頭針對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦組織血管新生影響的相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、腦卒中是目前嚴(yán)重危害我國(guó)中老年人生命與健康的疾病，本病突出表現(xiàn)為高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率、高復(fù)發(fā)率，每年我國(guó)有200萬(wàn)人新發(fā)腦卒中，150萬(wàn)人死于腦卒中，其中腦梗死占了全部腦卒中的60～80％，因其居高不下的致死率及致殘率給國(guó)家和眾多家庭造成沉重的經(jīng)濟(jì)和生活負(fù)擔(dān)，故其已成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)課題。大量研究證明，缺血性腦損傷是一系列復(fù)雜的多環(huán)節(jié)的病理生理變化過(guò)程，早期主要以自由基產(chǎn)生、腦水腫、興奮性氨基酸毒性為主；中期以炎癥、神經(jīng)元凋

2、亡為主；后期以神經(jīng)再生、血管新生和膠質(zhì)細(xì)胞增殖等腦重構(gòu)表現(xiàn)為主。
　　腦缺血后，血管新生是腦微循環(huán)修復(fù)重建的一個(gè)重要病理生理過(guò)程。血管新生的程度與卒中后神經(jīng)功能恢復(fù)的程度成正相關(guān)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)有力的血管形成因子。研究表明，腦缺血、缺氧可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體的表達(dá)，應(yīng)用外源性VEGF可促進(jìn)腦缺血半暗帶新生血管的形成，并減少腦梗死體積；環(huán)氧化酶-2(COX-2)是花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素過(guò)程中的

3、重要限速酶。近年來(lái)大量研究表明，COX-2是參與血管新生的重要因子之一；血管生成素(angiopoietins，Ang)是一族特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)因子，它們與血管內(nèi)皮凋亡、血管形成后期的成熟、穩(wěn)定性及重建方面均具有極大的相關(guān)性。近年來(lái)諸多研究均證實(shí)，三者對(duì)血管新生有重要作用，是近年來(lái)國(guó)際上興起的新的研究領(lǐng)域，但其中有關(guān)中醫(yī)藥、針灸的促血管生成作用的研究相對(duì)較少，尤其是關(guān)于頭針的促血管新生的研究鮮有報(bào)道。
　　目的：根據(jù)上

4、述分析，本研究在大鼠局灶性腦缺血模型的基礎(chǔ)上，采用改良線栓法制備MCAO模型，擬“醒腦開竅，祛瘀生新”為治則，取頂顳后斜線、頂顳前斜線，通過(guò)觀察頭針對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠缺血腦組織微血管超微結(jié)果的影響，以及對(duì)VEGF、COX-2、Ang-1三者表達(dá)的影響，從而探討頭針療法對(duì)局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠腦內(nèi)血管新生影響的可能作用機(jī)制。
　　方法：將清潔級(jí)SD雄性大鼠100只隨機(jī)分為模型組（按缺血再灌注6h、24h、48h、96h分4

5、組）、頭針組（缺血再灌注6h、24h、48h、96h分別加電針刺激，分4組）、假手術(shù)組（大鼠麻醉切開頸部皮膚后，僅分離CCA及IPA至PPA，不插線栓）、正常對(duì)照組（大鼠不予處理，正常給水給食），每組10只。各組大鼠采用Zea-Longa評(píng)分方法，隨相應(yīng)時(shí)相評(píng)定動(dòng)物神經(jīng)功能缺損。分別采用免疫組化SABC法檢測(cè)腦缺血再灌注后各時(shí)間點(diǎn)因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧR：Ag)的表達(dá)，采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各組大鼠腦組織缺血半影區(qū)內(nèi)Ang-1mRNA的

6、表達(dá)水平，采用免疫組化法檢測(cè)各組大鼠腦組織缺血半影區(qū)內(nèi)VEGF、ES的表達(dá)水平，采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法、熒光定量PCR檢測(cè)檢測(cè)各組大鼠腦組織缺血半影區(qū)內(nèi)COX-2的表達(dá)水平。結(jié)果：（1）大鼠局灶性腦缺血再灌注后，頭針組和對(duì)照組大鼠均出現(xiàn)神經(jīng)功能障礙，主要表現(xiàn)有：腦梗死灶對(duì)側(cè)前肢內(nèi)收、肩內(nèi)旋，提尾懸空時(shí)左前肢不能伸直或緊貼胸壁，行走時(shí)向右側(cè)轉(zhuǎn)圈、傾倒，肌張力降低等。采用Zea-Longa評(píng)分方法，24h后頭針組和對(duì)照組大鼠CI/

7、RP后神經(jīng)功能均逐漸恢復(fù)，但頭針組較對(duì)照組大鼠恢復(fù)得更好，在96h時(shí)差異最為顯著。（2）采用免疫組化SABC法檢測(cè)FⅧR：Ag，頭針組與模型組比較，F(xiàn)ⅧR：Ag在腦微血管的表達(dá)在缺血后24h開始增加(P＜0.05)并持續(xù)上升，腦缺血后96h的差異具有極顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，頭針治療隨時(shí)間的延長(zhǎng)可使其表達(dá)持續(xù)升高。由此可見頭針治療能夠有效促進(jìn)腦組織缺血半影區(qū)內(nèi)微血管的新生，并且具有明顯的累加蓄積效應(yīng)。（3）采用免疫組化法檢測(cè)A

8、ng-1mRNA，正常對(duì)照組、假手術(shù)組Ang-1mRNA中等量表達(dá)，與模型組比較，頭皮針組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織Ang-1mRNA含量均相對(duì)增多，其中腦缺血再灌注48h Ang-1mRNA含量達(dá)高峰，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01，P<0.05）；（4）采用免疫組化法檢測(cè) VEGF及ES，正常對(duì)照組、假手術(shù)組VEGF中等量表達(dá)，與模型組比較，頭皮針組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織 VEGF含量增多，ES含量減少，其中腦缺血再灌注48h V

9、EGF含量達(dá)高峰，24h ES含量達(dá)最低峰，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01，P<0.05）；（5）采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法、熒光定量PCR檢測(cè)COX-2，正常對(duì)照組、假手術(shù)組COX-2少量表達(dá)，于模型組比較，頭皮針組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織COX-2 mRNA及蛋白含量均減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中腦缺血再灌注24hCOX-2 mRNA含量、96h COX-2蛋白含量與模型組比較，差異最為顯著（P<0.