蛋白質(zhì)印跡聚合物富集天然微量pBiP及對(duì)pBiP基因序列的研究.pdf

1、本文分為兩個(gè)部分：第一部分是用蛋白質(zhì)印跡聚合物富集天然微量蛋白pBiP的研究；第二部分是用PCR方法闡明編碼豬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體中BiP的片段基因的研究。
　　 第一部分研究工作是基于本組蛋白質(zhì)印跡技術(shù)的研究成果，制備新型的印跡聚合物來(lái)分離純化天然蛋白質(zhì)。近年來(lái)，許多研學(xué)究者開(kāi)展了以蛋白質(zhì)為模板的分子印跡聚合物的研究，也期望該技術(shù)能夠成為分離純化蛋白的一種重要手段。但是目前能作為模板的蛋白質(zhì)都是常見(jiàn)的一些在細(xì)胞中含量很高的蛋白，而在高等生

2、命體中絕大多數(shù)蛋白質(zhì)在細(xì)胞中的含量是非常微小的，因而對(duì)天然微量蛋白的純化研究是非常有必要的。本組前期的研究工作在識(shí)別體系中引入了限長(zhǎng)的輔助識(shí)別聚合物鏈(ARPCs)，提高了識(shí)別目標(biāo)蛋白的專一性，取得了很好的富集效果。
　　 在本工作中，我們引入的ARPCs上帶有隨機(jī)分布的羧基與吡啶雙重識(shí)別基團(tuán)以及錨定基團(tuán)側(cè)鏈并以在大腸桿菌中克隆表達(dá)的鼠免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白(mBiP)作為模板。將ARPCs與模板mBiP自組裝成復(fù)合物，然后以聚

3、乙烯醇接枝的大孔樹(shù)脂微球作為固相載體，將復(fù)合物組裝體與第二單體丙烯酰胺在水相中進(jìn)行交聯(lián)聚合反應(yīng)，洗脫掉模板蛋白后就得到了蛋白質(zhì)印跡聚合物。我們利用該蛋白質(zhì)印跡聚合物對(duì)天然豬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體(ER)提取物進(jìn)行吸附，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在吸附后的洗脫液中目標(biāo)蛋白pBiP的濃度達(dá)到了0.15 ng/μL，與吸附前的ER提取液相比，目標(biāo)蛋白在總蛋白質(zhì)中的含量被富集了約56倍，再生印跡聚合物仍具有優(yōu)良的識(shí)別與親和性能。說(shuō)明這種印跡聚合物對(duì)天然微量蛋白有良好的特異識(shí)別

4、性并且可以循環(huán)使用。這是我組首次采用蛋白質(zhì)分子印跡聚合物的方法分離富集高分子量的天然微量蛋白質(zhì)，結(jié)合本組關(guān)于印跡聚合物在小分子量天然蛋白分離方面的研究成果，表明我們的方法具有一定的普適性。
　　 第二部分的研究工作是用PCR方法闡明編碼豬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體中pBiP的片段基因序列的研究。pBiP參與進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體的分泌型蛋白與膜蛋白的折疊、貯存和轉(zhuǎn)運(yùn)，我們希望通過(guò)以克隆的pBiP為模板合成印跡聚合物來(lái)吸附ER提取物中天然的pBiP，已達(dá)到富