無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室的要求與日常管理

1、無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室的要求與日常管理 無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室的要求與日常管理一、 一、 實(shí)驗(yàn)室設(shè)施 實(shí)驗(yàn)室設(shè)施開(kāi)展無(wú)菌檢查及微生物限度檢查工作，首先要按照《藥品檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范》及《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求，建立一個(gè)布局合理、使用方便、操作安全的無(wú)菌室，并且配有完善的實(shí)驗(yàn)設(shè)施和管理制度。無(wú)菌檢查、微生物限度檢查以及接種室（接種對(duì)照菌、菌種傳代）均應(yīng)嚴(yán)格分開(kāi)，具有危險(xiǎn)性的毒株、毒素如破傷風(fēng)梭菌、黃曲霉毒素的實(shí)驗(yàn)室需單獨(dú)使用，以便控制防止傳播。（一）

2、 （一） 潔凈 潔凈實(shí)驗(yàn)室 實(shí)驗(yàn)室1.潔凈室的布局 潔凈室的布局1.1 根據(jù)樣品檢驗(yàn)要求，一般應(yīng)至少包括更衣緩沖系統(tǒng)、微生物限度檢查室、無(wú)菌檢查室、陽(yáng)性菌室和物流通道。1.2 更衣系統(tǒng)應(yīng)至少包括一更（含更鞋） 、二更（含洗手） 、緩沖以及人流走廊等。1.3 物流通道應(yīng)考慮凈污分流的布局，有條件的可設(shè)置污物走廊2.潔凈室的設(shè)計(jì)要求 潔凈室的設(shè)計(jì)要求2.1 凈化級(jí)別：潔凈走廊、檢查室、陽(yáng)性菌室應(yīng)為一萬(wàn)級(jí)；其他房間應(yīng)為十萬(wàn)級(jí)2.2 氣流組織：

3、陽(yáng)性菌室對(duì)走廊呈負(fù)壓，走廊對(duì)緩沖有 5Pa 的正壓；陽(yáng)性菌室全排風(fēng)2.3 電氣控制：控制開(kāi)關(guān)外置；設(shè)置通訊系統(tǒng)3.結(jié)構(gòu)與要求： 結(jié)構(gòu)與要求：無(wú)菌潔凈室不宜設(shè)在底層，防潮、防霉、采光好，遠(yuǎn)離交通干道，廁所及污染區(qū)，面積不超過(guò) 10m2，高度不超過(guò) 2.4m，由兩個(gè)緩沖間、操作間組成。操作間緩沖間之間應(yīng)有樣品傳遞窗，出入操作間和緩沖間的門(mén)不應(yīng)直對(duì)。無(wú)菌室內(nèi)應(yīng)六面光滑平整，無(wú)縫隙，不起灰，不落塵，耐腐蝕，易清洗，墻壁與地面、墻壁與天花板連接處

4、應(yīng)呈凹弧形，操作間不得安裝下水道。無(wú)菌室內(nèi)的照明燈應(yīng)嵌裝在天花板內(nèi)，采光面積要大，光照應(yīng)分布均勻，光照度不低于 300 勒克斯。緩沖間和操作間應(yīng)裝有紫外線殺菌燈（2－25w/m3）''用于空氣消毒。紫外線波長(zhǎng) 200－300nm 者具有殺菌作用，其中以 265－266nm 殺菌作用最強(qiáng)，這與 DNA 的吸收光譜范圍一致，其殺菌機(jī)理可能是在細(xì)菌細(xì)胞 DNA 中引起胸腺嘧啶雙聚體形成，從而干擾細(xì)菌細(xì)胞 DNA 復(fù)制，導(dǎo)致細(xì)菌

5、變異死亡。紫外線殺菌燈 1m 以?xún)?nèi)距離殺菌效果最佳，每次開(kāi)燈照射時(shí)間為 30min。應(yīng)定期檢查紫外線燈輻射強(qiáng)度，不得低于 70μW·cm-21m 距離。其缺點(diǎn)是穿透力弱，一張紙板可以阻礙光的透過(guò)，不能穿透固體物，故只能用作表面消毒及一些不耐熱或化學(xué)消毒劑物品的消毒。4.溫度、濕度 溫度、濕度無(wú)菌室內(nèi)溫度和相對(duì)濕度直接影響紫外殺菌燈的殺菌效果，故溫度最好控制在 25±2℃，相對(duì)濕度 40－60％。操作間或凈化工作臺(tái)的潔

6、凈空氣應(yīng)保持對(duì)環(huán)境形成正壓，不低于 49Pa。5.操作間 操作間無(wú)菌室內(nèi)應(yīng)安裝空氣除菌過(guò)濾層流裝置及調(diào)溫裝置。潔凈度要求：凈化工作臺(tái)潔凈度為100 級(jí)，無(wú)菌室應(yīng)為 10000 級(jí)。操作間應(yīng)準(zhǔn)備乙醇燈（或煤氣燈），火柴，2％碘酊棉球及 75％乙醇棉球、試管架、大小系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)整后，在重新驗(yàn)證，直至符合規(guī)定才能重新啟用潔凈室。5.2 當(dāng)溫度、相對(duì)濕度和照度等指標(biāo)出現(xiàn)不符合時(shí)，潔凈室可不必停用，但應(yīng)及時(shí)修復(fù)空調(diào)系統(tǒng)（或更換照明裝置） ，使其符合

7、規(guī)定。二、實(shí)驗(yàn)室管理： 二、實(shí)驗(yàn)室管理：為保證實(shí)驗(yàn)工作有序進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)室必須制定一系列實(shí)驗(yàn)室管理制度。（一） （一） 實(shí)驗(yàn)室要求： 實(shí)驗(yàn)室要求：1 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境應(yīng)清潔、衛(wèi)生、安靜，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)嚴(yán)禁吸煙和飲食。2 實(shí)驗(yàn)人員必須穿戴工作衣帽，工作服經(jīng)常洗滌、消毒、保持清潔。3 操作前后或離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室必須用肥皂或消毒液洗手。4 發(fā)生菌液污染臺(tái)面或地面，應(yīng)立即用 3％甲醛或 5％碳酸等消毒液由外向內(nèi)傾覆其上，1小時(shí)后再擦拭，如為破傷風(fēng)梭菌，則應(yīng)隔夜后再擦

8、洗。5 工作衣、帽、口罩受到菌液污染時(shí)，應(yīng)立即脫下使污染部位包裹在內(nèi)部，高壓滅菌后再清洗。6 如有傳染性培養(yǎng)物污染手部，應(yīng)先用 75％乙醇棉球擦拭，再浸入 0.1%新潔爾滅消毒液內(nèi)泡手，然后再用肥皂及清水徹底洗干凈。7 接種環(huán)（針），每次使用前后，必須通過(guò)火焰滅菌，冷卻后方可接種培養(yǎng)物，接種帶有蠟質(zhì)、油質(zhì)的培養(yǎng)物或菌苔殘留多時(shí)，不應(yīng)立即在火焰上灼燒，應(yīng)先在內(nèi)焰里將油質(zhì)培養(yǎng)物烘干后再移至火焰上滅菌，以免活菌外濺污染環(huán)境及感染操作者。8 帶

9、菌的吸管應(yīng)浸泡在 5％甲酚消毒液內(nèi) 24h 后取出清洗，帶菌的試管或培養(yǎng)物應(yīng)在 121℃高壓滅菌 30 分鐘后再取出清洗。9 在接種霉菌、放線菌時(shí)應(yīng)在鋪有浸過(guò)消毒液的紗布上操作，防止孢子散落傳播。10 廢棄物的處理：a) 必須消除生物危害后，才能處理，一般使用高壓蒸汽滅菌，也可以采用直接焚燒。b) 污染性銳器（如一次性針頭）應(yīng)滅菌后處理，注意避免銳器扎傷。c) 污染性可重復(fù)使用的材料（如平皿）應(yīng)滅菌后清洗，宜使用不易破碎的材料。d) 工

10、作服（含潔凈工作服）應(yīng)定期清洗，懷疑污染的工作服應(yīng)滅菌后清洗，潔凈工作服應(yīng)滅菌后使用。（二） （二） 無(wú)菌操作要求： 無(wú)菌操作要求：無(wú)菌操作是指在無(wú)菌的環(huán)境條件下，使用無(wú)菌器材，防止微生物污染的操作技術(shù)。即保持待檢樣品在操作時(shí)不被污染，又要防止被檢的微生物及陽(yáng)性對(duì)照菌在操作中污染環(huán)境或感染操作人員。從事無(wú)菌及微生物操作的工作人員必須經(jīng)過(guò)無(wú)菌技術(shù)及基礎(chǔ)微生物學(xué)專(zhuān)業(yè)知識(shí)的學(xué)習(xí)及培訓(xùn)才具備上崗操作的資格，微生物專(zhuān)業(yè)檢驗(yàn)人員也不應(yīng)該頻繁地變換工

11、作崗位。1.無(wú)菌室應(yīng)每次使用前后用 0.1%苯扎溴銨溶液或 2％甲醛液擦拭工作臺(tái)面及可能污染的死角，濕拖地面，打開(kāi)無(wú)菌空氣過(guò)濾器及超凈工作臺(tái)的開(kāi)關(guān) 30 分鐘，紫外線殺菌燈照射1 小時(shí)。2.操作人員用肥皂洗手后進(jìn)入緩沖間換拖鞋，用 75％乙醇棉球擦手，穿戴工作衣帽、口罩。將所需物品剝?nèi)ヅＦぜ埣巴獍b，從傳遞窗移入操作間，再用 0.1%苯扎溴銨溶液泡手后進(jìn)入操作間，在乙醇（或煤氣燈）火焰區(qū)（火焰高度 3－5cm）操作。3 供試品表面消毒，