藥物制劑微生物檢驗(yàn)

1、藥物制劑微生物檢驗(yàn),目錄,1、微生物檢驗(yàn)分類2、藥品微生物限度檢測(cè)的基本條件3、非滅菌制劑的微生物限度檢查4、滅菌制劑的無菌檢查法,一、微生物檢驗(yàn)分類,無菌檢查,凡直接進(jìn)入人體血液循環(huán)系統(tǒng)、肌肉、皮下組織或接觸創(chuàng)傷、潰瘍部位而發(fā)生作用的制品或要求無菌的材料、滅菌器具都要進(jìn)行無菌檢查。注射用制劑：注射劑、輸液、注射粉針等；眼用制劑：滴眼劑、眼用膜劑、凝膠劑、軟膏劑等；植入型制劑：植入片等；創(chuàng)面用制劑：潰瘍、燒傷及外傷用溶劑、

2、軟膏劑及氣霧劑等手術(shù)用制劑、止血海綿、骨蠟等,二、藥品微生物限度檢測(cè)的基本條件,二、藥品微生物限度檢測(cè)的基本條件,二、藥品微生物限度檢測(cè)的基本條件,由于某些供試品具有抗菌活性，在建立測(cè)定方法或原測(cè)定法的檢驗(yàn)條件發(fā)生改變時(shí)，可能影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，必須對(duì)供試品的抑菌活性及測(cè)定方法的可靠性進(jìn)行驗(yàn)證。,二、藥品微生物限度檢測(cè)的基本條件,1.檢測(cè)用量,2.檢測(cè)量,二、藥品微生物限度檢測(cè)的基本條件,二、藥品微生物限度檢測(cè)的基本條件,第三節(jié) 藥

3、品微生物限度檢測(cè)方法,微生物檢驗(yàn)基本流程,1、領(lǐng)取并配制培養(yǎng)基2、擦拭工作臺(tái)及墻壁3、開啟紫外燈滅菌1h4、進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)5、實(shí)驗(yàn)完成后再次擦拭工作臺(tái),二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,1、平皿法,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,,,,,,,,,,封閉式薄膜過濾器,傳統(tǒng)開放式薄膜過濾器,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和

4、酵母菌數(shù)檢查,二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,,細(xì)菌總數(shù)＝平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù),二、細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查,當(dāng)有兩個(gè)相鄰稀釋級(jí)的菌落數(shù)在30-300之間——比值＜＝2時(shí)，則以2個(gè)稀釋級(jí)的平均值報(bào)告。比值＞2時(shí)，則以低稀釋級(jí)的平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。,高稀釋級(jí)的平板菌落數(shù)*稀釋倍數(shù),比值=,,低稀釋級(jí)的平板菌落數(shù)*稀釋倍數(shù),細(xì)菌總數(shù)檢查表,培養(yǎng)溫度：30℃-35℃培養(yǎng)基名稱：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：14040901）,特

5、殊藥品微生物限度檢驗(yàn),三、控制菌檢查－檢查項(xiàng)目,（1）陰性對(duì)照試驗(yàn)：取稀釋液10ml按相應(yīng)供試品控制菌檢查法檢查，應(yīng)無菌生長(zhǎng)。（2）陽性對(duì)照試驗(yàn)：供試品+10~100CFU 陽性對(duì)照菌，應(yīng)檢出相應(yīng)的陽性對(duì)照菌。 （3）供試品控制菌檢查：依相應(yīng)的檢查方法進(jìn)行。,三、控制菌檢查－檢查流程,三、控制菌檢查－檢查流程,三、控制菌檢查－檢查流程,三、控制菌檢查－檢查流程,三、控制菌檢查－檢查流程,三、控制菌檢查－檢查流程,三、控制菌檢查－大腸

6、埃希菌檢查,★大腸埃希菌,三、控制菌檢查－大腸埃希菌檢查,★大腸埃希菌檢查意義,,大腸埃希菌為條件致病菌，當(dāng)人體免疫力低下或是侵入腸外組織、器官，可引起腸外感染，乃至敗血癥。也可隨人和動(dòng)物的糞便排出體外，污染環(huán)境，一旦食品、藥品、水等物品中檢出該菌，說明已受糞便污染，可能存在其他腸道致病菌和寄生蟲卵，人們飲用或服用它們則可能引起消化道傳染病。,三、控制菌檢查－大腸埃希菌檢查,乳糖膽鹽培養(yǎng)基,伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基,靛基質(zhì)試驗(yàn),,紫黑色金屬光

7、澤,玫瑰紅色液面,,麥康凱瓊脂培養(yǎng)基：大腸桿菌呈桃紅色。,I M Vi C試驗(yàn) 大腸埃希菌 +(或-） + - - 產(chǎn)氣桿菌 - - + +,吲哚（靛基質(zhì)）,甲基紅,二乙酰,枸櫞酸鹽利用,三、控制菌檢查－大腸埃希菌檢查,★大腸埃希菌檢查結(jié)果報(bào)告,MUG陽性:紫外光下管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)藍(lán)白色熒光,三、控制菌檢查－大

8、腸菌群檢查,★大腸菌群檢查意義,,大腸菌群主要存在于溫血?jiǎng)游锛S便中，隨糞便排出體外后可直接污染藥品，若產(chǎn)品中檢出該菌群，表明該產(chǎn)品受到糞便污染，可能存在腸道致病菌并引起疾病，以此作為糞便指示菌比大腸埃希菌更具廣泛衛(wèi)生學(xué)意義。,三、控制菌檢查－大腸菌群檢查,★大腸菌群檢查流程圖,三、控制菌檢查－大腸菌群檢查,★大腸菌群檢查結(jié)果報(bào)告－大腸菌群MPN表,根據(jù)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，平板上有典型菌落，并經(jīng)證實(shí)為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質(zhì)試驗(yàn)陽性，則可報(bào)

9、告被檢樣品中檢出糞大腸菌群。,三、控制菌檢查－銅綠假單胞菌檢查,★銅綠假單胞菌,三、控制菌檢查－銅綠假單胞菌檢查,★銅綠假單胞菌檢查意義,三、控制菌檢查－銅綠假單胞菌檢查,,,,,最終結(jié)果判斷,增菌培養(yǎng),供試液的制備,,,,,書寫檢驗(yàn)記錄單,分離純化,無菌落或無特征菌落,配培養(yǎng)基和稀釋液,,,★銅綠假單胞菌檢查流程圖,30-35℃,18~24h,30-35℃,18~24h,十六烷三甲基溴化銨平板,膽鹽乳糖培養(yǎng)基,黃綠色菌膜,,灰白色濕

10、潤(rùn),,氧化酶試驗(yàn),粉紅/紫紅色,,綠膿菌素試驗(yàn),鹽酸層呈粉紫色氯仿層呈藍(lán)綠色,,硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn),,N2,明膠液化試驗(yàn),明膠培養(yǎng)基（高層）,明膠液化,,,三、控制菌檢查－金黃色葡萄球菌檢查,★金黃色葡萄球菌,三、控制菌檢查－金黃色葡萄球菌檢查,,,,,革蘭染色、鏡檢→ 生化試驗(yàn):血漿凝固酶試驗(yàn),最終結(jié)果判斷,增菌培養(yǎng),供試品的處理,,,,,書寫檢驗(yàn)記錄單,分離純化,無菌落或無特征菌落,配培養(yǎng)基和稀釋液,,,30-35℃,30-35

11、℃,18-24h,24-72h,★金黃色葡萄球菌檢查流程圖,卵黃氯化鈉瓊脂,金黃色，有乳濁圈,甘露醇發(fā)酵試驗(yàn),血漿凝固酶試驗(yàn),血漿凝塊,,液態(tài)血漿,,,三、控制菌檢查－白色念珠菌檢查,★白色念珠球菌檢查意義,三、控制菌檢查－白色念珠菌檢查,革蘭染色、鏡檢芽管試驗(yàn),,,有特征菌落,1%聚山梨酯80-玉米培養(yǎng)基,,小結(jié),對(duì)于外用藥品，不得檢出銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌及白色念珠球菌；對(duì)于口服藥品，不得檢出大腸埃希菌；對(duì)于原藥材，控制

12、大腸菌群數(shù)量。,第四節(jié)、無菌檢查方法,第四節(jié)、無菌檢查方法,陽性對(duì)照試驗(yàn)=陽性對(duì)照菌液+供試品,金黃色葡萄球菌（無抑菌作用或抗G+菌）大腸埃希菌（抗G-菌為主的供試品）生孢梭菌（抗厭氧菌的供試品）白色念珠菌（抗真菌的供試品）,,陽性對(duì)照菌選用原則,陰性對(duì)照試驗(yàn)：以無菌檢查所用稀釋劑做陰性對(duì)照，不得長(zhǎng)菌,一、直接接種法,二、薄膜過濾法,50ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基,50ml改良馬丁培養(yǎng)基,陽性對(duì)照,,,,,,,30～35℃14天,