體外擴增的Treg細胞抑制NK細胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫.pdf

1、目的：研究CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞（Regulatory T cells, Tregs）對NK細胞腫瘤殺傷力的影響及Treg細胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫抑制的機制；初步探討過繼輸注NK細胞逆轉(zhuǎn)Treg細胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫抑制的作用。
　　方法：免疫磁珠分離法（MACS）分離得小鼠脾臟Treg細胞及NK細胞，用流式細胞術(shù)檢測其純度。以 CD3/CD28單克隆抗體磁珠和重組小鼠白介素2（rmIL-2）聯(lián)合刺激體外擴增Treg細胞，重組小

2、鼠白介素15（rmIL-15）、rmIL-2以及氫化可的松聯(lián)合刺激體外擴增NK細胞。將擴增后Treg細胞及NK細胞按不同比例混合淋巴細胞培養(yǎng)，MTT比色法檢測 NK細胞的殺傷活性。如之前研究中所報道的方法將B16-F10小鼠黑色瘤細胞細胞輸注至 Balb/c小鼠體內(nèi)建立肺移植瘤模型[1]，將荷瘤小鼠分為4組：A組）單獨接種B16-F10小鼠黑色瘤細胞；B組）Treg細胞+B16-F10黑色素瘤細胞； C組）B16-F10黑色素瘤細胞+N

3、K細胞；D組）Treg細胞+B16-F10黑色素瘤細胞+NK細胞。MTT比色法測定各實驗組小鼠脾臟 NK細胞的殺傷活性，并比較不同處理組小鼠肺部腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)目。
　　結(jié)果：體外擴增后的Treg細胞對新鮮分選及擴增后的NK細胞活性均具有明顯抑制作用（p＜0.05），且抑制作用呈劑量依賴關(guān)系；A組荷瘤小鼠NK細胞活性低于正常小鼠，且B組荷瘤小鼠NK細胞活性較A組進一步降低（p＜0.05）；D組荷瘤小鼠NK細胞活性高于A組和B組荷瘤小鼠，

4、但仍低于正常小鼠組（p＜0.05）。B組荷瘤小鼠肺部移植瘤數(shù)目（105.33±10.97）較 A組明顯增多（17±4.58）（p＜0.01）;C組荷瘤小鼠肺部移植瘤數(shù)目（2.00±1.00）較A組（17±4.58）明顯減少（p=0.037）；D組荷瘤小鼠肺移植瘤數(shù)目（79.00±8.54）較 B組明顯降低（105.33±10.97）（p=0.030），但仍高于A組荷瘤小鼠（17±4.58）（p＜0.001）。
　　結(jié)論：體內(nèi)種植腫