梅毒螺旋體抗體的

1、梅毒螺旋體抗體的檢測原理和臨床意義,裴娟,問題及概述,實驗室檢測注意事項及臨床意義 ? 梅毒實驗室檢測策略探討,問題-1,下列哪些說法是錯的？① 一旦感染梅毒，TPPA常終身陽性 ② TPPA可用于療效判斷 ③梅毒孕婦所生嬰兒RPR和TPPA檢測結果陽性 可診斷為胎傳梅毒 ④ RPR只能用于梅毒初篩,問題-1（續(xù)）,下列哪些說法是錯的？ ⑤ ELISA法不能用于初篩 ⑥核酸檢測方法可以用于梅毒的血液標本檢

2、測 ⑦二期梅毒時，TPPA和RPR兩種血清學試驗敏感性均 可達100％,問題-2,開展RPR/TRUST試驗時應采用下面哪種儀器或方法進行抗原抗體凝集反應：① 水平旋轉儀② 振蕩器 ③手工水平搖動 ④混懸器,問題-3,下列描述正確嗎？ “TRUST法對早期、晚期梅毒檢測的敏感性低及治療后梅毒不敏感。例如一組272例抗-TP確認陽性樣本，而其只檢測到105例，敏感性為 38.2%” ” ，這樣的說法對嗎？,梅毒概述,梅毒概述

3、,梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種慢性、系統(tǒng)性的全身性傳播疾病。人受感染后，螺旋體很快傳播全身，幾乎可以侵犯全身各個組織和器官，臨床表現多樣，且時顯時隱，病程較長。,梅毒概述,梅毒病人是唯一的傳染源。性接觸傳染占95%。主要通過性交由破損處傳染，梅毒螺旋體大量存在于皮膚粘膜損害表面，也見于唾液、乳汁、精液、尿液、陰道分泌物。梅毒孕婦可通過胎盤使胎兒在宮內感染或出生時接觸母親有病損的產道受染。未經治療的病人在感染一年內最具傳染性，隨病期延長

4、，傳染性越來越小，病期超過4年者，通過性接觸無傳染性。,梅毒概述,臨床上分三期：Ⅰ期（初期）梅毒：感染后3周左右局部出現無痛性硬下疳。4-8周后，硬下疳自愈。Ⅱ期（中期）梅毒：發(fā)生于硬下疳出現后2-8周。Ⅲ期（晚期）梅毒：發(fā)生于感染后2年后，亦可長達10-15年。Ⅰ 、Ⅱ期傳染性強，但破壞性較小。 Ⅲ期螺旋體少但破壞性大，若侵害中樞神經系統(tǒng)和心血管，可危及生命。,梅毒概述,螺旋體抵抗力極弱，對溫度和干燥特別敏感，離體后在干燥環(huán)境

5、中1-2小時即死亡，在50℃5分鐘死亡，在4 ℃置3天后可死亡，因此4℃血庫存放3天以上的血液無傳染梅毒的危險。對常用化學消毒劑亦敏感。,梅毒是一個可以治愈的傳染病,病史癥狀實驗室依據 實驗室檢查結果對梅毒診斷及判愈有決定性意義 ！,常用實驗室檢查方法,病原學方法血清學方法,病原學檢測,原理：一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕 疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結穿刺術得 到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光

6、線從聚光器 的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光， 從而可根據其特殊形態(tài)和運動方式進行檢測。 方法：（1）暗視顯微鏡檢查 （2）鍍銀染色法 （3）核酸檢測（血液標本？） 注：梅毒螺旋體目前體外人工培養(yǎng)還沒有獲得成功， 僅能通過接種兔睪丸等部位進行有限增殖。,病原學檢查,病原學檢查的臨床意義 ： 螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預后和 盡早切斷傳染源都有十分重 要的意義。 如未見到梅毒螺

7、旋體，并不能排除患梅毒的可能性。,血清學方法,(1) 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗 （非特異性梅毒抗體） (2) 梅毒螺旋體抗原血清學試驗 （特異性梅毒抗體）問題： 為什么梅毒診斷需要上述兩類血清學檢測方法？,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理,梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對螺旋體表面的脂質作 出免疫應答，產生抗類脂抗原的抗體（非特異性抗體）。 未經治療的病人，其血清內的非特異性抗體可長期存在。 經正規(guī)治療后，非特異性抗體可以逐漸減少

8、滴度至轉為陰 性。 問題： 臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學試驗為什么需要做定性和定量兩種檢測方法？,非梅毒螺旋體抗原血清學原理,方法包括： （1）快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗 (RPR) （2）甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）（3）性病研究實驗室試驗 (VDRL)等。 基本成分是心磷脂 卵磷脂和膽固醇 抗原抗體結合形成復合物，凝集成網狀沉淀顆粒被肉 眼所見 上述方法的敏感性和特異性都基本相似,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗操作要

9、點,1、儀器：水平旋轉儀，調轉速（100轉/分），調轉幅（18mm）。 2、定性試驗 加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中， 并均勻地涂布在整個圈內 加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原 反應：水平旋轉儀旋轉8分鐘(23 ℃ -29 ℃） ， 亮光下觀察結果 (60滴/mL，1滴=17ul ),非梅毒螺旋體抗原血清學試驗操作要點,3、定量試驗 血清稀釋度 :1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1

10、:64 1:128 1:256 1:512,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗臨床意義,早期梅毒（一期、二期）經足量規(guī)則抗梅毒治療后 ： 一期梅毒1年后轉為陰性 。二期梅毒2年后轉為陰性。 晚期梅毒 治療后血清滴度下降緩慢，2年后約 50%病人血清反應仍為陽性。,非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義,非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡單、快 速、敏感性和特異性較好。適用于大量人 群的篩查。因治療后血清滴度可下降并陰性，故可作 為療效觀察、判

11、愈、復發(fā)或再感染的指征。VDRL試驗用于神經梅毒腦脊液檢測特異性高，檢測陽性可以作為神經梅毒確診依 據，但敏感性較低，即檢測陰性不能排除晚期神經梅毒。,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點,假陽性反應 技術性假陽性反應一般是由于操作錯誤引起的 假陽性反應，經過重復試驗即可排除。 生物學假陽性反應(一般滴度小于1:8），應采用梅毒螺旋體抗原血清學試驗如TPPA等進行排 除。,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點,由于感染梅毒后反應素的出現晚于特

12、異性梅毒螺旋體抗體，晚期梅毒反應素又可能轉陰，對隱性梅毒和神經梅毒也不敏感。因此，做梅毒初篩時，存在一定數量的漏檢。,梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理,抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體重組特異抗原），檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。 感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試 驗呈陽性，則患者終身陽性。 問題：梅毒螺旋體抗原血清學試驗的定量試驗在梅毒診療中有意義嗎？,梅毒螺旋體抗原血清學試驗方法,梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (

13、TPPA) 梅毒螺旋體血球凝集試驗 (TPHA) 梅毒酶聯免疫吸附試驗（ELISA）化學發(fā)光免疫分析法（CLIA） 梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測 (RT) 熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS） 梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB）,TPPA,TPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結合，產生可見的凝集反應，具有較高的敏感性和特異性。TPPA是目前WHO公認的梅毒抗原血清學試驗的“ 金標準”，常用于新方

14、法、新試劑的參照標準。,,TPPA試驗原理示意圖,明膠顆粒+ 梅毒抗原=抗原致敏顆粒 +血液中抗體 =抗原抗體凝集 + 明膠顆粒+梅毒抗原 =抗原致敏顆粒 +

15、 抗原致敏顆粒+血液中抗體 =抗原抗體凝集,,,,,,,,,,,,,TPPA試驗結果判讀敏感性,4+： 粒子光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有 折疊3+： 粒子光滑覆蓋大部分底 2+：粒子光滑聚集覆蓋孔底，周圍有一細胞環(huán) 病期 1+： 粒子光滑集聚覆概孔底，周圍有一明顯細胞環(huán) ±： 粒子沉集孔底，中央形成一小點 –： 粒子緊密沉積孔底中央,ELISA/ CLIA

16、,ELISA試驗是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相 板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標記物，形成抗原抗體復合物與酶標記物結合，用酶聯 檢測儀判定試驗陽性反應。 本法可用于大樣本血清檢測。 化學發(fā)光法的臨床應用意義基本同ELISA 化學發(fā)光法的敏感性？,梅毒免疫層析快速檢測方法,梅毒免疫層析快速檢測方法（血清、血漿法）,梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義,作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如RPR、TRUST等)初篩陽性標本的確證試驗，排除R

17、PR、TRUS 假陽性。 不能區(qū)分既往感染和現癥感染，應結合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結果進行診斷。 TPPA等梅毒螺旋體抗原血清試驗不能作為療效觀察的指標。,梅毒血清學試驗結果解釋,,問題：此結果解釋適用于先天（胎傳）梅毒嗎？,先天（胎傳）梅毒的實驗室診斷依據,查到螺旋體 。其抗心磷脂抗體滴度持續(xù)上升，可用RPR半定量試驗每月檢測1次，連續(xù)6個月，檢測效價，效價增高或穩(wěn)定在高水平，表明是先天梅毒。如抗體來自母體IgG，通常在2-3

18、月內消失。 其抗心磷脂抗體滴度高于其母親四倍（2個稀釋滴度）。 檢測抗梅毒的IgM特異性抗體陽性 。隨訪18個月觀察抗體的變化（哪一類抗體？）,梅毒IgM抗體（TP-IgM）,IgM抗體的產生是感染后的早期體液免疫應答反 應。IgM分子比IgG較大，所以IgM抗體不能通過胎盤 屏障。而母親的IgG抗體可以通過胎盤屏障傳給胎兒。 因此若在新生兒血中檢測到IgG抗體不能作為先天梅毒的診斷依據，而IgM抗體可為先天梅毒的診斷依據。

19、 IgM抗體檢測其特異性較高，但敏感性較低。因 此，IgM抗體檢測陰性，不能排除先天梅毒感染。,先天（胎傳）梅毒的實驗室診斷依據,查到螺旋體 其抗心磷脂抗體滴度持續(xù)上升（TRUST,RPR） 其抗心磷脂抗體滴度高于其母親四倍（2個稀釋滴度） 檢測抗梅毒的IgM特異性抗體陽性 隨訪18個月觀察抗體的變化（特異性抗體）,規(guī)范化梅毒實驗室檢測基本要求,一、根據目的選擇檢測方法及檢測策略。二、人員 檢測技術人員需經過上崗培

20、訓。接受上崗培訓內容應包括：梅毒檢測相關基礎知識、梅毒實驗室檢測技術基本實驗操作要求、結果解讀及臨床意義、質量保證與生物安全等。 三、試劑 常規(guī)血清學檢測應采用經國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準的 試劑。因不同廠家生產的同一種試劑的敏感性和特異性存在一定的 差異，建議選擇臨床質量評估敏感性和特異性高的試劑。所有試劑須嚴格按要求妥善保存，并控制在有效期內使用。,血清學檢測試劑的種類,非梅毒螺旋體抗原血清試驗 ：快速血漿反應素環(huán)狀卡

21、片試驗 (RPR ) 甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST） 性病研究實驗室試驗 (VDRL) 梅毒螺旋體抗原血清試驗 ：梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (TPPA) 梅毒螺旋體血球凝集試驗 (TPHA) 梅毒酶聯免疫吸附試驗（ELISA） 梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測 (RT) 熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）化學發(fā)光免疫分析法（CLIA） 梅毒IgM抗體檢測（IgM） 梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB）,PCR技術應

22、用于檢測梅毒螺旋體DNA,特異性強，敏感性高，是目前診斷梅毒螺旋體的先進方法。(1)標本采集和處理：可采集局部分泌物、淋巴結液、羊求、血清、腦脊液等標本，用煮沸或低速離心或堿裂解等方法從標本中提取DNA模板。(2)診斷意義及評價 1)敏感性和特異性較高：尤其對無臨床表現、血清學為陰性的可疑梅毒、神經性梅毒、胎傳梅毒等具有較好的輔助診斷價值。 2)不能區(qū)分活的和死的螺旋體，一般不用于梅毒治療后的復查。但死亡的梅毒螺旋體經15～

23、30天即從機體內清除，故治療數周后PCR陽性意昧著持續(xù)感染的可能。,問題1,下列哪些說法是錯的？ ① 一旦感染梅毒，TPPA常終身陽性 ②TPPA可用于療效判斷 ③梅毒孕婦所生嬰兒RPR和TPPA檢測結果陽性可診斷為胎傳梅毒 ④ RPR只能用于梅毒初篩,問題-1,下列哪些說法是錯的？⑤ ELISA法不能用于初篩 .⑥核酸檢測方法可以用于梅毒的血液標本檢測⑦ 二期梅毒時，TPPA和RPR兩種血清學試驗敏感性均可達100％

24、,問題-2,開展RPR/TRUST試驗時應采用下面哪種儀器或方法進行抗原抗體凝集反應： ① 水平旋轉儀（√） ② 振蕩器 ③手工水平搖動 ④混懸器,問題-3,下列描述正確嗎？ “TRUST法對早期、晚期梅毒檢測的敏感性低及治療后梅毒不敏感，如本組272例抗-TP確認陽性樣本，而其只檢測到105例，敏感性為 38.2%” ”。,一期梅毒實驗室檢查,1.暗視野顯微鏡檢查：皮膚粘膜損害或淋巴結穿刺液可查見梅毒螺旋體

25、。2.非梅毒螺旋體抗原血清學實驗： VDRL RPR TRUST 梅毒病灶出現1-2周時，血清中反應素(抗體)陽性率為53%-83%，如感染不足2-3周，也可為陰性，應于感染后4周復查。 3.梅毒螺旋體抗原血清學實驗： FTA-ABS:在第一期梅毒的頭幾天就可測出特異性抗體，尤其適用于與早期梅毒的診斷。 FTA-ABS-DS

26、 TPHA TPPA: TP- ELISA:此法可用于各期梅毒診斷,對感染血清靈敏度為95%. 極早期少數可為陰性。,二期梅毒實驗室檢查,暗視野顯微鏡檢查：二期皮損的尤其是扁濕平疣，濕丘疹及黏膜斑，可查見梅毒螺旋體。非梅毒螺旋體抗原血清學實驗：陽性梅毒螺旋體抗原血清學實驗：陽性,三期梅毒（晚期）實驗室檢查,非梅毒螺旋體抗原血清學實驗：大多陽性，也可陰性。梅毒螺旋體抗原血清學實驗：陽性,前帶現象,非

27、梅毒螺旋體抗原血清學實驗（如RPR,TRUST）中，有時由于血清抗體水平太高，抗原抗體比例不合適，而出行弱陽性，不典型或陰性的結果，但臨床上又有典型的二期梅毒癥狀，將血清稀釋后再做血清學試驗，出現了陽性結果，稱為前帶現象。,引起梅毒免疫學檢測假陽性的因素,1.內源性：RF因子，補體，高濃度的非特異性免疫球蛋白，異嗜性抗體，某些自身抗體，在ELISA測定中，可與其固相上包被的特異性抗體IgG以及隨后加入的酶標抗體結合，出現假陽性。,引起梅

28、毒免疫學檢測假陽性的因素,2.外源性：標本溶血，被細菌污染，儲存時間過長，標本凝固不全等。（1）血紅蛋白中含有血紅素基團，有類似過氧化物的活性，在以HRP為標志酶的ELISA測定中，若溶血，血紅蛋白很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后加入的HRP底物反應顯色。（2）標本被細菌污染，則一些細菌的內源性酶本身會對相應酶標記的測定方法產生非特異性干擾。,引起梅毒免疫學檢測假陽性的因素,（3）血液凝固不全，血清中仍然殘留部分纖維蛋白原，若

29、將其加入微孔中，在溫育過程中仍可形成肉眼可見的纖維蛋白快，易造成假陽性。,引起梅毒免疫學檢測假陽性的因素,3.在梅毒免疫學檢測試驗陽性的老年人中,有一些人確實是梅毒螺旋體的感染者,但有相當一部分陽性者無梅毒的任何癥狀與體征,配偶梅毒血清學試驗均為陰性,除試驗陽性外,沒有診斷梅毒的任何依據。值得關注的是,非高危老年人群中的特異性梅毒血清學檢查出現假陽性的情況時有發(fā)生,且陽性率較正常人群高,年齡越大陽性率越高,常常是幾種試驗方法檢測的結果同

30、時陽性，特別是7O歲以上的老人陽性率明顯高于其他年齡段的人群。其陽性結果很難用正在或者曾經梅毒感染過來解釋。假陽性反應主要是肌體的生理狀態(tài)發(fā)生改變(如年齡變老)和某些疾病造成的,即使通過重復實驗也是無法避免。由此可見年齡與疾病因素是造成老年人梅毒抗體易發(fā)生假陽性的重要原因。,隱形梅毒,是指少數人感染了梅毒螺旋體后，在體內可終身隱伏（血清反應陽性，而無癥狀和病變），或在二、三期梅毒活動，局部病變消失而血清反應陽性。,隱形梅毒,產生隱性梅毒

31、主要的原因是，梅毒未經治療，或治療藥物劑量不足，治療不徹底，表現為病人無臨床癥狀，梅毒血清反應陽性。還有另一種情況，病人曾有過某種方式的感染途徑，但由于病人抵抗力強，沒有出現過或僅出現過非常不顯著的臨床癥狀如宮頸硬下疳，以后一直沒有臨床表現，但梅毒血清為陽性，這都是隱性梅毒。隱性梅毒的發(fā)生主要取決于機體本身的免疫力、治療與梅毒螺旋體之間的較量的結果。當機體免疫功能正常，或在治療其他疾病時曾不正規(guī)地使用過與治療梅毒有關的藥物，產生了一定

32、的治療效果時，體內的梅毒螺旋體受到一定的限制；當機體在某階段健康狀況不佳、免疫功能降低時，梅毒螺旋體可乘機在人體內廣泛活動并損害各種組織。當出現前一種情況時，即為潛伏梅毒，當出現后一種情況時，就叫做顯發(fā)梅毒。,隱形梅毒,感冒藥讓梅毒轉隱性：隱性梅毒多發(fā)的罪魁禍首是濫用抗生素。青霉素是最有效的殺梅毒螺旋體的藥物，其他抗生素也有一定效果。有人患了梅毒，自己買點藥吃，癥狀就好了；甚至有人恰好得了感冒，吃了感冒藥后梅毒的癥狀就看不出來了，但體內