雷公藤甲素對(duì)MV411細(xì)胞增殖抑制及在PI3K-AKT-mTOR通路機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　急性髓系白血病（acute myelocytic leukemia，AML）是起源于骨髓造血干、祖細(xì)胞的惡性克隆性疾病。FLT3/ITD突變是AML中重要的基因突變之一，也是提示疾病預(yù)后不良的重要標(biāo)志。該類患者常規(guī)化療療效差，目前AML伴FLT3/ITD突變患者靶向藥物治療成為人們的研究熱點(diǎn)，并且在臨床應(yīng)用上取得一定的療效。然而已有的靶向治療的耐藥和緩解后再?gòu)?fù)發(fā)成為AML伴FLT3/ITD突變病人治療的一大難題，因此尋

2、求新的治療藥物及新的作用靶點(diǎn)十分必要。近年來(lái)中藥雷公藤因其抗炎、免疫抑制、抗腫瘤等多種藥理作用，備受國(guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)注。雷公藤甲素（TP）是雷公藤主要活性成分之一，相關(guān)文獻(xiàn)研究報(bào)道顯示，TP不論對(duì)急性髓系白血病細(xì)胞株HL60還是對(duì)慢性髓系白血病 K562、K562G01細(xì)胞均有明顯增殖抑制作用。那么 TP對(duì)FLT3/ITD突變的MV411細(xì)胞是否也有增殖抑制作用？其可能作用機(jī)制又是如何？本課題通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)的方法觀察 TP對(duì) MV411細(xì)胞的

3、增殖抑制、凋亡作用及PI3K-AKT-mTOR通路相關(guān)基因FLT3、PTEN、PI3K、AKT、mTOR表達(dá)，初步探討其可能的抗腫瘤機(jī)制，為AML伴FLT3/ITD突變患者的治療提供理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　1四甲基偶氮唑藍(lán)實(shí)驗(yàn)（MTT）測(cè)定不同濃度的TP在24h，48h，72h對(duì)MV411細(xì)胞株的增殖抑制情況，并測(cè)算IC50值；
　　2流式細(xì)胞儀測(cè)定48h，72h的細(xì)胞凋亡率；
　　3實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢

4、測(cè)PI3K-AKT-mTOR通路相關(guān)基因FLT3，PTEN，PI3K， AKT，mTOR的表達(dá)水平。
　　研究結(jié)果：
　　1.MTT檢測(cè)結(jié)果示：TP對(duì)MV411細(xì)胞有明顯增殖抑制作用，且隨著藥物濃度和用藥時(shí)間的增加而逐漸增強(qiáng)，呈現(xiàn)時(shí)間-劑量依賴性，選擇48小時(shí)為TP的IC50，值為16.92nmol/L。
　　2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果示：48小時(shí)時(shí)間點(diǎn)0、10、20nmol/L TP對(duì)應(yīng)的平均早期凋亡率分別為（3.30±

5、0.20）％、（17.10±0.36）%、（35.67±0.61）%；72小時(shí)時(shí)間點(diǎn)0、10、20nmol/L TP對(duì)應(yīng)的平均早期凋亡率分別為（7.37±0.32）%、（49.33±0.40）%、（68.92±0.11）%。發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡率隨著濃度的增加而增加。
　　3.實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測(cè)結(jié)果示：選用0、5、10、20nmol/L的TP作用于MV411細(xì)胞48h后，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR法檢測(cè)，發(fā)現(xiàn) FLT3、PI3K、AK