nk細(xì)胞在腫瘤疾病的應(yīng)用

1、腫瘤生物免疫療法,,生物免疫治療是一種自身免疫抗癌的新型治療方法，臨床上主要用于抗腫瘤治療，并取得顯著的治療效果。繼手術(shù)、放療、化療之后的第四大腫瘤治療技術(shù)。,它是運(yùn)用生物技術(shù)和生物制劑對從病人體內(nèi)采集的免疫細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)和擴(kuò)增后再回輸?shù)讲∪梭w內(nèi)的方法來激發(fā)、增強(qiáng)機(jī)體自身免疫功能，從而達(dá)到治療腫瘤目的，也成為自體免疫細(xì)胞療法。,2009年5月1日衛(wèi)生部印發(fā)《醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用管理方法》，明確將體細(xì)胞免 治療列入第三批允許臨床應(yīng)用的第三類

2、醫(yī)療技術(shù)。,,80年代末期開始，日本研制和開發(fā)出特制人體活化自身淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)液，成功地建立起嶄新的細(xì)胞免疫療法。采取病人少量的血液，將分離出的淋巴細(xì)胞在含有特殊細(xì)胞刺激因子及營養(yǎng)素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，使培養(yǎng)細(xì)胞定向分化和大量增殖為活性NK細(xì)胞。臨床應(yīng)用治療取得了良好療效，同時沒有副作用出現(xiàn)。,,細(xì)胞免疫療法最早從LAK的臨床應(yīng)用開始。1984年Rosenberg研究組經(jīng)美國食品和藥品檢驗(yàn)局 (US Food and Drug Admin

3、istration,FDA)批準(zhǔn)下，首次應(yīng)用IL-2與LAK協(xié)同治療癌癥并獲得明顯療效。但由于IL-2在治療過程中出現(xiàn)毒副反應(yīng)（毛細(xì)血管滲漏綜合征，capillary leak syndrome, CLS)，主要表現(xiàn)為全身性水腫和多器官功能失調(diào)，可引起胸腹腔積液、肺間質(zhì)水腫和充血性心力衰竭。 引起CLS的機(jī)理可能與內(nèi)皮細(xì)胞損傷和產(chǎn)生血管活性物質(zhì)有關(guān)。1992年美國的Rosewell Park 醫(yī)院中止了此療法。,,體的細(xì)胞數(shù)大約有60兆

4、至70兆個，其中包括有增殖能力及沒有增殖能力的細(xì)胞群。有增殖能力的細(xì)胞群每天都在新舊交替以維持正常組織結(jié)構(gòu)和機(jī)能。,健康人的體內(nèi)每天會有3000-5000個細(xì)胞發(fā)生癌變，之所以沒有出現(xiàn)癌變，是因?yàn)轶w內(nèi)的免疫系統(tǒng)及早識別了癌細(xì)胞，并將其殺死，阻止癌細(xì)胞的過度增殖，防止癌變的發(fā)生。人體的免疫系統(tǒng)是抵御癌癥的“防火墻”。,當(dāng)某種原因?qū)е旅庖呦到y(tǒng)失衡時，機(jī)體防御能力下降，免疫系統(tǒng)失去有效的殺傷癌細(xì)胞的能力，最終導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。,,,,,,主動免

5、疫療法,Vaccine 療法,癌抗原接種,樹狀細(xì)胞(DC)疫苗,Cytokine療法,Interferon (IFN),Interleukin-2,分子靶向療法,Herceptin 曲妥珠單抗,Mabthera 利妥普單抗,其它 （健康食品等）,,,被動免疫療法,樹突狀細(xì)胞療法（DC),,活化NK細(xì)胞療法（NK),,腫瘤組織浸潤淋巴細(xì)胞療法（TIL),,殺傷性T細(xì)胞療法 （CTL),,活化自體淋巴細(xì)胞療法(LAK、CIK),,血液,紅

6、細(xì)胞,白細(xì)胞,血小板,血漿,,,淋巴細(xì)胞,單核細(xì)胞,粒細(xì)胞,,NK細(xì)胞,T細(xì)胞,B細(xì)胞,其他,,輔助性T細(xì)胞,殺傷性T細(xì)胞,抑制性T細(xì)胞,,巨噬細(xì)胞,樹突狀細(xì)胞,組織內(nèi)分化,,嗜中性粒細(xì)胞,嗜酸性粒細(xì)胞,嗜堿性粒細(xì)胞,1、手術(shù)療法,2、放射線療法,3、化學(xué)療法,4、免疫療法,,Granule Exocytosis Pathway,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,+,-,NK activating rec

7、eptor,NK inhibitory receptor,,NK,：forms pores in the target cell membrane,allows the entry of granzyme, fluid and salts so that the target cell eventually bursts.,,,,,,,,,,,,,,,Tumor cells,Perforin,：serine proteases, me

8、diate apoptosis of target cells through caspase-dependent and –independent pathways.,Granzymes,,Death-receptor Pathway,FAS ligand (FASL) and tumor-necrosis-factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) can bind to an

9、d activate their receptors, FASand TRAILR, which are expressed by tumor cells.,This interaction induces tumor-cell apoptosis.,The protein c-FLIP (FLICE inhibitory protein) blocks apoptosis induction through this pathwa

10、y.,,IFN-g, Nitric Oxide,NK cells secrete a number of effector cytokines, such as IFNg, TNF, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), IL-5, IL-10 and IL-13.,NK-cell production of TH1 (proinflammatory cyt

11、okine: IFNg) and TH2 (IL-4, IL-5, IL-13) cytokines occurs at distinct stages of NK-cell differentiation. Mature NK cells lose the ability to produce the type 2 cytokines and acquire the ability to produce INFg.,,,自體NK細(xì)胞療

12、法是抗腫瘤生物免疫治療之一。簡單說就是從患者的靜脈血管中抽取20-50ml血液，從中分離出少量的免疫細(xì)胞，利用最新科技手段，通過體外選擇性誘導(dǎo)、增殖、激活后，將高活性高數(shù)量NK細(xì)胞回輸患者體內(nèi)，以此來提高患者的免疫力和對癌細(xì)胞的殺傷能力，達(dá)到治療目的的一種先進(jìn)抗腫瘤治療方法。,,癌細(xì)胞(T)和不同濃度的effector(E)細(xì)胞進(jìn)行處理,比較活性化自身NK細(xì)胞和PBMC的活性，其結(jié)果活性化自身NK細(xì)胞的殺傷力與細(xì)胞濃度相關(guān)。同時隨著細(xì)

13、胞數(shù)量的增加其細(xì)胞殺傷力的活性顯著增強(qiáng)。此外，PBMC的活性則隨著細(xì)胞濃度的增加其細(xì)胞殺傷力幾乎沒有變化。,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,NK細(xì)胞選擇性誘導(dǎo),The cells are washed and resuspended in isotonic sodium chloride solution.Check: Cell count Morphology

14、 Viability Cell markers: CD56,CD16,CD3,CD4,CD8 etc. cell cytotoxic% Microorganism test,Cultured with human NK cell culture mediumat 37℃ in a humidified, 5% CO2 incubatorfo

15、r about 10~14 days.,細(xì)胞刺激因子,,,,,,,混合培養(yǎng),,NK細(xì)胞MIXTURE,,about 2-6 x 10 9 Cells,,,,20 ~30ml,分離淋巴細(xì)胞,采血,,醫(yī)院,,細(xì)胞處理中心,,介紹生物免疫治療,,治療的充分商量,,NK細(xì)胞的分離與培養(yǎng),,NK細(xì)胞的一部分凍結(jié)保管2～3周,,檢驗(yàn)及血液的采取,,,,必要應(yīng)對的培養(yǎng)，再培養(yǎng),,自體NK細(xì)胞,,制定治療方案,,,,,,,,,自體NK細(xì)胞,,,,,除來

16、源于T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的原發(fā)性腫瘤、白血病、敗血病、以及自身免疫 病患者外，適用于所有其他腫瘤患者。,,4.NK細(xì)胞療法可調(diào)節(jié)和增強(qiáng)全身免疫機(jī)能，創(chuàng)造更多的治療機(jī)會。,1. NK細(xì)胞是用患者本身的細(xì)胞，沒有副作用和排斥反應(yīng)。,2.NK細(xì)胞可有效地殺傷殘余的腫瘤細(xì)胞，防止腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移。,3.NK細(xì)胞療法可聯(lián)合手術(shù)、放療、化療治療，達(dá)到相乘效果。,治療日程安排根據(jù)患者的病情或以往病史，大夫和患者（患者家屬）商量之后決定。標(biāo)準(zhǔn)的一個療程

17、是6針，隔兩周抽血、回輸一次，約三個月一個療程。與三大治療（手術(shù)、放療、化療）聯(lián)合治療時候，可調(diào)節(jié)治療日程安排。,,,,采血5點(diǎn)滴4,,采血6點(diǎn)滴5,,采血2點(diǎn)滴1,培養(yǎng)期間2星期,培養(yǎng)期間2星期,培養(yǎng)期間2星期,培養(yǎng)期間2星期,培養(yǎng)期間2星期,培養(yǎng)期間2星期,,,,,,,,采集,檢測,培養(yǎng),凍存,采集,檢測,培養(yǎng),凍存,免疫細(xì)胞及干細(xì)胞質(zhì)量受三大階段和主體的制約，即嚴(yán)格的血液采集質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、嚴(yán)格的制備檢驗(yàn)和科學(xué)的培養(yǎng)進(jìn)