納米金標(biāo)記毛細(xì)管電泳超靈敏化學(xué)發(fā)光免疫分析及應(yīng)用研究.pdf

1、納米技術(shù)是21世紀(jì)最重要的技術(shù)之一，它覆蓋了多個(gè)領(lǐng)域，包括化學(xué)、物理、材料科學(xué)、工程學(xué)、生物學(xué)，甚至醫(yī)學(xué)。在過(guò)去的十年里，納米金(goldnanoparticles，AuNPs)在生物分子檢測(cè)和臨床診斷中的應(yīng)用已經(jīng)引起了高度重視，它具有易于合成和表面修飾、強(qiáng)大的催化效應(yīng)和容易與生物分子結(jié)合等優(yōu)良性質(zhì)。
　　 毛細(xì)管電泳(capillaryelectrophoresis，CE)是一類以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，以毛細(xì)管為分離通道，以樣品的

2、多種特性為依據(jù)的高效分離分析技術(shù)，是繼氣相色譜(gaschromatography，GC)和高效液相色譜(high-performanceliquidchromatography，HPLC)之后分析科學(xué)的又一重大進(jìn)展。CE具有分離效率高、樣品消耗量低、分析時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，是一種新穎的微量分離分析技術(shù)。
　　 化學(xué)發(fā)光免疫分析法(chemiluminescenceimmunoassay，CL-IA)用于定量檢測(cè)復(fù)雜樣品中的低濃度組分

3、，已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于臨床診斷研究。CE結(jié)合CL-IA將同時(shí)具有CE的高分離能力、CL的高靈敏檢測(cè)和IA的高特異性，是分析復(fù)雜生物樣品的有效手段。
　　 本文首次將AuNPs標(biāo)記、CE-CL-IA結(jié)合起來(lái)，發(fā)展了一種新穎的化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，主要研究?jī)?nèi)容和創(chuàng)新點(diǎn)如下：
　　 1.首次利用AuNPs作為CL標(biāo)記物用于毛細(xì)管電泳化學(xué)發(fā)光免疫分析。AuNPs用來(lái)催化luminol-H2O2反應(yīng)，產(chǎn)生強(qiáng)的CL信號(hào)。非競(jìng)爭(zhēng)免疫反應(yīng)后

4、，免疫復(fù)合物和未反應(yīng)的標(biāo)記抗體(Ab*)經(jīng)CE分離后先后流出毛細(xì)管，與CL試劑相遇產(chǎn)生發(fā)光信號(hào)。我們選擇常見(jiàn)的人免疫球蛋白G(humanimmunoglobulinG，hIgG)作為目標(biāo)抗原。在優(yōu)化條件下，免疫復(fù)合物和Ab*在5min內(nèi)得到良好的分離。hIgG的線性范圍為0.008-5μg/mL(R=0.9950)，檢出限為1.14ng/mL(S/N=3)。IgG在人血清中的加標(biāo)回收率在85.0-107.0％之間。該方法成功應(yīng)用于病人血

5、清中IgG的定量檢測(cè)。
　　 2.首次發(fā)現(xiàn)諾氟沙星和環(huán)丙沙星能夠顯著提高luminol-H2O2化學(xué)發(fā)光體系的發(fā)光強(qiáng)度?；谶@種現(xiàn)象，建立了一種CE-CL高靈敏同時(shí)檢測(cè)諾氟沙星和環(huán)丙沙星的新方法。對(duì)CE分離和CL檢測(cè)條件的影響進(jìn)行了系統(tǒng)研究。在優(yōu)化條件下，諾氟沙星和環(huán)丙沙星在4.5min內(nèi)基線分離。諾氟沙星和環(huán)丙沙星的檢出限(S/N=3)分別達(dá)到2.9×10-10和1.1×10-12mol/L，在尿樣分析中的定量限(S/N=10