植物檢疫學(xué)植物檢疫性病毒病害

1、第七章檢疫性植物病毒,2006.10.2,檢疫性植物病毒的檢驗(yàn)方法番茄環(huán)斑病毒馬鈴薯帚頂病毒*其他檢疫性植物病毒 南方菜豆花葉病毒、可可枝腫病毒、香石竹環(huán) 斑病毒,了解檢疫性植物病毒的種類、分布及重要性，掌握植物檢疫性病毒的檢驗(yàn)方法，掌握番茄環(huán)斑病毒、馬鈴薯帚頂病毒引起病害的癥狀、病原特性、寄主范圍、病害的發(fā)生發(fā)展規(guī)律以及檢驗(yàn)措施。,檢疫性植物病毒的檢驗(yàn)方法,生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)電子顯微鏡技術(shù) 分子生物學(xué)檢測(cè)

2、技術(shù),1.生物學(xué)檢測(cè)技術(shù),原理： 植物病毒對(duì)鑒別寄主或指示植物的特異反應(yīng)。鑒別寄主譜： 對(duì)一種病毒有特殊反應(yīng)的一組寄主，一般包括3～5種不同反應(yīng)類型的寄主植物。一般包括：系統(tǒng)侵染的寄主局部侵染的寄主不受侵染的寄主,例1，TMV和CMV在田間煙草植株上都呈花葉癥，為了確定是否有TMV，或是將兩者區(qū)分開(kāi)，便可通過(guò)下列三種植物的接種來(lái)確定。,,2.血清學(xué)檢測(cè)技術(shù),原理： 抗

3、原與抗體的特異結(jié)合 方法： 免疫電泳和免疫電鏡、瓊脂雙擴(kuò)散、ELISA等。,兩種抗原相同，都與已知的抗血清反應(yīng),瓊脂雙擴(kuò)散反應(yīng)沉淀線判斷圖,,,,,,抗原1,抗血清,抗原2,,,,,,,,,,,,抗血清不?；袃煞N以上的抗體,抗原2,抗原1,抗原2,抗原1,抗血清,抗血清,兩種抗原有一定的親緣關(guān)系但不完全相同,3.電子顯微鏡技術(shù),原理： 以電磁波為光源，利用短波電子流，分辨率達(dá)到0.99

4、Å，比光學(xué)鏡要高1000倍以上,主要方法： 超薄切片、負(fù)染技術(shù)、免疫電鏡技術(shù),4.分子生物學(xué)檢測(cè)方法,分子雜交檢測(cè)PCR技術(shù)檢測(cè),分子雜交在DNA和RNA之間進(jìn)行，依據(jù)是RNA與互補(bǔ)的DNA之間存在著堿基的互補(bǔ)關(guān)系。在一定的條件下，RNA--DNA形成異質(zhì)雙鏈的過(guò)程稱為雜交。其中預(yù)先分離純化或合成的已知核酸序列片段叫做雜交探針(probe)，由于大多數(shù)植物病毒的核酸是RNA，其探針為互補(bǔ)cDNA也稱為c

5、DNA探針。,植物病毒分子探針具專一性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確快速等優(yōu)點(diǎn) 分子探針的長(zhǎng)度一般在500～1500核苷酸堿基對(duì)（bp） 常用廣譜分子探針，即包括多個(gè)不同?；曰虻暮塑账崞瑪?。,PCR技術(shù)檢測(cè),PCR （Polymerase chain reaction）聚合酶聯(lián)反應(yīng)：將極微量的靶DNA片斷，在4h左右特異性擴(kuò)增上百萬(wàn)倍。 植物病毒主要是RNA病毒，進(jìn)行PCR檢測(cè)時(shí)，需要將RNA逆轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA（cDNA)，

6、再進(jìn)行PCR，即RT－PCR技術(shù)。,檢疫性植物病毒的檢驗(yàn)方法番茄環(huán)斑病毒馬鈴薯帚頂病毒*其他檢疫性植物病毒 南方菜豆花葉病毒、可可枝腫病毒、香石竹環(huán)斑病毒,了解檢疫性植物病毒病害的種類、分布及重要性，掌握植物檢疫性病原病毒的檢驗(yàn)方法，掌握番茄環(huán)斑病、馬鈴薯帚頂病的癥狀、病原特性、寄主范圍、病害的發(fā)生發(fā)展規(guī)律以及這兩種病害的檢驗(yàn)措施。,番茄環(huán)斑病毒Tomato ring spot virus,分布： 1

7、936年，美國(guó)東部新澤西發(fā)生ToRSV至今已有30多個(gè)國(guó)家和地區(qū)發(fā)現(xiàn)有該病毒，主要集中在北美溫帶地區(qū)，即美國(guó)和加拿大。,寄主： ToRSV寄主范圍廣，包括雙子葉和單子葉植物的35個(gè)科，自然界，ToRSV主要侵染木本植物，草本及觀賞植物。,危害情況： 1975年，ToRSV侵染加拿大安大略的地區(qū)葡萄，產(chǎn)量損失76％～95％，甚至造成絕產(chǎn)。同年，ToRSV 侵染后，紐約葡萄嚴(yán)重減產(chǎn)，奧爾良懸鉤子果

8、實(shí)減產(chǎn)21％～50％。,癥狀：番茄癥狀（番茄環(huán)斑?。?枝條卷曲和壞死，嫩葉、葉柄生褐色壞死環(huán)和波紋，果實(shí)受侵染，外表產(chǎn)生環(huán)斑，灰色到褐色栓皮,葡萄上的癥狀（葡萄黃脈?。?葉黃脈、斑駁、環(huán)斑，節(jié)間縮短呈蓮蓙狀叢生，植株嚴(yán)重矮化，果實(shí)敗育變小，至絕產(chǎn)，幾年內(nèi)植株漸漸壞死。植株剝皮后，可見(jiàn)增厚的海綿狀韌皮組織及壞死凹陷,蘋(píng)果上的癥狀（apple union necrosis and decline）

9、 砧木和接穗接合部腫脹，裂開(kāi)，剝開(kāi)樹(shù)皮，樹(shù)皮內(nèi)側(cè)變厚，多孔，愈合斑連接處有不明顯的線，在這條線相對(duì)方向的形成層表面也有一類似的線，沿著這條線有一小的深溝或一條光滑的細(xì)縫，壞死的樹(shù)皮覆蓋在溝或縫上。 葉變少，變小，黃化，嫩枝呈束狀叢生，果實(shí)較小，果皮顏色加深。樹(shù)皮顏色淡紅,桃樹(shù)和李屬其它樹(shù)種上的癥狀（桃樹(shù)黃芽花葉）：沿中脈產(chǎn)生扁橢圓形羽緣狀病斑，由灰綠色變?yōu)闇\綠色，芽發(fā)育成為小而變形的叢生葉，成

10、淺黃色而死亡。（桃樹(shù)莖痘?。簶?shù)皮變厚，發(fā)軟，海綿狀，剝開(kāi)樹(shù)皮，樹(shù)干上出現(xiàn)凹陷的痘斑和溝槽。葉片褪綠，葉芽發(fā)育推遲，落葉提前，果實(shí)畸形，果味變異，提前成熟和脫落。,復(fù)盆子上的癥狀：侵染當(dāng)季不表現(xiàn)癥狀，第二年葉片表現(xiàn)黃色斑駁，條紋或脈褪綠，葉片生長(zhǎng)推遲，病株表現(xiàn)不結(jié)果或形成易碎果懸鉤子上的癥狀：植株矮化，小果并減產(chǎn)，幼齡植株葉片出現(xiàn)褪綠環(huán)斑。第二年，葉片癥狀不明顯，但新葉出現(xiàn)偏上性，早落。第三年有10％～80％的果枝死亡。,病原：

11、 番茄環(huán)斑病毒 學(xué)名  Tomato ring sopt virus （ToRSV） 異名  煙草環(huán)斑病毒2號(hào) Tomato ring spot virus No.2 煙病毒13號(hào) Nicotiana virus 13 桃黃芽花葉病毒 Peach yellow bud mosaic virus 葡萄黃脈

12、病毒 Grape yellow vein virus 分類地位  線蟲(chóng)傳多面體病毒組 R/1:2.8/44+2.4/41:S/S:S/C,Ve/Ne Nepovirus,病毒特性： 等軸對(duì)稱球形，直徑28nm，在煙草汁液中，58 ℃下10min、20 ℃下2d、4 ℃下21d、－20 ℃下幾個(gè)月以后失去侵染力。接種的煙葉和黃瓜子葉汁液，稀釋限點(diǎn)為10－3，而系統(tǒng)侵染的煙草汁液，稀釋限點(diǎn)低于10－

13、1。,生物學(xué)特性： 穩(wěn)定性差，難純化，純化的病毒制劑中有兩類粒體：無(wú)RNA的蛋白外殼的T粒體和侵染性核蛋白的B粒體，B粒體具侵染性，二者血清學(xué)性質(zhì)有差異。T粒體分子量3.2×106，沉降系數(shù)53S，B粒體分子量5.5×106，沉降系數(shù)126～128S。B粒體RNA分子量2.3×106 ，占粒體重量的40％,生理分化：煙草株系：以煙草環(huán)斑病毒2號(hào)為代表，是典型株系。自然發(fā)生在溫室的煙草幼

14、苗，主要分布在美國(guó)東部。 桃黃芽花葉株系：自然發(fā)生在杏、扁桃、桃上，分布在美國(guó)西部。此株系與Price 的煙草株系較難區(qū)分。因?yàn)閮芍晗翟诓荼炯闹魃系陌Y狀相似，血清學(xué)上無(wú)區(qū)別，而且大多數(shù)分離物在桃樹(shù)上都產(chǎn)生黃芽花葉癥狀 葡萄黃脈株系：自然發(fā)生在葡萄上，在草本寄主上引起的癥狀與上述兩個(gè)株系類似，但可在豇豆上引起頂枯，血清學(xué)上也與上述兩個(gè)株系不同，主要分布在美國(guó)西部 其他株系：李屬植物上不同分離物 （李褐線分離物 Prune brown

15、 line，李莖環(huán)孔分離物Prunus stem pitting和櫻桃葉斑駁分離物Cherry leaf mottle）存在血清學(xué)差異，但差異不明顯。櫻桃葉斑駁分離物不能由Xiphinema californicum傳播,傳播： 田間傳播介體是劍線蟲(chóng)屬，其中Xiphinema americanum優(yōu)勢(shì)種群。成蟲(chóng)和三齡幼蟲(chóng)都能傳毒，在病根部飼毒1h可獲得病毒，而后在1h內(nèi)又能將病毒傳給接種植物。

16、由繁縷、千日紅、懸鉤子、大豆、弗吉尼亞草莓、煙草、番茄和紅三葉草等植物的種子傳播。 雜草是重要的田間毒源。 遠(yuǎn)距離傳播依靠植物的種子和苗木調(diào)運(yùn)進(jìn)行,檢驗(yàn)方法：生物學(xué)檢測(cè)：黃瓜：局部褪綠斑，而后產(chǎn)生系統(tǒng)褪綠和斑駁莧色藜和昆諾阿藜：小局部褪綠斑，后系統(tǒng)侵染頂端枯死菜豆：局部褪綠斑或壞死斑，系統(tǒng)癥狀為皺縮和頂葉壞死煙草：局部壞死或環(huán)斑，幼葉系統(tǒng)褪綠環(huán)紋和斑紋，后隱癥矮天牛：局部壞死斑，

17、幼葉壞死和枯萎番茄：局部壞死斑，幼葉產(chǎn)生系統(tǒng)斑駁和壞死豇豆：局部褪綠斑或壞死斑，引起系統(tǒng)侵染，植株頂端壞死,形態(tài)學(xué)檢測(cè)：浸漬法制樣，電鏡觀察病毒粒體形態(tài)，測(cè)量粒體大小。 血清學(xué)和PCR檢測(cè)：瓊脂雙擴(kuò)散、免疫電鏡、酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)等。,檢疫和防治：禁止從病區(qū)引進(jìn)大豆種子、煙草種子、唐菖蒲球莖及桃、杏、櫻桃、葡萄和草莓等植物的無(wú)性材料。病區(qū)應(yīng)采用無(wú)毒種子和苗木，施用藥劑消滅介體線蟲(chóng)，清除雜草減少毒源。,馬鈴薯帚頂病毒Potat

18、o mop－top virus,分布： 1965年首先在英國(guó)發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)已傳入歐美多個(gè)國(guó)家。日本（1981）、美國(guó)（2002）報(bào)道。中國(guó)未見(jiàn)報(bào)道。寄主：馬鈴薯是唯一的自然寄主。人工接種可侵染多種寄主植物。,危害性： 在英格蘭，北愛(ài)爾蘭和蘇格蘭受侵薯塊的產(chǎn)量損失可達(dá)26％。此外該病為害后，病斑常影響到薯塊的外表，是商品價(jià)值降低。馬鈴薯在儲(chǔ)藏期間，若儲(chǔ)藏不當(dāng)，病斑在薯塊上擴(kuò)展，進(jìn)一步影響馬鈴薯的經(jīng)濟(jì)

19、價(jià)值。1966年和1967年P(guān)MTV在秘魯曾引起產(chǎn)量損失30－40％和75％。,癥狀： 植株：-------帚頂、奧古巴花葉和褪綠V型紋 帚頂癥狀：節(jié)間縮短，葉片簇生，植株矮化，束生奧古巴花葉：不規(guī)則黃色斑，環(huán)紋和線狀紋褪綠V型紋：褪綠V型紋癥狀,薯塊上的癥狀 初生癥狀（Primary Symptom）當(dāng)年受侵薯塊所表現(xiàn)出的癥狀。薯表輕微隆起，產(chǎn)生壞死或部分壞死，直徑為1－5厘米的同心環(huán)紋，這種環(huán)紋并不局限于某一部分

20、，?；ゾ墼谝黄鸹蚍珠_(kāi)。將薯塊切開(kāi)，內(nèi)部表現(xiàn)為壞死弧紋或條紋，它們向薯塊內(nèi)部延伸，但這種延伸并不一定來(lái)自薯表的環(huán)紋，其延伸程度似乎與薯表的癥狀嚴(yán)重程度有關(guān)。,次生癥狀：由病的母薯長(zhǎng)成的植株所結(jié)的薯塊的癥狀?；巍⒋蟮凝斄?，網(wǎng)絡(luò)狀小龜裂，橫切面上，表面的壞死環(huán)紋環(huán)繞薯塊，內(nèi)部的壞死和這些效相連接，髓部的壞死斑常延伸至薯塊端部的生殖根上。,病原：馬鈴薯帚頂病毒 學(xué)名  Potato mop-top virus異名 

21、; Chlorogenus solani, Potato virus 11, Solanum virus 15 potato witches’ broom agent分類地位  小麥土傳花葉病毒組(Furovirus)成員,病毒特性：直桿狀，100～300nm×16～20nm，沉降系數(shù)為126S、171S和236S。外殼蛋

22、白亞基呈螺旋狀排列，螺距2.4～2.5nm，單鏈RNA，病毒的致死溫度為75～80℃，稀釋限點(diǎn)為10－3～10－4，體外存活期10周以上（20℃）。 核酸：可能為單鏈RNA,發(fā)病規(guī)律：可汁液傳染，50％的病塊莖可將病毒傳給下一代。田間主要通過(guò)馬鈴薯粉痂病菌（Spongospora subterrance）傳播，病毒在休眠孢子囊中，至少存活1年，孢子囊萌發(fā)產(chǎn)生的游動(dòng)孢子侵入寄主時(shí)，將病毒粒體帶入馬鈴薯根部。病害在多雨年份發(fā)生較重。

23、遠(yuǎn)距離通過(guò)帶病或帶菌的種薯調(diào)運(yùn)而傳播。,檢驗(yàn)方法：隔離試種，觀察系統(tǒng)癥狀。用病葉汁液接種鑒別寄主。 莧色藜：產(chǎn)生局部壞死壞斑或細(xì)環(huán)紋，可擴(kuò)大到全葉。 普通煙：在20℃以下時(shí)，接種葉上產(chǎn)生局部壞死或褪綠環(huán)斑。檢疫和防治：（1）實(shí)施檢疫，禁止疫區(qū)馬鈴薯種薯進(jìn)境。（2）病區(qū)需實(shí)行輪作，倒茬，播種無(wú)病種薯，防治粉痂病。,復(fù)習(xí)思考題,1.解釋概念：鑒別寄主、鑒別寄主譜、枯斑寄主、初生癥狀、次生癥狀、 PMTV、ToRSV2.

24、檢疫性植物病毒的檢驗(yàn)方法主要有那些？3.以番茄環(huán)斑病毒為例，說(shuō)明危險(xiǎn)性病原病毒的主要傳播途徑及其與檢疫的關(guān)系。4.PMTV在馬鈴薯上引起的主要癥狀有那些？5.ToRSV引起的主要病害有那些？6. 試述PMTV 、ToRSV的傳播途徑7. ToRSV已經(jīng)明確的株系有那些？,檢疫性植物寄生線蟲(chóng),大綱要求,了解檢疫性線蟲(chóng)病害的概況，掌握馬鈴薯胞囊線蟲(chóng)、香蕉穿孔線蟲(chóng)、松材線蟲(chóng)等病害在國(guó)內(nèi)外的分布狀況，癥狀特點(diǎn)，病害的發(fā)生發(fā)展規(guī)律，檢疫

25、方法和檢疫處理的措施。,馬鈴薯孢囊線蟲(chóng) ?馬鈴薯金線蟲(chóng) ?馬鈴薯白線蟲(chóng)香蕉穿孔線蟲(chóng)松材線蟲(chóng),馬鈴薯金線蟲(chóng) Potato golden nematode,分布： 1881年首先在德國(guó)發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)主要分布在美洲、歐洲大部分國(guó)家和亞洲少數(shù)國(guó)家，是我國(guó)外檢對(duì)象。,寄主： 對(duì)茄屬的90種植物致病 馬鈴薯是其重要的農(nóng)作物寄主 其它農(nóng)作

26、物寄主有茄子和番茄 煙草、曼陀羅、丁茄和假煙葉樹(shù)等,危害： 苗期受害: 減產(chǎn)25%-50% 英國(guó)曾因該病流行而改種其他作物 Brown(1961)報(bào)道，馬鈴薯種植前，如果每克土壤中含有20粒卵，1公頃減產(chǎn)2.5噸,癥狀： 幼苗期至成株期均可受害。 植株生長(zhǎng)不良，矮小，莖細(xì)弱 葉上生斑點(diǎn)或黃化，后萎蔫或死亡 ?扒

27、開(kāi)病根，可見(jiàn)金黃色的馬鈴薯胞囊線蟲(chóng)雌線蟲(chóng)死后形成的胞囊,病原： 馬鈴薯金線蟲(chóng) (金色球胞囊線蟲(chóng)) Globodera rostochiensis (Wollenweber) Mulvey et Stone 分類地位： 動(dòng)物界Animal 圓形動(dòng)物門(mén)Nemathelminthes 線蟲(chóng)綱Nematoda 墊刃目Tylenchida 異皮科Heteroderidae 球形胞囊線蟲(chóng)屬 Globodera,形態(tài)

28、： 雌雄異形，雄蟲(chóng)線性， 雌蟲(chóng)初為梨形，白色，后為球形，金黃色或淡黃色，最后為褐色的胞囊。 胞囊由死亡雌蟲(chóng)硬化的體壁構(gòu)成，內(nèi)含數(shù)百粒蟲(chóng)卵。,成熟雌蟲(chóng)：近球形，陰門(mén)錐沒(méi)有突起，角質(zhì)膜有鋸齒狀花紋,口針強(qiáng)大，基部呈球形，側(cè)面圓形，中食道球大，近圓形，排泄孔位于頸基部，陰門(mén)膜孔環(huán)窗式，陰門(mén)至肛門(mén)區(qū)有縱向隆起線20條左右。雄蟲(chóng)：蠕蟲(chóng)狀 ,尾短而鈍圓,角質(zhì)膜環(huán)紋清晰，唇區(qū)6～7環(huán)紋，食道線呈葉狀，覆蓋腸的腹面，側(cè)區(qū)有4條等

29、距側(cè)線。,形態(tài)測(cè)量值： 雌蟲(chóng)：口針長(zhǎng)=22.9±1.2μm；背食道腺開(kāi)口距口針基部=5.7±0.9μm；唇區(qū)至排泄孔=145.3±17.9μm；陰門(mén)裂長(zhǎng)=9.7±1.9μm；肛門(mén)至陰門(mén)盆距離=60.0 ± 10.1 μm肛陰間軸線上的角質(zhì)層脊數(shù)=16-20條。 胞囊：長(zhǎng)（不包括頸）=445±50μm；寬=382±6.1μm頸長(zhǎng)=104±1

30、9μm。 雄蟲(chóng)：L=1198±104μm；口針長(zhǎng)=27.5±1.0μm；背食道腺開(kāi)口至口針基部距離=3.4±1.0μm；交合刺長(zhǎng)= 36.3 ±4.1μm；引帶長(zhǎng)=11.3±1.6μm。 二齡幼蟲(chóng)：L=468±20μm；體寬=21.8±0.7μm；尾透明部長(zhǎng)=26.5±1.8μm；口針基部球到背食道腺口=2.6±0.6μm；

31、尾長(zhǎng)=43.9±11.6μm。,生物學(xué)： 經(jīng)卵、幼蟲(chóng)和成蟲(chóng)，雌蟲(chóng)死亡后形成胞囊 1齡幼蟲(chóng)在卵殼內(nèi)，蛻皮后2齡幼蟲(chóng)破卵殼，逸出胞囊外進(jìn)入土壤中，遇到寄主時(shí)，從近根尖端處入侵 3齡幼蟲(chóng)在根內(nèi)度過(guò) 4齡雌幼蟲(chóng)體后部露出根表面，4齡雄幼蟲(chóng)仍在根內(nèi) 第4次蛻皮，雄成蟲(chóng)從根內(nèi)逸出進(jìn)入土壤，不再取食，尋找雌蟲(chóng)交

32、配 雌蟲(chóng)大部分露于根表面，可以釋放引誘雄蟲(chóng)的物質(zhì) 雌蟲(chóng)老熟后，體內(nèi)充滿卵，最多有500粒，變成胞囊后，壁粗糙且厚，比較堅(jiān)硬，保護(hù)內(nèi)部的卵，成熟胞囊落于土壤中度過(guò)冬天。,侵染規(guī)律： 完成1代約需40天，一年生1~2代。 以胞囊在病薯塊、病根及病土中越冬。 胞囊內(nèi)卵的孵化，由馬鈴薯根分泌物所促進(jìn)，幼蟲(chóng)游出土壤中，為寄主

33、根的分泌物所引誘到達(dá)根部，以口器在細(xì)根表面開(kāi)孔，侵入根中。幼蟲(chóng)侵入后，根組織變?yōu)榫薮蠹?xì)胞，幼蟲(chóng)便取食細(xì)胞巨變的根組織而成長(zhǎng)發(fā)育。雌幼蟲(chóng)經(jīng)3次蛻皮肥大，變?yōu)榍蛐纬上x(chóng)，與此相伴，根表皮破裂，蟲(chóng)體外露，只有頸部插在根部?？杉纳趬K莖，發(fā)育至胞囊。雌成蟲(chóng)將死去的卵藏于胞囊中，形成胞囊。 孵化成熟的適溫為16～22℃,傳播途徑： 孢囊隨粘附病土的種薯或其它植物帶根繁殖材料遠(yuǎn)距離傳播。在田間孢囊隨農(nóng)具粘

34、附的土壤、風(fēng)和灌溉水近距離傳播。,影響發(fā)病因素： 1）土壤條件： 通氣透氣好的砂土、粉砂土和泥炭土有利于線蟲(chóng)自由生活階段的生存、移動(dòng)和侵入，土壤保水量50%-70%最適合線蟲(chóng)蠕動(dòng)、侵入為害。 2）氣候條件： 溫帶的低平地區(qū)、熱帶的高海拔或沿海地區(qū)適宜生育。一般土溫達(dá)到10℃時(shí)，線蟲(chóng)開(kāi)始活動(dòng)，18℃-25℃為發(fā)育和侵入寄主的最適溫度，在這種溫度范圍內(nèi)，濕度達(dá)50%

35、-70%發(fā)生較重，30℃以上和高溫，干燥條件下病害發(fā)生輕。,,檢驗(yàn)方法： 漂浮法和過(guò)篩法 刷掉或震掉塊莖表面的泥土，將泥土放在10％的硫酸鎂溶液中攪動(dòng)，使飄拂物迅速上浮，靜置后過(guò)濾，最后將濾紙晾干，鏡檢有無(wú)胞囊。胞囊的檢驗(yàn)以形態(tài)學(xué)為主。 線蟲(chóng)種類鑒定： 制作胞囊陰門(mén)錐玻片。最后顯微鏡下觀察胞囊和陰門(mén)錐形態(tài)特征。觀察內(nèi)容包括胞囊外形、外表色澤、角質(zhì)膜花紋，測(cè)量胞囊長(zhǎng)度、寬度和頸部長(zhǎng)；陰門(mén)錐要觀察膜孔

36、類型、有無(wú)陰門(mén)橋、下橋及肛門(mén)到陰門(mén)之間的隆起脊紋數(shù)，測(cè)量陰門(mén)膜孔長(zhǎng)度、寬度、陰門(mén)裂長(zhǎng)度和肛陰距離。,防治： (1) 嚴(yán)格檢疫 (2)在該病發(fā)生地區(qū)實(shí)行10年以上輪作，不種植馬鈴薯和番茄。 (3)選育抗病品種。主要抗病品種有：Hudson、Wauseon、Atlantic、Belchip和Campbell等。早熟品種有避病作用。 （4） 藥劑處理土壤。棉隆或棉隆與DD混劑、涕滅威、克線磷混用,馬鈴薯白金線蟲(chóng)

37、Potato white nematode,分 布同馬鈴薯金線蟲(chóng)寄主植物同馬鈴薯金線蟲(chóng)危害情況同馬鈴薯金線蟲(chóng),馬鈴薯金線蟲(chóng)和白線蟲(chóng)重要的形態(tài)區(qū)別 : 1.  金線蟲(chóng)的肛陰距比白線蟲(chóng)長(zhǎng)。金線蟲(chóng)60μm白線蟲(chóng)44μm。 2 .雌蟲(chóng)角質(zhì)膜花紋：金線蟲(chóng)為鋸齒狀花紋；白線蟲(chóng)為網(wǎng)狀花紋。 3.胞囊的肛陰距之間角質(zhì)膜表皮脊紋數(shù)不同：金線蟲(chóng)16-20條；白線蟲(chóng)為8-12條。4.雄蟲(chóng)口針基部球至背食道腺開(kāi)口距離不同，金線蟲(chóng)

38、小于白線蟲(chóng)。5.兩種線蟲(chóng)不能交配，繁殖后代。,生物學(xué)同馬鈴薯金線蟲(chóng)。傳播途徑同馬鈴薯金線蟲(chóng)。 檢疫與防治同馬鈴薯金線蟲(chóng)。,香蕉穿孔線蟲(chóng)Banana root burrowing nematode,分布： 1890年首先在斐濟(jì)發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)幾乎遍布于世界上大多數(shù)香蕉產(chǎn)區(qū)，在熱帶和亞熱帶地區(qū)廣泛存在。是太平洋諸島、象牙海岸、中南美洲、加勒比海諸島、東南亞和印度次大陸香蕉生產(chǎn)的重要問(wèn)題。是我國(guó)一類外檢對(duì)象。,寄

39、主： 寄主范圍廣泛，據(jù)報(bào)道可危害300多種單子葉和雙子葉植物，其中在香蕉、麻蕉、甘蔗、生姜、辣椒、姜芋、柑橘、鱷梨、咖啡、茶、柿子、枇杷、番石榴、可可椰子、椰子樹(shù)、蕃棗以及很多室內(nèi)觀賞植物等上都造成較大的經(jīng)濟(jì)危害。,危害及重要性： 香蕉穿孔線蟲(chóng)根腐病(radopholus root)、黑頭病(black head)、黑頭倒塌病(blackhead toping disease)和衰退病(decline)。

40、 香蕉受害后，造成減產(chǎn)40%～90%，印度尼西亞的邦加島，由于穿孔線蟲(chóng)為害，90％的香蕉被毀，損失慘重。 主要是危害根部，抑制生長(zhǎng)，降低產(chǎn)量，植株倒毀，縮短蕉園的壽命。,癥狀： 危害根部，造成根腐，根量減少，直到剩下很少的短根。,病原線蟲(chóng)： Radopholus similis （Cobb） Thorne分類地位： 動(dòng)物界Animal 圓形動(dòng)物門(mén)Nemathelminthes 線

41、蟲(chóng)綱Nematoda 墊刃目Tylenchida 墊刃亞目（Tylenchina）、墊刃總科（Tylenchoidea ）、短體線蟲(chóng)科 （Pratyl－ enchidae）、短體線蟲(chóng)亞科 （Pratylenchuinae）、穿孔線蟲(chóng)屬 （Radopholus）,形態(tài)特征： 雌雄同形，蠕蟲(chóng)狀。,雌成蟲(chóng)：細(xì)長(zhǎng)，體側(cè)有4條刻線，唇部低，與體軀無(wú)明顯分界，頭骨骼發(fā)達(dá)，前方低，呈弧狀，側(cè)

42、面突出至唇部的后方?？卺橀L(zhǎng)17～20?，基部球發(fā)達(dá)，圓球狀。背食道腺孔接近口針基部，排泄孔在食道的峽部。食道腺延長(zhǎng)，覆蓋腸的前端背面。雙卵巢，陰門(mén)約在體中部。尾長(zhǎng)圓錐形或不規(guī)則形，側(cè)尾腺乳突接近尾的中部。 雄蟲(chóng)：唇部圓形至圓錐形，高度約等于唇基的寬度，與體軀可明顯區(qū)分，頭骨骼及口針極度退化，食道腺覆蓋食道，尾長(zhǎng)圓錐形，交合傘伸至近尾部或包裹尾部，交合刺1對(duì)，19～22 ?，有引帶,測(cè)量數(shù)值：雌蟲(chóng)：L=0.50-0.85mm；a

43、=30.9-39.5；b=8.4-11.8；c=21.6-31.6；V=68.8-82.4；口針長(zhǎng)=10.4-15.6μm雄蟲(chóng)：L=0.49-0.84mm；a=26.9-45.3；b=8.2-10.9；c=17.2-25.5；口針長(zhǎng)=10.4-15.6μm；交合刺長(zhǎng)=20.8-31.2μm,生物學(xué)特性： 內(nèi)寄生可遷移性線蟲(chóng) 最適生長(zhǎng)溫度24～30℃ 雌蟲(chóng)在根組織中

44、產(chǎn)卵，產(chǎn)卵期約15d，從卵至卵完成一個(gè)生活史，在24-32℃時(shí)為20-25d，24-27℃時(shí)為18-20d。幼蟲(chóng)及雌蟲(chóng)不侵染寄主。雌蟲(chóng)經(jīng)常有受精作用，沒(méi)有孤雌生殖。卵3-7天即可孵化。雌蟲(chóng)平均每天產(chǎn)卵2粒（0.5-6粒/天）。雄蟲(chóng)不能侵入、取食完整無(wú)損的根部。,傳播途徑 近傳播距離，主要通過(guò)植物根系伸長(zhǎng)和相互交織接觸傳染，也可以通過(guò)灌溉水進(jìn)行傳播。自身移動(dòng)的距離每月15-20cm。田間管理用的農(nóng)具，人和畜攜帶的泥土以及水

45、流都可傳播線蟲(chóng)。 遠(yuǎn)距離傳播，主要通過(guò)帶線蟲(chóng)的種植材料的調(diào)運(yùn)。,發(fā)生規(guī)律： 帶蟲(chóng)的種植材料是新病區(qū)的初侵染源，也是病區(qū)再次蔓延的蟲(chóng)源 在完全沒(méi)有寄主根和活球莖碎片的土壤中，線蟲(chóng)存活期不超過(guò)6個(gè)月；也有報(bào)道認(rèn)為，土壤中的香蕉穿孔線蟲(chóng)，在不種蕉情況下需5年才能全部死亡，可能由于田間有替代的雜草寄主。,線蟲(chóng)的各齡蟲(chóng)態(tài)都能侵染寄主，可由根的任何部位侵入，大多數(shù)從根尖附近侵入，線

46、蟲(chóng)在根內(nèi)來(lái)回移動(dòng)，在細(xì)胞間吸取汁液，造成根組織內(nèi)形成空洞，入侵后10～14d后，侵染點(diǎn)附近周?chē)?xì)胞壞死，初現(xiàn)病斑，21～28d后，內(nèi)部擴(kuò)大成棕紅色的孔道，貫穿皮層，皮層中腔擴(kuò)大，病根表面產(chǎn)生明顯的邊緣隆起的縱向裂縫。卵產(chǎn)在病組織內(nèi)。組織壞死后線蟲(chóng)發(fā)生轉(zhuǎn)移或離開(kāi)根部進(jìn)入土壤，然后從別的部位再侵入根部。,檢驗(yàn)方法：（1）染病的香蕉根部和球莖組織呈紅褐色或黑色，可據(jù)此檢驗(yàn)判斷。（2）將香蕉根部和根莖粘附的土壤洗凈，檢出表面有紅褐色至黑褐色

47、病痕、壞死或裂縫者，剪成小段，放入玻皿內(nèi)加清水，解剖鏡下觀察。 (3)將帶病痕的須根、根莖、根皮剪碎成小段，用漏斗法或淺盤(pán)法分離。,防治①嚴(yán)格實(shí)行檢疫制度②引種的蕉類球莖和種苗消毒處理③輪作④綜合防治：一旦發(fā)生穿孔線蟲(chóng)病，可采用“熱、毒、餓”綜合治理措施。熱就是將發(fā)病的蕉頭、蕉根集中煮沸半小時(shí)或挖一個(gè)大坑，切碎蕉頭，深埋高溫漚制。毒就是將病田土壤用殺線劑，如呋喃丹、益舒寶，米樂(lè)爾等進(jìn)行消毒處理。餓就是病田堅(jiān)持休耕2－3年，

48、休耕期間定期一個(gè)月噴1－2次除草劑，要求不長(zhǎng)雜草，使可能殘留在土壤中的極少線蟲(chóng)，由于缺乏營(yíng)養(yǎng)而死亡。,松材線蟲(chóng)Pine wilt nematode,分布：1905年在日本長(zhǎng)崎、九州及其周?chē)l(fā)生，目前主要發(fā)生于美國(guó)、墨西哥、加拿大、德國(guó)、意大利、葡萄牙、朝鮮、日本、韓國(guó)和我國(guó)臺(tái)灣、香港、澳門(mén)、江蘇、安徽、廣東、山東、浙江、湖北、上海等地。,寄主：主要危害松屬植物，也侵染冷杉屬、云杉屬、雪松屬和落葉松屬等。最感病的樹(shù)種是日本赤松、日本

49、黑松、硫球松、歐洲赤松和歐洲黑松等。中國(guó)自然高感樹(shù)種是日本黑松，也有一定數(shù)量的馬尾松自然發(fā)病。,危害和重要性：又稱松樹(shù)萎蔫病，是松樹(shù)的一種毀滅性流行病。是國(guó)際國(guó)內(nèi)重要的檢疫對(duì)象，屬于危及國(guó)家生態(tài)安全的重大病害。松樹(shù)一旦感染該病，最快的40天左右即可枯死，3－5年間便造成大面積毀林的惡性災(zāi)害。在日本，1979年損失木材240萬(wàn)立方米，我國(guó)于1982年，在南京發(fā)現(xiàn)該病害，當(dāng)年死樹(shù)僅200多株，到1984年累積5萬(wàn)多株，1986年達(dá)21萬(wàn)株

50、。我國(guó)政府把該病害列為二類危險(xiǎn)性有害生物。該病的毀滅性在于：致病力強(qiáng)，寄主死亡速度快；傳播快，且常常猝不及防；一旦發(fā)生，治理難度大。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國(guó)自1982年發(fā)生該病后的10年間，發(fā)生面積約達(dá)38000hm2，造成松樹(shù)死亡1400000株以上，損失木材50000m3。用于病害的防治經(jīng)費(fèi)達(dá)645萬(wàn)元 。不僅給國(guó)民經(jīng)濟(jì)造成巨大損失，也破壞了自然景觀及生態(tài)環(huán)境，更對(duì)我國(guó)松林資源構(gòu)成嚴(yán)重威脅。,癥狀：任何樹(shù)齡均可發(fā)病。外部癥狀是針葉陸續(xù)變

51、為黃褐色乃至紅褐色，萎蔫，最后整株枯死。病害發(fā)展過(guò)程分4個(gè)階段：（l）松樹(shù)外觀正常，樹(shù)脂分泌減少蒸騰作用下降，在嫩枝上往往可見(jiàn)松褐天?？惺硺?shù)皮的痕跡；（2）針葉開(kāi)始變色，樹(shù)脂分泌停止，除松褐天牛補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)的痕跡外，還可發(fā)現(xiàn)產(chǎn)卵刻槽；（3）大部分針葉變?yōu)辄S褐色，萎蔫，可見(jiàn)松褐天牛的蛀屑；（4）針葉全部變?yōu)辄S褐色至紅褐色，病樹(shù)整株干枯死亡。,致病機(jī)制 ： 線蟲(chóng)從傷口進(jìn)入松樹(shù)木質(zhì)部，寄生在樹(shù)脂道中，大量繁殖后遍及

52、全株，導(dǎo)致松樹(shù)木質(zhì)部?jī)?nèi)髓射線薄壁組織細(xì)胞受到破壞，管胞形成受到抑制，水分輸導(dǎo)受阻，呼吸作用加強(qiáng)，樹(shù)脂分泌減少至最后停止，蒸騰作用減弱直至松樹(shù)迅速死亡。,病原線蟲(chóng)：嗜木質(zhì)傘滑刃線蟲(chóng) Bursaphelenchus xylophilus （Steiner & Buhrer）Nikle分類地位：動(dòng)物界Animal 圓形動(dòng)物門(mén)Nemathelminthes 線蟲(chóng)綱Nematoda 墊刃目Tylenchida 滑刃線蟲(chóng)科Aphe

53、lenchoididae 傘滑刃屬 Bursaphelenchus,形態(tài)特征：雌雄同形，蠕蟲(chóng)狀。 雌成蟲(chóng)：細(xì)長(zhǎng)，唇區(qū)隆起，無(wú)唇環(huán)，口針基部稍膨大，食道滑刃型，中食道球大，食道腺覆蓋腸端，排泄孔位于食道和腸交界處，神經(jīng)環(huán)正好在中食道球下面；陰門(mén)前部有陰門(mén)蓋覆蓋著，后陰子宮囊很長(zhǎng)，尾部寬園，少數(shù)有指狀突。 雄成蟲(chóng)：交合刺大型，弓形，1對(duì)，不愈合，有喙?fàn)钔黄穑补?，末端尖銳，有交合傘，無(wú)引帶，有卵圓形的尾翼尾部還有兩對(duì)尾

54、突。,生物學(xué)特性： 發(fā)育溫度范圍9.5～33 ℃，在25 ℃下4～5d完成生活周期，-17℃下可存活5個(gè)月。雌蟲(chóng)產(chǎn)卵期為28d，每蟲(chóng)產(chǎn)卵平均79粒。生活史包括繁殖周期和分散周期，繁殖周期在生長(zhǎng)季節(jié)，以卵、1～4齡幼蟲(chóng)和成蟲(chóng)反復(fù)繁殖；分散周期是線蟲(chóng)的休眠和傳播時(shí)期，屬于3齡和4齡幼蟲(chóng)。,傳播：該病借助于天牛的遷飛自然擴(kuò)散，天牛幼蟲(chóng)在越冬和化蛹期間分泌脂肪酸在蛹室積累，引誘3齡幼蟲(chóng)向蛹室集中，后變?yōu)?齡，受天牛幼蟲(chóng)羽化時(shí)

55、產(chǎn)生的CO2引誘而轉(zhuǎn)移到天牛成蟲(chóng)體表，再通過(guò)腹部氣門(mén)進(jìn)入天牛氣管，聚集在腹部，再?gòu)臍忾T(mén)出來(lái)，移至尾部，當(dāng)天牛成蟲(chóng)在健樹(shù)上取食和在衰弱樹(shù)上產(chǎn)卵時(shí)，線蟲(chóng)即從傷口侵入寄主。 遠(yuǎn)距離傳播通過(guò)人為調(diào)運(yùn)患病松材及其制品等進(jìn)行。,傳播介體：在自然條件下，墨天牛是松材線蟲(chóng)的傳播媒介，主要有松墨天牛、云杉墨天牛、卡羅來(lái)納墨天牛、白點(diǎn)墨天牛、南美墨天牛等。松墨天牛是最重要的傳播介體。傳播距離1～2km，主要分布于日本、中國(guó)吉林及韓

56、國(guó)等?？_來(lái)納墨天牛在美國(guó)是主要的傳播介體傳播方式：?補(bǔ)充取食期傳播；?產(chǎn)卵期傳播,發(fā)生規(guī)律：線蟲(chóng)隨天牛取食自傷口侵入，通過(guò)皮層和松脂道進(jìn)入木質(zhì)部，6～9d后，木質(zhì)部細(xì)胞死亡，停止分泌松脂，出現(xiàn)外部癥狀，線蟲(chóng)數(shù)量急劇增加，30d達(dá)到最高峰。后期，環(huán)境條件不適應(yīng)，線蟲(chóng)以3齡幼蟲(chóng)越冬。高溫干旱利于發(fā)病，夏季40d內(nèi)降水少于30mm，55d以上平均氣溫高于25℃，會(huì)嚴(yán)重發(fā)生。發(fā)病最適溫度20～30℃，低于20℃，高于33℃不發(fā)病。,檢疫和

57、防治：（1）嚴(yán)格檢疫制度，不從病區(qū)輸入松苗和松原材（2）在天牛成蟲(chóng)期，噴灑0.5％殺螟松乳劑，每株2～3kg；飛機(jī)噴灑，濃度提高到3％，每公頃60kg，持效期1個(gè)月以上。（3）晚夏和秋季用殺螟松噴灑病樹(shù)，每平方米樹(shù)表用藥400～600ml，可完全殺死樹(shù)皮下的天牛幼蟲(chóng)。（4）汰除病樹(shù)，殘留樹(shù)樁要低，并剝?nèi)?shù)樁的樹(shù)皮，連同樹(shù)梢集中燒毀。原木可用溴甲烷熏蒸，或加工成2cm以下的薄板。此項(xiàng)措施應(yīng)在天牛羽化前完成。,復(fù)習(xí)思考題,1．試述馬