納米金銀粒子的高靈敏免疫分析方法及納米金免疫學(xué)效應(yīng)研究.pdf

1、金和銀兩種金屬物質(zhì)，在很久以前就被大家廣為熟知和使用。人類使用金和銀這兩種金屬的歷史已經(jīng)非常悠久，可以追溯至很久以前，比如使用的金首飾和銀器具等。然而，隨著納米科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，金和銀開始作為一種納米材料被人們所熟知和使用，人類也在日常生活和越來越多的領(lǐng)域使用到金銀納米材料。因此，人類在廣泛深入使用納米材料之前，要對(duì)納米材料可能產(chǎn)生的毒理性進(jìn)行一定的研究。同時(shí)，納米材料在微量水平的量化也是研究的一方面?，F(xiàn)在已經(jīng)有一些手段對(duì)納米材料進(jìn)行

2、大小、形態(tài)和結(jié)構(gòu)的表征，然而納米粒子的定量分析還仍然是一項(xiàng)非常具有挑戰(zhàn)性的工作。現(xiàn)有的很多方法都過于局限，還沒有有效的方法可以進(jìn)行很好的量化。
　　基于抗原抗體的特異性進(jìn)行定量檢測的酶聯(lián)免疫分析方法是一種比較傳統(tǒng)的分析方法。本實(shí)驗(yàn)室，不僅可以通過免疫新西蘭大白兔制備出高特異性的多克隆抗體，同時(shí)也可以建立不同的免疫方法來對(duì)樣品進(jìn)行量化。因此在現(xiàn)有的條件下，建立了相應(yīng)的免疫分析方法對(duì)納米粒子進(jìn)行定量檢測。首先，通過對(duì)新西蘭大白兔進(jìn)行免

3、疫制備特異性高的抗納米粒子的多克隆抗體，隨后建立直接競爭酶聯(lián)免疫分析方法和間接競爭酶聯(lián)免疫分析方法來對(duì)納米材料進(jìn)行定量檢測。為納米材料的定量檢測提供了一種簡便、靈敏、特異性高的分析方法。本論文所做具體工作如下：
　　1.成功合成了不同尺寸的納米金粒子
　　將適量氯金酸HAuCl4加入蒸餾水中，經(jīng)煮沸后加入不同體積的檸檬酸鈉溶液，制備得到了16nm，40nm和80nm等不同尺寸的納米金粒子。經(jīng)掃描電鏡和透射電鏡進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。

4、
　　2.制備不同尺寸的納米金粒子的抗體
　　16nm，40nm和80nm等不同尺寸的納米金顆粒用修飾劑巰基乙酸（TGA）和活化劑1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）（NHS）碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）修飾后連接牛血清白蛋白BSA，得到大分子結(jié)合物AuNPs-BSA。用其作為免疫原免疫多組別的新西蘭大白兔，分別得到抗血清效價(jià)達(dá)到1/64000的抗不同尺寸納米金的多克隆抗體。
　　3.建立直接競爭酶聯(lián)免疫分析法測定50nm銀納

5、米粒子
　　抗AgNPs抗體標(biāo)記上HRP蛋白酶，與包被抗原AgNPs-OVA發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，建立了直接競爭酶聯(lián)免疫分析法。優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)條件，檢測限為0.0093 ng/mL，線性范圍為10-3–1000 ng/mL，樣品的加標(biāo)回收率為73.0-127.9％，相似物的交叉反應(yīng)率也低于10％。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明我們成功地定量檢測了50nm AgNPs，該方法簡便、靈敏、特異性強(qiáng)。
　　4.建立間接競爭酶聯(lián)免疫分析法測定40nm金納米粒

6、子
　　對(duì)制備的抗40nm AuNPs抗體，本實(shí)驗(yàn)建立了間接競爭酶聯(lián)免疫分析法來進(jìn)行定量。用上述制備的抗40nm AuNPs抗體，在最優(yōu)條件下，使得抗原抗體發(fā)生特異性反應(yīng)。線性范圍為10-2–10000 ng/mL(R2=0.98174)，檢測限為0.038 ng/mL，交叉反應(yīng)率也低于10％，回收率在75.78-139.06％。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明我們可以成功地痕量納米金顆粒。
　　5.建立直接競爭酶聯(lián)免疫分析法測定40nm金納米

7、粒子
　　此實(shí)驗(yàn)中，我們對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化并繪制了標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性范圍為0.001-1000 ng/mL，檢測限(LOD)為0.0107 ng/mL。樣品回收率為88％-124％，幾種類似物的交叉反應(yīng)率都低于6％，說明制備的多克隆抗體的特異性較好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果令人滿意。
　　6.不同尺寸納米金生物學(xué)效應(yīng)研究
　　本實(shí)驗(yàn),我們主要研究了不同尺寸納米金對(duì)新西蘭大白兔肝臟的影響。采用免疫組化SABC染色法研究血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（GO