腫瘤組織酶敏感的高分子鍵合藥4-armPEG-AANL-DOX的合成表征及其應用.pdf

1、臨床廣泛使用的小分子抗癌藥阿霉素存在靶向性差、體內血液循環(huán)半衰期短、藥物利用率低、系統(tǒng)毒性大等問題。而基于高分子載體的納米藥物傳輸體系相對于小分子抗癌藥而言，在癌癥治療方面主要具有以下優(yōu)勢：可調的物理化學性質、提高藥物溶解度、延長循環(huán)時間、降低毒副作用、基于腫瘤EPR效應的被動靶向并且容易進行化學修飾和功能化。根據藥物擔載的機制可將高分子型納米載體分為三類包括通過共價鍵合的高分子鍵合藥、通過疏水作用制備的聚合物膠束、通過物理包裹的聚合物

2、囊泡。其中通過載體與藥物共價鍵相互作用的高分子鍵合藥，其對環(huán)境變化具有較強的穩(wěn)定性，需要在特定的環(huán)境釋放有效藥物。然而許多高分子鍵合藥由于過于穩(wěn)定阻礙藥物釋放，影響療效，甚至阻礙其在人體的應用。本論文基于腫瘤微環(huán)境的特性，通過小分子藥物與高分子載體之間的共價相互作用，設計并制備了一種新型具有應用前景的腫瘤微環(huán)境特異性legumain蛋白酶敏感的阿霉素高分子鍵合藥物，旨在提高藥物對腫瘤的治療效果同時減少化療藥物可能引起的毒副作用。

3、　　本論文首先通過使用丁二酸酐將四臂聚乙二醇羧基化，然后用NHS將其活化后與酶敏感間隔基丙氨酸-丙氨酸-天冬酰胺-亮氨酸（AANL）的氨基端發(fā)生縮合反應得到4-arm PEG-AANL，最后在PyBOP的催化作用下與阿霉素縮合得到包含酶敏感間隔基的高分子鍵合前藥（4-arm PEG-AANL-DOX）。同時制備了無酶敏感性的鍵合藥4-arm PEG-DOX作為對照。并用1H NMR、GPC、MALDI-TOF對合成產物進行結構表證；動態(tài)

4、光散射(DLS）檢測結果顯示4-arm PEG-AANL-DOX能在水溶液中自組裝成粒徑31.6±10.82 nm的膠束。
　　體外控制釋放實驗結果顯示，在偏酸性的腫瘤微環(huán)境中，legumain蛋白酶能夠有效促進4-arm PEG-AANL-DOX的釋放；激光共聚焦結果顯示，在腫瘤細胞環(huán)境中4-arm PEG-AANL-DOX比4-arm PEG-DOX更容易釋放藥物，并促進藥物進入腫瘤細胞；體外細胞毒性實驗顯示4-arm PEG

5、-AANL-DOX對腫瘤細胞MDA-MB-435和MCE-7有較強的抑制細胞生長能力，但基本沒有抑制正常細胞L929細胞的生長；離體阿霉素熒光成像結果表明4-arm PEG-AANL-DOX與游離阿霉素和4-arm PEG-DOX相比具有更強的靶向能力；體內抑瘤實驗和安全性評價研究表明4-arm PEG-AANL-DOX具有良好的血液相容性，更重要的是其對腫瘤生長有明顯的抑制作用，并且基本無毒副作用，這些特征均顯示此legumain酶敏