石榴皮安石榴苷的制備及其亞急性毒性實(shí)驗(yàn)和肝毒性機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：1.考察石榴皮多酚提取物亞急性毒性，初步評(píng)價(jià)其安全性，為長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)的劑量設(shè)計(jì)提供依據(jù)。2.通過(guò)HPLC指紋圖譜方法，對(duì)喀什和田兩地不同批次的石榴皮藥材進(jìn)行相似度分析。3.通過(guò)純化工藝制備石榴皮安石榴苷精制物。4.石榴皮安石榴苷精制物對(duì) LDLr-/-小鼠給藥三個(gè)月的毒性考察。5.初步探討石榴皮安石榴苷精制物致膽汁淤積型肝毒性的機(jī)制。
　　方法：1.石榴皮多酚提取物給藥30 d，記錄各組小鼠的一般活動(dòng)情況、監(jiān)測(cè)體重、食物消耗

2、量及毒性反應(yīng)，給藥末期禁食24 h剖殺2/3的小鼠，剩余小鼠恢復(fù)觀察2W后剖殺。檢測(cè)給藥期和恢復(fù)期小鼠的血液學(xué)指標(biāo)及生化指標(biāo)，HE染色觀察肝臟形態(tài)學(xué)變化。2.對(duì)HPLC指紋圖譜方法的精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性進(jìn)行考察，對(duì)喀什和田兩地不同批次的石榴皮藥材進(jìn)行相似度分析。3.篩選喀什和田兩地的石榴皮藥材，進(jìn)行安石榴苷的制備并通過(guò) HPLC檢測(cè)安石榴苷含量。4.石榴皮安石榴苷精制物對(duì)LDLr-/-小鼠3個(gè)月毒性實(shí)驗(yàn)，監(jiān)測(cè)體重，解剖時(shí)對(duì)臟器外觀大體

3、觀察，檢測(cè)生化指標(biāo)，病理組織學(xué)檢查。5.QRT-PCR法探討膽汁轉(zhuǎn)運(yùn)受體的MRP-3、BESP、MRP-2、CYP7A1、PPARα五項(xiàng)經(jīng)典的轉(zhuǎn)運(yùn)通路mRNA表達(dá)量。
　　結(jié)果：1.亞急性毒性試驗(yàn)期間，各組小鼠生長(zhǎng)活動(dòng)正常。給藥期結(jié)束時(shí)，各劑量組小鼠體重增重、食物利用率與空白對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；血液學(xué)指標(biāo)及血生化指標(biāo)均無(wú)顯著特異性的差異。給藥末期各劑量組與空白對(duì)照組小鼠的肝臟系數(shù)比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P

4、<0.01），而恢復(fù)期觀察中只有中、高劑量組小鼠的肝臟系數(shù)與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），在恢復(fù)期肝臟病理切片觀察中高劑量組小鼠肝臟有毒性表現(xiàn)，即肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死伴炎癥細(xì)胞的反應(yīng)，可見(jiàn)部分肝小葉中央靜脈輕度擴(kuò)張并淤血，肝竇內(nèi) kuffer細(xì)胞明顯增生，匯管區(qū)可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。2.石榴皮藥材指紋圖譜，方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明石榴皮藥材HPLC指紋圖譜精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性均符合要求，12批石榴皮藥材相似度較高，不同石榴皮藥材在化

5、學(xué)成分的組成上基本一樣。3.喀什石榴皮藥材所含安石榴苷成分略高于和田石榴皮，相同工藝用喀什石榴皮制備的安石榴苷含量均在80％以上。4.石榴皮安石榴苷精制物給藥3個(gè)月后，病理組織學(xué)檢查中 HFD+PU=500mg/kg·d劑量組、HFD+PU=750mg/kg·d劑量組的小鼠肝臟顯示膽汁淤積型肝損傷。5.QRT-PCR實(shí)驗(yàn)中BESP的mRNA表達(dá)量顯示下調(diào)，MRP2的mRNA表達(dá)量顯示下調(diào)，MRP3的mRNA表達(dá)量顯示上調(diào)，CPY7A1的

6、mRNA的表達(dá)量顯示下調(diào)，PPARα的mRNA的表達(dá)量顯示上調(diào)。
　　結(jié)論：石榴皮多酚提取物亞急性毒性實(shí)驗(yàn)中高劑量下表現(xiàn)肝毒性?？κ埠吞飪傻馗髋蔚氖衿に幉南嗨??？κ彩衿ぐ彩褴蘸烤?0%高于和田石榴皮藥材的安石榴苷含量。石榴皮安石榴苷干預(yù)LDLr-/-小鼠3個(gè)月，在肝臟病理切片中，高劑量組HFD+PU=500mg/kg·d組和HFD+PU=750mg/kg·d組表現(xiàn)出膽汁淤積型肝損傷。對(duì)石榴皮安石榴苷致膽汁淤積肝損傷機(jī)制