CD20+B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞IDO-Kyn-AHR信號通路表達(dá)的研究.pdf

1、目的：彌漫大 B細(xì)胞淋巴瘤在所有非霍奇金淋巴瘤中最為常見，是一組高度異質(zhì)性和高增殖活性的惡性腫瘤，其標(biāo)準(zhǔn)化療方案使約50％患者疾病完全緩解。利妥昔單抗的運用使 DLBCL的治療進(jìn)入了一個全新的時代，患者疾病完全緩解率和總生存率得到進(jìn)一步的提高，但是仍有約40%患者疾病進(jìn)展復(fù)發(fā)。隨著我們更深入的研究腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制，我們發(fā)現(xiàn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展可能與參與免疫逃逸的某些基因異常表達(dá)相關(guān)，深入的認(rèn)識這些基因的異常表達(dá)對抗腫瘤免疫系統(tǒng)的具體作用過程，

2、并有針對性的阻斷導(dǎo)致免疫逃逸的關(guān)鍵通路，是提高腫瘤治療效果的重要方法。IDO是色氨酸代謝途徑中的關(guān)鍵酶，IDO的高表達(dá)和活性增高與免疫逃逸密切相關(guān)，IDO亦是腫瘤免疫治療中的熱點。IDO高表達(dá)于多種人類實體腫瘤和血液淋巴系統(tǒng)腫瘤。在淋巴瘤中，亦有多項研究證實IDO高表達(dá)于DLBCL患者的腫瘤細(xì)胞中，IDO高表達(dá)與預(yù)后不良相關(guān)。在本團(tuán)隊的前期實驗中，證實了利妥昔單抗耐藥的其中一個作用機(jī)制即為DLBCL細(xì)胞中的IDO高表達(dá)。諸多報道IDO/

3、Kyn/AHR信號通路參與免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)，IDO過表達(dá)，導(dǎo)致局部色氨酸消耗，代謝產(chǎn)物犬尿氨酸蓄積，AHR激活并發(fā)生核轉(zhuǎn)位，靶基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)，促使Treg細(xì)胞分化增殖，抑制效應(yīng)T細(xì)胞增殖活化，導(dǎo)致免疫逃逸。但I(xiàn)DO是否通過啟動IDO/Kyn/AHR通路，導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸，還有待進(jìn)一步研究證實。本研究旨在通過1-MT、CH223919分別抑制Raji細(xì)胞和JeKo-1細(xì)胞中IDO、AHR的表達(dá)，來觀察IDO/Kyn/AHR信號通路中各個信號分子

4、的表達(dá)情況。
　　方法：1、體外培養(yǎng) Raji和JeKo-1細(xì)胞系，應(yīng)用熒光定量PCR方法檢測 IDOmRNA和AHRmRNA的相對表達(dá)水平，以及使用 IDO抑制劑（1-MT）或者AHR抑制劑（CH223191）以不同濃度不同時間作用細(xì)胞后后，檢測 IDOmRNA和 AHRmRNA相對表達(dá)水平的變化；2、1-MT或CH223191以不同濃度作用 Raji細(xì)胞和JeKo-1細(xì)胞24h后，收集細(xì)胞上清，比色法分別檢測細(xì)胞上清中色氨酸和

5、犬尿氨酸的含量。
　　結(jié)果：1、熒光定量PCR結(jié)果顯示：（1）1-MT5，25μm/L分別作用于 Raji細(xì)胞和JeKo-1細(xì)胞0.5h、1h、2h后，測得IDOmRNA和AHRmRNA相對表達(dá)量下降，并隨著1-MT濃度的增加及作用時間的延長， IDOmRNA、AHRmRNA相對表達(dá)水平逐漸下降，以1-MT濃度組25μmol/L濃度及作用2h時下降最明顯（P＜0.05）。但1-MT作用于JeKo-1細(xì)胞0.5h后，5μmol/L濃

6、度組和25μmol/L濃度組間雖然IDOmRNA表達(dá)水平逐漸下降，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（2）CH2231915，25μm/L作用于 Raji細(xì)胞和JeKo-1細(xì)胞0.5h、1h、2h后，測得IDOmRNA和AHRmRNA相對表達(dá)量下降，隨著 CH223191濃度的增加或作用時間的增加，IDOmRNA和AHRmRNA相對表達(dá)量水平下降更為明顯，以25μmol/L濃度或作用2h時最明顯（P＜0.05）。但CH2231915μ

7、m/L作用于JeKo-1細(xì)胞后，0.5h組和1h組間 IDOmRNA表達(dá)水平雖然逐漸下降，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（3）1-MT和CH223191分別作用于Raji細(xì)胞和JeKo-1細(xì)胞后，隨著濃度增加或作用時間延長，IDOmRNA和AHRmRNA相對表達(dá)量均下降，行相關(guān)性分析顯示二者存在極強(qiáng)正相關(guān)關(guān)系（R＞0.8，P＜0.05）。2、細(xì)胞上清犬尿氨酸、色氨酸含量測定：1-MT（5，25μm/L）和CH223191（5，25