用材料的選擇-校準(zhǔn)品,用于對(duì)設(shè)備、試劑盒以及檢測(cè)系統(tǒng)做出校準(zhǔn)，以便于測(cè)定過(guò)程的標(biāo)準(zhǔn)化盡管這些物質(zhì)不是真正的標(biāo)準(zhǔn)品，但有時(shí)也稱其為標(biāo)準(zhǔn)品,質(zhì)控用材料的選擇-質(zhì)控品,已知濃度的被分析物兩或三個(gè)濃度 檢測(cè)時(shí)加入到病例樣本中用于驗(yàn)證檢測(cè)體系的可靠性,質(zhì)控用材料重要

12、特征,其值應(yīng)覆蓋臨床高、中、低值 與檢測(cè)樣本（基質(zhì)）相似可大量獲取小量分裝貯存最好能至少持續(xù)使用1年通常為生物材料，應(yīng)充分考慮到其生物危害性,對(duì)質(zhì)控用材料的管理,需儲(chǔ)備足量的同一批號(hào)的質(zhì)控用材料或至少夠一年使用可凍存、凍干或采用化學(xué)方法進(jìn)行保存應(yīng)保證其復(fù)原的準(zhǔn)確性應(yīng)按照生產(chǎn)商推薦的方法進(jìn)行貯存,質(zhì)控樣本的來(lái)源,適宜的診斷用樣本（患者樣本）來(lái)自下述途徑：另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室 PT/EQA 提供者市售產(chǎn)品,質(zhì)控用材料的類型

13、,定值相關(guān)數(shù)值由生產(chǎn)商提供實(shí)驗(yàn)室必須對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證非定值相對(duì)較便宜需進(jìn)行數(shù)據(jù)分析“自制產(chǎn)品” 或 “內(nèi)部產(chǎn)品” 實(shí)驗(yàn)室自行采集的血清庫(kù)予以標(biāo)明小量分裝保存，便于每日使用,Levey-Jennings 表 -對(duì)質(zhì)控值進(jìn)行記錄和評(píng)價(jià),平均值,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1SD,-2SD,-3SD,Westgard 規(guī)則,“多規(guī)則質(zhì)量控制方法” 聯(lián)合使用判定標(biāo)準(zhǔn)或質(zhì)控規(guī)則可對(duì)某種檢測(cè)分析“是否”符合質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)做出判

14、斷,Westgard 規(guī)則 (通常情況下適用于在一次檢測(cè)中同時(shí)采用兩個(gè)濃度的質(zhì)控材料的情況),12S 規(guī)則13S規(guī)則22S規(guī)則,R4S規(guī)則41S規(guī)則10X規(guī)則,Westgard – 12S 規(guī)則,“警告規(guī)則”兩個(gè)濃度的質(zhì)控材料中有一個(gè)濃度的結(jié)果在±2SD以外對(duì)可能存在的問(wèn)題提出警報(bào)不能構(gòu)成拒絕檢測(cè)的原因必須再以13S 規(guī)則對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià),12S Rule = 一種能夠引發(fā)對(duì)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)進(jìn)行仔細(xì)核查的警報(bào)規(guī)則,平均值

15、,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1SD,-2SD,-3SD,不符合12S 規(guī)則,Westgard – 13S 規(guī)則,如果兩個(gè)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)中有任意一個(gè)落在±3SD范圍以外，則表示該次檢測(cè)不符合Westgard規(guī)則應(yīng)拒絕該次檢測(cè)如果該檢測(cè)沒(méi)有破壞 13S規(guī)則，則應(yīng)對(duì)其進(jìn)行22S 規(guī)則評(píng)價(jià),13S 規(guī)則 = 如果任意一項(xiàng)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)超出+3SD 或-3SD的控制范圍，則應(yīng)拒絕該次檢測(cè),平均值,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1

16、SD,-2SD,-3SD,不符合13S 規(guī)則,Westgard – 22S 規(guī)則,如果同濃度檢測(cè)材料的兩相鄰值在同方向上超出±2SD 范圍，或同次檢測(cè)的兩個(gè)質(zhì)控?cái)?shù)值均超過(guò) ±2SD 不得對(duì)該患者的檢測(cè)結(jié)果出具報(bào)告應(yīng)采取修正措施,22S 規(guī)則 = 如果連續(xù)的兩次質(zhì)控測(cè)量值在同方向上均超過(guò)+2SD 或 -2SD的限度范圍，則應(yīng)拒絕該次檢測(cè),平均值,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1SD,-2SD,-3SD,不符

17、合22S 規(guī)則,,Westgard – R4S 規(guī)則,一個(gè)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)超過(guò)平均值的–2SD，另一個(gè)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)超過(guò)平均值的+2SD 這兩次結(jié)果的偏差范圍將超過(guò)4 SD 產(chǎn)生隨機(jī)誤差，必須拒絕該次檢測(cè),R4S 規(guī)則 = 當(dāng)一質(zhì)控測(cè)量值超過(guò)+2SD 而另一質(zhì)控值超過(guò)-2SD 的限度范圍時(shí)，應(yīng)拒絕該次檢測(cè),平均值,天,+1SD,+2SD,+3SD,-1SD,-2SD,-3SD,不符合R4S 規(guī)則,,Westgard – 41S 規(guī)則,需要提供以前

18、檢測(cè)的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)當(dāng)某一濃度下有四次連續(xù)的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)超過(guò)±1SD范圍，或兩個(gè)濃度下的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)均出現(xiàn)連續(xù)的檢測(cè)結(jié)果超出±1SD 范圍的現(xiàn)象,Westgard – 10X 規(guī)則,需要提供以往檢測(cè)的質(zhì)控資料某一濃度下有十次連續(xù)的質(zhì)控檢測(cè)結(jié)果在平均值的同一側(cè)，或兩個(gè)濃度下的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)均有五次連續(xù)的檢測(cè)結(jié)果在平均值的同一側(cè),10x 規(guī)則 = 當(dāng)10次連續(xù)的質(zhì)控檢測(cè)結(jié)果在平均值的同一側(cè)時(shí)應(yīng)拒絕該次檢測(cè),平均值,天,+1SD,+2