苦丁茶冬青化學(xué)成分及其抗血小板聚集活性研究.pdf

1、苦丁茶冬青是冬青科冬青屬植物，以干燥葉入藥，性平味苦，具有清熱解暑的功效?？喽〔瓒嘀饕腥圃碥疹?、多酚類、多糖類和揮發(fā)油類等化學(xué)成分，具有降血壓、降血脂和抗菌消炎等藥理作用，臨床上用于治療高血壓、高血脂和高血糖等疾病。本課題對(duì)苦丁茶冬青化學(xué)成分展開了較為系統(tǒng)的研究，選擇了具有代表性的化合物進(jìn)行含量測(cè)定，并對(duì)分離得到的三萜皂苷類化合物進(jìn)行了體外ADP誘導(dǎo)的抗血小板聚集活性篩選，以期為后續(xù)深入研究苦丁茶冬青的藥理作用和質(zhì)量控制方法提供

2、科學(xué)參考。
　　本實(shí)驗(yàn)以苦丁茶冬青葉的甲醇提取物為材料，依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取得到各部位的浸膏，再綜合運(yùn)用各種柱色譜法和重結(jié)晶法對(duì)各部位浸膏進(jìn)行化學(xué)成分的分離純化。共分離得到35個(gè)化合物，通過理化性質(zhì)、IR、NMR和HR-MS等方法鑒定其結(jié)構(gòu)為:3-O-β-D-glucopyranosyl(1→3)-[α-L-rhamnopyranosyl(1→2)]-α-L-arabinopyranosylurs-12,1

3、9(29)-dien-28-oic acid28-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranosyl ester(1)、3-O-β-D-glucopyranosyl(1→3)-[α-L-rhamnopyranosyl(1→2)]-α-L-arabinopyranosyl-19α,20α-dihydroxyurs-12-en-28-oic acid28-O-α-L-rhamnopyranosyl(1

4、→2)-β-D-glucopyranosyl ester(2)、熊果酸(3)、kudinosideD(4)、kudinoside G(5)、latifoloside C(6)、latifoloside G(7)、latifoloside H(8)、kudinosideA(9)、latifoloside Q(10)、ilekudinoside T(11)、kudinoside E(12)、kudinoside H(13)、ilekudin

5、oside R(14)、齊墩果酸(15)、ilekudinoside K(16)、19α-羥基-齊墩果酸-3β-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(17)、4-羥基-3-甲氧基-α-甲基苯甲醇(18)、異阿魏酸(19)、2-甲氧基苯乙酸(20)、咖啡酸(21)、3，4-二羥基苯甲酸(22)、羥基酪醇葡萄糖苷(23)、3-咖啡?？崴?24)、5-咖啡?？崴?25)、3，5-O-二咖啡?？崴峒柞?26)、3，4

6、-O-二咖啡?？崴?27)、3，4-O二咖啡?？崴峒柞?28)、3，5-O-二咖啡?？崴?29)、阿魏酸(30)、β-胡蘿卜苷(31)、β-谷甾醇(32)、槲皮素-3-O-葡萄糖苷(33)、蘆丁(34)和6-hydroxy-7，7a-dihydro-2(6H)-benzofuranone(35)，其中化合物1和2為新化合物，化合物17、19、33和35首次從苦丁茶冬青中分離得到。
　　為了加強(qiáng)苦丁茶冬青的質(zhì)量控制，本實(shí)驗(yàn)在前

7、期化學(xué)成分研究的基礎(chǔ)上，采用高效液相色譜法測(cè)定了苦丁冬青多個(gè)化合物的含量。首先建立了同時(shí)測(cè)定苦丁茶冬青中7個(gè)三萜皂苷類化合物(4～9、12)含量的方法，色譜條件:YMC C18色譜柱(YMC-packODS-A，250×4.6 nm.5μm)，乙腈-水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，柱溫為30℃;結(jié)果表明7個(gè)三萜皂苷化合物均有良好的分離度，在0.22～4.95(r＞0.9999)、0.24～5.

8、40(r＞0.9995)、0.20～4.50(r＞0.9996)、1.02～22.95(r＞0.9999)、0.96～21.60(r＞0.9999)、1.18～26.55(r＞0.9999)和0.30～6.75(r＞0.9999)μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率在99.25％～100.8％，RSD＜2％。隨后又建立了測(cè)定苦丁茶冬青中5個(gè)酸類化合物(21，23，27，29，35)含量的方法，色譜條件:kromasilC18色譜

9、柱(kromasil，250×4.6 nm.5μm)，乙腈-水（含0.02％三氟乙酸）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm，柱溫為30℃;結(jié)果表明5個(gè)酸類化合物均的分離度良好，在0.003～0.043(r＞0.9999)、0.036～0.450(r＞0.9999)、0.052～0.650(r＞0.9999)、0.280～3.500(r＞0.9999)、0.400～5.000(r＞0.9999)μg/m

10、L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系;平均加樣回收率在96.37％～103.3％，RSD＜3％。共測(cè)定了苦丁茶冬青中12個(gè)化合物，所采用的測(cè)定方法簡(jiǎn)單有效，具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性，能為后續(xù)的苦丁茶冬青質(zhì)量控制研究提供參考。
　　文獻(xiàn)報(bào)道冬青屬植物三萜類化合物具有抗血小板聚集活性，因此本實(shí)驗(yàn)對(duì)分離得到的三萜類化合物進(jìn)行體外ADP(5μM)誘導(dǎo)的抗血小板聚集活性篩選，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，化合物1、2、10、11、13和16具有顯著的抗血小板聚集活性，