牛源金葡菌抗體檢測間接ELISA方法的建立與應用.pdf

1、奶牛乳房炎(bovinemastitis)是危害我國奶牛飼養(yǎng)業(yè)重大疾病之一。該病主要是由多種細菌引起，而金黃色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎的最主要病原菌。近年研究表明，疫苗接種是預防奶牛乳房炎的有效方法，但是國內(nèi)對于乳房炎疫苗免疫后抗體水平的評價研究卻不多。本研究建立了針對金黃色葡萄球菌抗體檢測的間接ELISA方法，并應用ELISA方法對奶牛乳房炎多聯(lián)滅活疫苗免疫后血清中IgG、IgG1、IgG2水平進行了檢測和分析。 本研究應用超

2、聲波處理金黃色葡萄球菌855-23株全菌體制備了裂解蛋白抗原，成功建立了檢測金黃色葡萄球菌抗體IgG的間接ELISA方法。優(yōu)化了間接ELISA最適條件，其中抗原包被濃度為8.637μg/mL，37℃包被時間為2h，酶標兔抗牛的IgG工作濃度為1:1000，抗體抗原作用時間為1h。經(jīng)交叉試驗、阻斷試驗、重復性試驗和敏感性試驗等證實建立的ELISA重復性好、特異性強、敏感性高。其中板內(nèi)變異系數(shù)0.96％-1.67％，板間變異系數(shù)為1.11％

3、-1.84％；包被的裂解抗原與其他乳房炎病原菌無交叉反應，阻斷結果為陽性；間接ELISA方法靈敏度是試管凝集試驗的50-100倍。 分別檢測30份陽性牛血清不同稀釋度的OD值，陽性血清OD值與血清中IgG、IgG1、IgG2的ELISA效價倒數(shù)的對數(shù)之間均存在線性相關性。根據(jù)擬和的標準曲線，確定了回歸方程，分別為log[ET倒數(shù)]=1.2568x+1.564(血清IgG)，log[ET倒數(shù)]=2.3327x+1.1584(血清I

4、gG1)，log[ET倒數(shù)]=0.8478x+1.5366(血清IgG2)?；貧w方程的建立為臨床免疫后根據(jù)血清OD值來預測和分析抗體水平提供了數(shù)學模型。 為了評價乳房炎多聯(lián)滅活疫苗的體液免疫效果，應用建立的間接ELISA方法對不同佐劑乳房炎多聯(lián)滅活疫苗免疫后的抗體進行檢測，結果表明鋁膠苗血清IgG、IgG1、IgG2抗體效價均高于其他佐劑苗和進口疫苗，血清IgG2抗體水平高于IgG1。進一步監(jiān)測鋁膠苗免疫后的抗體消長水平，結果，