優(yōu)生優(yōu)育的遺傳學診斷吳彤華

1、優(yōu)生優(yōu)育的遺傳學診斷,研究所 分子組/遺傳咨詢組吳彤華2017-11-30,,,目錄,,產前診斷,植入前遺傳學診斷,流產物遺傳學分析,產前篩查,產前篩查,概念： 是指通過簡便、經濟和無創(chuàng)的檢測方法，從孕婦群體中發(fā)現某些懷疑有先天性缺陷和遺傳性疾病胎兒的高危孕婦，以便進一步明確診斷。指征（1）危害嚴重（2）發(fā)病率較高，人群分布明確（3）篩查陽性有進一步明確診斷的方法（4）篩查方法較簡易（5）篩查費用明顯

2、低于治療費用,產前篩查不是診斷！所有高風險胎兒必須產前診斷！,檢測手段：（1）影像學（超聲）（2）血清學（生化免疫等）（3）分子生物學（NGS）目標疾?。海?）染色體異常（2）異常表型,目錄,,產前診斷,植入前遺傳學診斷,流產物遺傳學分析,胎兒頸項透明度（Fetal Nuchal Translucency, NT）,孕11~14w時胎兒頸部皮下的無回聲帶的測量；早孕期最常用的染色體異常超聲標記；不宜過早：

3、A. 11w前不宜絨毛取樣；B. 很多嚴重畸形11周前不易診斷；不宜過晚：A. 嚴重畸形可選擇早孕期中止妊娠；B. 染色體異常的胎兒出現異常頸積水在14-18W間發(fā)生率較14周前低；C. 14周后胎兒會轉動姿勢，量度難度增加；,NT＜2.5 mm為正常；NT≥2.5 mm為異常；,,NT測量值中位數：二倍體 ：2.0 mm；21三體：3.4 mm； 13三

4、體：4.0 mm；18三體：5.5 mm； 45，X：9.2 mm。,目錄,,產前診斷,植入前遺傳學診斷,流產物遺傳學分析,血清學篩查,對象：孕9-13周、15-20周所有非高危孕婦；直接做產前診斷的高危孕婦：（1）孕婦年齡≥35周歲；（2）曾經生育過染色體病患兒；（3）產前B超檢查懷疑胎兒可能有染色體異常的；（4）夫婦一方有染色體異常攜帶者的；（5）醫(yī)師認

5、為有必要直接做產前診斷的其他情形的。,血清篩查方案的選擇,孕早期篩查（9周-13周） PAPP-A、Free-βhCG孕中期篩查（15周-20周） AFP、Free- βhCG、uE3、抑制素ACut off值 21-三體： 1: 270； 18-三體：1:350,MoM值（Multiple of the unaffected population median）,中位

6、數倍數（MoM）：由于各個實驗室報告的數值不同，且產前篩查標志物的水平隨孕周的增加會有很大的變化，所以所有實驗室必須以正常人群中位數的倍數作為檢驗結果的標準，便于臨床判斷。 實際測定值MoM= 該孕周正常妊娠人群測定中位數值,似然比（Likelihood Ratio，LR）,概念：患者人群試驗呈陽性的概率與非患者人群試驗呈陽性的概率之

7、比；總風險率 = 母親年齡特異性風險 X 各標志物的似然比；如果孕婦的總風險率≥年齡35歲孕16周的DS年齡特異性風險度（1/270）則稱為“篩查陽性”。,母血清指標在胎兒各類缺陷中的濃度狀況,早產、自然流產增加；小于胎齡兒；妊高癥；,胎盤慢性灌注不足、胎盤早剝；FGR；新生兒呼吸窘迫綜合征、新生兒黃疸,PAPP-A、free-βhCG、AFP或uE3下降可能發(fā)生不良妊娠結局（排除染色體?。?,,目錄,,產前診

8、斷,植入前遺傳學診斷,流產物遺傳學分析,,,正常：母體+胎兒共10條；異常：母體+胎兒共11條；,,,,,doi: 10.1073/pnas.0810641105.,,,容忍FPR以免FNR,NIPT假陽性原因：（1）CPM；（2）母親嵌合；（3）母體CNV；（4）雙胎之一胚停；NIPT假陰性原因：（1）胎兒游離DNA濃度低；（2）胎兒低比例嵌合未被檢出；（3）胎兒、胎盤染色體結構不一致；（4）胎盤嵌合、胎

9、兒嵌合,NIPT的指征,,適用孕周：12+0周-22+6周,NIPT質量控制指標要求,,NIPT vs. 血清學,,,DOI: 10.1056/NEJMoa1407349,,,DOI: 10.1056/NEJMoa1407349,DOI: 10.1056/NEJMoa1407349,NIPT檢測失敗率2.57%（488/18955）,13例染色體異常（2.66%） 21三體：3例 18三體：1例

10、 13三體：2例 三倍體：4例 16三體嵌合：1例 11p缺失：1例 染色體結構異常：1例,9例為非整倍體（4.69%）,,,doi: 10.1002/uog.14792.,,,,目錄,,產前診斷,植入前遺傳學診斷,流產物遺傳學分析,產前篩查,產前診斷,概念： 是指在妊娠的早中期，對胎兒（材料）進行觀察（分析），確定是否有患致殘、致死性出生缺陷或遺

11、傳性疾病的線索，幫助夫婦了解胎兒狀況，以便作出相應選擇，降低妊娠風險。檢測手段：影像學、生物化學、細胞遺傳學和分子遺傳學等；目標疾?。海?）嚴重致死致殘；（2）沒有治療手段；（3）治療尚不可及（費用昂貴、國外有藥國內無）；（4）發(fā)病年齡是否有限制？,細胞遺傳學產前診斷指征,單胎年齡≥35歲；曾生育過染色體病患兒；產前篩查高風險；產前B超檢查懷疑胎兒可能有染色體異常；夫婦一方為染色體異常攜帶者；醫(yī)師認為有必要

12、進行產前診斷的其他情況。,雙胎年齡≥31歲；有不良孕產史；ICSI。,選擇合適的取材方式和時間,選擇合適的遺傳學方法,,,,,美國婦產科學會 & 母胎醫(yī)學協會推薦,,美國婦產科學會 & 母胎醫(yī)學協會推薦,,評估胎兒患何種遺傳病,評估胎兒患何種遺傳病,評估胎兒患何種遺傳病,,,,,,,,,目錄,,產前診斷,植入前遺傳學診斷,流產物遺傳學分析,產前篩查,植入前胚胎遺傳學檢測（PGT）,植入前遺傳學診斷（PGD）（1

13、）染色體疾??；（2）單基因??；（3）檢測癌癥易感基因；（4）HLA分型植入前遺傳學篩查（PGS） 至少2次胎兒染色體異常的不良孕產史（我院）,選擇合適的取材方式和時間,,選擇合適的遺傳學診斷方法,FISH-PGD診斷只要有合適探針的都可以—需預實驗；經濟條件不好；年輕患者；易位涉及染色體四個片段有兩個小于4 Mb。,,選擇合適的遺傳學診斷方法,,1、可識別LOH和UPD2、可進行PGH,目錄,,產前診

14、斷,植入前遺傳學診斷,流產物遺傳學分析,產前篩查,流產物染色體數目異常檢測,,,1、MLPA2、CMA（aCGH、SNP array）3、NGS4、其他（QF-PCR）,絨毛培養(yǎng)染色體核型分析,,優(yōu)點：經典方法；成本低；能檢測平衡的染色體結構異常；,,,缺點：細胞培養(yǎng)時間長；分辨率低：5-10Mb；細胞培養(yǎng)失敗的風險（10%-40%）；,,熒光原位雜交（FISH）,,優(yōu)點：簡單，快速；直觀，可知嵌合比例；準確率高

15、；,缺點：自動化程度低；信號判斷需要經驗；無法診斷未知的結構異常；檢測24條染色體成本高；,,多重連接依賴探針擴增技術 （MLPA）,,優(yōu)點：快速：24h；靈敏度高： 20ngDNA，3000cells；特異性強；操作簡單；自動化程度高，高通量檢測；成本相對較低；絨毛DNA標本可保存并用于其他核酸項目檢測；,缺點：標本種類或處理方法不同時結果不可比；檢測位點少；對多倍體標本的檢測存在方法學缺陷；無法診斷絕大

16、部分的染色體結構異常；對嵌合比例低的標本不敏感；結果是一個比例值，影響因素較多；PCR的缺點：污染等；,,,染色體芯片分析（CMA）,,,優(yōu)點：全基因組掃描，可微缺失/微重復；SNP-array可檢測LOH和UPD；分辨率高，平均分辨率30 Kb；不需細胞培養(yǎng)，出報告時間短；自動化程度高，降低人為干擾；,缺點：產生信息量大，需要配合專業(yè)的軟件和數據庫才能分析結果；不能檢測低多倍體、比例的嵌合體和平衡的染色體結構異常；