應(yīng)用帶有陽(yáng)離子識(shí)別基因的輔助識(shí)別聚合物鏈進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡的研究.pdf

1、分子印跡技術(shù)是一種模擬抗體-抗原相互作用的人工生物模板技術(shù),可以針對(duì)不同的目的,采用人工合成的方法,構(gòu)建出具有特定選擇性識(shí)別位點(diǎn)的印跡聚合物。除了小分子外,蛋白質(zhì)也可以作為印跡的模板。在以前的研究工作中我們提出了一種印跡蛋白質(zhì)的新方法,并且分別引入了帶有羧基和吡啶識(shí)別基團(tuán)的輔助識(shí)別聚合物鏈,以克隆蛋白質(zhì)為模板,以能提供大表面積的大孔樹脂為載體,合成蛋白質(zhì)印跡聚合物,用于從細(xì)胞提取液中吸附分離天然的目標(biāo)蛋白質(zhì),有很好的富集效果。

2、在本工作中,我們引入帶陽(yáng)離子識(shí)別基團(tuán)的輔助識(shí)別聚合物鏈,識(shí)別基團(tuán)定為氨基,聚合物主鏈為限長(zhǎng)的聚乙烯醇。實(shí)驗(yàn)首先通過(guò)乙酸乙烯酯自由基聚合經(jīng)醇解后制得聚合度約為40的聚乙烯醇,然后對(duì)聚乙烯醇骨架進(jìn)行修飾,使其帶上隨機(jī)分布的氨基基團(tuán)和雙鍵基團(tuán)。然后我們的識(shí)別分子再與模板蛋白質(zhì)豬親環(huán)素18(pCyP18)進(jìn)行自組裝,組裝體通過(guò)其上的雙鍵鍵合基團(tuán)與第二單體丙烯酰胺以聚乙烯醇大孔樹脂球作載體進(jìn)行交聯(lián)聚合,輔助識(shí)別鏈上的氨基作為識(shí)別基團(tuán)與模板蛋白質(zhì)作

3、用。實(shí)驗(yàn)使用500 mM氯化鉀緩沖溶液除去模板蛋白pCyP18和未聚合的識(shí)別分子后得到水溶性極好的蛋白質(zhì)印跡樹脂PIPp18,再用此印跡聚合物從細(xì)胞提取液中吸附天然微量蛋白質(zhì),顯示出了很好的富集效果。為了證明我們合成的輔助識(shí)別聚合物鏈?zhǔn)蔷哂衅者m性的,我們又以較大分子量的牛血清白蛋白(BSA)為模板,以同樣方法制備了BSA的蛋白質(zhì)印跡樹脂PIPBSA。柱分析結(jié)果表明,我們的輔助識(shí)別聚合物鏈對(duì)于較大分子量目標(biāo)蛋白的分離純化也是十分有效的。