石榴皮提取物抗兔球蟲(chóng)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、石榴皮中生物活性成分較多,以鞣質(zhì)類(多酚)、黃酮類、生物堿類、有機(jī)酸類為主.作為傳統(tǒng)中藥,石榴皮有多種藥用功效.藥典(2010版)明確指出石榴皮具有澀腸止瀉、止血、驅(qū)蟲(chóng)的功效.兔球蟲(chóng)病是家兔最常見(jiàn)的一種寄生蟲(chóng)病,感染率高、患病幼兔死亡率高達(dá)40％～70％,對(duì)養(yǎng)兔業(yè)危害較大.石榴皮的提取物對(duì)家兔球蟲(chóng)的殺滅作用,對(duì)家兔球蟲(chóng)病的防治作用及其作用途徑未見(jiàn)報(bào)道.本文通過(guò)研究石榴皮提取物對(duì)離體培養(yǎng)兔球蟲(chóng)卵囊和家兔糞便中球蟲(chóng)卵囊檢出數(shù)量,以及家兔肝、

2、腸病理切片中球蟲(chóng)數(shù)量等的影響,探索石榴皮提取物防治家兔球蟲(chóng)病的藥用價(jià)值及機(jī)理,以期為球蟲(chóng)病的防治提供參考.
　　本研究分為以下四個(gè)部分:
　　一、石榴皮黃酮的制備及含量測(cè)定選用棗莊甜石榴的干燥果皮,粉碎,過(guò)60目篩,以70％乙醇作為溶劑,料液比1g﹕20ml混合.80℃水浴浸提3小時(shí),過(guò)濾.濾液再加4％明膠溶液沉淀,過(guò)濾.將濾液干燥即可制得石榴皮黃酮粗提物粉末,得率約為25％左右.利用分光光度法測(cè)得黃酮粗提物粉末中總黃酮的含

3、量為117mg/g.結(jié)果提示:該法能簡(jiǎn)便高效地提取石榴皮黃酮,得率和含量都較好,可以應(yīng)用于下面的研究。
　　二、石榴皮提取物對(duì)離體培養(yǎng)兔球蟲(chóng)卵囊的殺滅作用采集已感染球蟲(chóng)的18只家兔(體重2.0～2.5kg)的新鮮糞便(24h內(nèi),35g/只),用飽和鹽水漂浮法分離、提取球蟲(chóng)卵囊.球蟲(chóng)卵囊分別在蒸餾水、石榴皮水提物、石榴皮黃酮、石榴皮多酚、鹽酸氯苯胍中培養(yǎng)24、48、72h,光鏡下觀察不同濃度的各種藥物對(duì)兔球蟲(chóng)卵囊數(shù)量的影響.結(jié)果顯示

4、,與蒸餾水組比較,5、10mg/mL劑量組培養(yǎng)72h,四種藥物均使兔球蟲(chóng)卵囊數(shù)量明顯減少(P＜0.05).球蟲(chóng)卵囊的減少率石榴皮水提物組大于石榴皮黃酮組,石榴皮黃酮組大于石榴皮多酚組和鹽酸氯苯胍組;起效時(shí)間48～72h.1mg/mL劑量組四種藥物雖可使兔球蟲(chóng)卵囊數(shù)量減少,但無(wú)顯著差異(P＞0.05).結(jié)果提示:石榴皮提取物對(duì)體外培養(yǎng)的兔球蟲(chóng)卵囊有較強(qiáng)的殺滅作用;其中石榴皮水提物對(duì)兔球蟲(chóng)卵囊殺滅作用最強(qiáng),石榴皮黃酮和石榴皮多酚次之;其殺滅

5、作用呈一定的正相關(guān)量效關(guān)系.
　　三、口服石榴皮提取物對(duì)家兔糞便、肝腸中球蟲(chóng)卵囊檢出率的影響選取體重2.0kg左右、已患球蟲(chóng)病的家兔,隨機(jī)分為空白對(duì)照組(1mL雙蒸水口服/㎏體重/d),石榴皮水提取物組和鹽酸氯苯胍(市售藥物)組,二者的給藥劑量均為25㎎/㎏體重/d.石榴皮水提取物組和鹽酸氯苯胍組均給藥3天、6天、9天、12天、15天,每天觀察其糞便中球蟲(chóng)卵囊數(shù)的變化.在不同時(shí)間,分別過(guò)量麻醉處死動(dòng)物,取其肝臟、結(jié)腸、回腸、盲腸進(jìn)

6、行石蠟切片,H.E染色,光鏡比較觀察.結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著給藥時(shí)間延長(zhǎng),石榴皮水提物組和鹽酸氯苯胍組糞便中檢出的卵囊數(shù)總趨勢(shì)均減少,且卵囊數(shù)量的消長(zhǎng)周期較雙蒸水組縮短.卵囊最大減少率,石榴皮組整體優(yōu)于鹽酸氯苯胍組.病理切片中斯氏艾美耳球蟲(chóng)和黃艾美耳球蟲(chóng)卵囊的檢出率表明,石榴皮水提物和鹽酸氯苯胍對(duì)肝內(nèi)的斯氏艾美耳球蟲(chóng)均有殺滅作用;對(duì)腸內(nèi)的黃艾美耳球蟲(chóng)的殺滅效果均不顯著.研究結(jié)果提示:石榴皮水提物對(duì)肝內(nèi)斯氏艾美耳球蟲(chóng)的殺滅作用,以及對(duì)腸內(nèi)黃艾美耳球