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文檔簡介
1、平板凝膠電泳因?yàn)槠浜唵蔚牟僮?、低廉的成?廣泛應(yīng)用于生物、微生物、分析等學(xué)科領(lǐng)域。聚丙烯酰胺凝膠電泳和瓊脂糖凝膠電泳是常見的兩類平板凝膠電泳形式。前者是以聚丙烯酰胺凝膠為電泳介質(zhì),主要用于分離蛋白質(zhì);后者是以瓊脂糖凝膠為電泳介質(zhì),主要用于分離DNA。
然而平板凝膠也存在著不可忽視的問題。電流的存在會(huì)在電泳過程中產(chǎn)生焦耳熱。當(dāng)焦耳熱生成的速率大于傳遞至周圍環(huán)境的速率時(shí),熱量在凝膠內(nèi)部積累,使凝膠溫度升高。當(dāng)凝膠溫度過高時(shí)會(huì)導(dǎo)
2、致凝膠融化、樣品條帶扭曲甚至使樣品變性。因此,電泳過程中的焦耳熱限制了電泳電壓;帶電粒子在凝膠內(nèi)部遷移的快慢與電泳電壓正相關(guān),所以,焦耳熱的產(chǎn)生,限制了帶電粒子在凝膠中的電泳速度。通常,電泳電壓不超過5 v/cm,凝膠溫度不高于35℃,電泳時(shí)間需要一個(gè)小時(shí)甚至更長。
本課題在凝膠的外圍設(shè)置一個(gè)較低溫度的環(huán)境,通過熱量傳遞,將電泳過程中產(chǎn)生的焦耳熱移除。通過這一方法,可以增大電泳電壓,提高電泳速度,降低電泳時(shí)間,從而達(dá)到高效
3、快速的目的。
實(shí)驗(yàn)初期,自制電泳槽,包括含內(nèi)制冷和外制冷電泳槽。首先進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)思路的驗(yàn)證,之后進(jìn)行一系列因素的考察和條件優(yōu)化。在實(shí)驗(yàn)中,通過監(jiān)測凝膠溫度的變化發(fā)現(xiàn),內(nèi)、外制冷方式都能夠迅速的將電泳過程中產(chǎn)生的焦耳熱移除。但是,從制作工藝上來說,外制冷方式的制作工藝較簡單,所以本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)研究了外制冷對電泳效果的提升。為了減少焦耳熱的產(chǎn)生,用緩沖液載體代替了將凝膠浸沒在緩沖液中的傳統(tǒng)方式。通過實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn),緩沖液載體能夠在凝膠
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