PI3K-AKT-mTOR通路關(guān)鍵信號分子在胃癌組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、本研究擬通過對PI3K/AKT/mTOR信號通路中關(guān)鍵信號分子蛋白在胃癌組織、癌旁組織（距腫瘤邊緣5cm以上）、正常胃黏膜組織中的表達(dá)情況分析，在組織水平上分析PI3K/AKT/mTOR信號通路在胃癌中的發(fā)生、發(fā)展過程的作用及其調(diào)節(jié)機(jī)制，同時(shí)分析胃癌病人和正常人中SNP的變異情況，探討mTOR基因多態(tài)性與胃癌發(fā)生的關(guān)系，為胃癌的靶向治療提供科學(xué)依據(jù)。
　　目的:
　　1.比較PI3K/AKT/mTOR信號通路中關(guān)鍵信號分子P

2、TEN、p-AKT、p-mTOR蛋白在胃癌組織、癌旁組織及正常胃黏膜組織中的表達(dá)水平差異，分析PTEN、p-AKT、p-mTOR三種蛋白在不同臨床特征的胃癌病例之間表達(dá)水平是否存在差異，分析胃癌中的PTEN、p-AKT、p-mTOR三種蛋白陽性表達(dá)率之間是否存在相關(guān)性，進(jìn)一步探討PI3K/AKT/mTOR信號通路與胃癌的關(guān)系。
　　2.以mTOR基因的兩個(gè)SNP位點(diǎn)(rs3806317、rs1034528)為靶位點(diǎn)，以江蘇南京地區(qū)

3、胃癌患者為研究對象，比較胃癌病人和正常人中rs1034528、rs3806317兩SNP位點(diǎn)的基因型和等位基因分布情況，同時(shí)分析不同臨床特征的胃癌病人之間兩SNP位點(diǎn)的基因型和等位基因分布情況是否存在差異，進(jìn)一步探討mTOR基因多態(tài)性與胃癌的關(guān)系。
　　方法:
　　1.采用免疫組織化學(xué)sp法（鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法），檢測66例胃癌組織、66例癌旁組織、39例正常胃黏膜組織中PTEN、p-AKT、p-mTOR三

4、種蛋白的表達(dá)水平，運(yùn)用卡方檢驗(yàn)來分析PTEN、p-AKT、p-mTOR蛋白在胃癌組織、癌旁組織及正常胃黏膜組織之間的表達(dá)陽性率分布情況是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(α=0.05)，同時(shí)比較PTEN、p-AKT、p-mTOR蛋白在不同臨床特征的胃癌組織之間是否存在差異(α=0.05)，并用Pearson相關(guān)分析進(jìn)行PTEN、p-AKT、p-mTOR三種蛋白陽性表達(dá)之間的相關(guān)性分析。
　　2.提取128例胃癌病人（病例組）和129例正常人（對照

5、組）DNA，針對目的基因mTOR的兩個(gè)SNP位點(diǎn)(rs3806317、rs1034528)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，sanger法對PCR樣品進(jìn)行測序，卡方檢驗(yàn)分析胃癌病人和正常人中rs1034528、rs3806317兩SNP位點(diǎn)的基因型和等位基因分布情況，比較胃癌病人不同臨床特征與兩SNP位點(diǎn)的基因型和等位基因分布情況是否存在相關(guān)性。運(yùn)用X2分析各SNP位點(diǎn)的基因型相對于野生基因型的患病危險(xiǎn)度及95％可信區(qū)間，以評估各基因型的風(fēng)險(xiǎn)。
　

6、　結(jié)果:
　　1.PTEN蛋白在胃癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織中的陽性表達(dá)率分別為53.03％(35/66)、84.85％(56/66)、74.36％(29/39)。PTEN蛋白在胃癌組織、癌旁組織及正常胃黏膜組織中的表達(dá)陽性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。PTEN蛋白在癌旁組織中的表達(dá)水平要高于胃癌組織(P＜0.0125)，癌旁組織和正常胃黏膜組織之間的PTEN蛋白陽性表達(dá)率沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.0125)，胃癌組織

7、與正常胃黏膜組織之間PTEN蛋白陽性表達(dá)率沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.0125)。
　　2.p-AKT蛋白在胃癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織中的陽性表達(dá)率分別為56.06％(37/66)、16.67％(11/66)、2.56％(1/39)。p-AKT蛋白在胃癌組織、癌旁組織及正常胃黏膜組織中的表達(dá)陽性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。同時(shí)p-AKT蛋白在胃癌組織中陽性表達(dá)水平高于癌旁組織、正常胃黏膜組織(P＜0.0125)。

8、r>　　3.p-mTOR蛋白在胃癌組織、癌旁組織、正常胃黏膜組織中的陽性表達(dá)率分別為90.91％(60/66)、71.21％(47/66)、5.13％(2/39)。p-mTOR蛋白在胃癌組織、癌旁組織及正常胃黏膜組織中的表達(dá)陽性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。p-mTOR蛋白陽性表達(dá)水平在胃癌組織、癌旁組織、正常胃黏膜組織中呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(P＜0.05)。
　　4.PTEN蛋白的表達(dá)水平與胃癌病例的年齡、性別、腫瘤直徑大

9、小、腫瘤分化程度、腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及腫瘤的TNM分期臨床病理資料之間未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性(P＞0.05)。
　　5.p-AKT蛋白在浸潤深度達(dá)到漿膜層的胃癌中陽性表達(dá)率要高于癌組織未浸潤到漿膜層者(P＜0.05);p-AKT蛋白在低分化胃癌中的陽性表達(dá)率要高于在中高分化胃癌(P＜0.05);p-AKT蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌中陽性表達(dá)率高于未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌(P＜0.05);p-AKT蛋白在Ⅰ期、Ⅱ期胃癌中的陽性表達(dá)率要

10、低于Ⅲ期、Ⅳ期胃癌(P＜0.05)。未發(fā)現(xiàn)p-AKT蛋白與胃癌其他臨床特征（年齡、性別、腫瘤直徑）存在相關(guān)性(P＞0.05)。
　　6.p-mTOR蛋白在浸潤深度達(dá)到漿膜層的胃癌中陽性表達(dá)率要高于癌組織未浸潤到漿膜層者(P＜0.05)。未發(fā)現(xiàn)p-mTOR蛋白與胃癌其他臨床特征（年齡、性別、腫瘤直徑、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及腫瘤的TNM分期）之間存在相關(guān)性(P＞0.05)。
　　7.PTEN蛋白與p-AKT蛋白陽性表達(dá)

11、率之間存在負(fù)相關(guān)且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);未發(fā)現(xiàn)p-AKT蛋白和PTEN蛋白與p-mTOR蛋白陽性表達(dá)率之間存在相關(guān)性(P＞0.05)。
　　8.mTOR的rs1034528位點(diǎn)的C、G等位基因頻率在病例組中所占比例分別為18.85％、81.15％，在對照組中分別為16.67％、83.33％;CC、CG、GG三種基因型在病例組中所占比例分別為4.92％、27.87％、67.21％，在對照組所占比例分別為1.63％、30.0

12、8％、68.29％。mTOR的rs1034528位點(diǎn)的基因型以及等位基因頻率在胃癌病人和正常人群中的分布沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　9.mTOR的rs3806317位點(diǎn)的C、T等位基因頻率在病例組中所占比例分別為9.05％、90.95％，在對照組中分別為14.92％、85.08％。CC、CT、TT三種基因型在病例組中所占比例分別為0％、18.10％、81.90％，對照組所占比例分別為0.81％、28.23％、70.97％

13、。攜帶C基因型(CC/CT)相比未攜帶C基因型(TT)在胃癌病人和正常人群中分布存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，且攜帶C基因型(CC/CT)人患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)是未攜帶C基因型(TT)人群的0.54倍(OR=0.54，95％CI為(0.293，0.996))。rs3806317位點(diǎn)等位基因頻率在胃癌病人和正常人群中分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，C等位基因的人群患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)是T等位基因人群的0.568倍(OR=0.568，95％CI(0.3

14、21，1.002))。
　　10.rs3806317基因型的頻率分布在不同年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度、浸潤深度、TNM分期、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的胃癌病人間未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌病人之間rs3806317基因型的頻率分布具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。胃癌病人的rs1034528基因型頻率的分布與臨床特征（年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度、浸潤深度、TNM分期、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）均

15、沒有相關(guān)性(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.PTEN、p-AKT、p-mTOR三種蛋白在胃癌組織、癌旁組織及正常胃黏膜組織中的表達(dá)水平都存在不同程度的差異，胃癌組織中p-AKT、p-mTOR的高表達(dá)及PTEN的低表達(dá)證實(shí)了PI3K/AKT/mTOR信號通路在胃癌組織中處于過度激活的狀態(tài)，p-AKT和p-mTOR的表達(dá)水平與胃癌病人臨床特征密切相關(guān)，總體呈現(xiàn)惡性程度越高，p-AKT、p-mTOR表達(dá)水平越強(qiáng)的趨勢。