Kv7通道對(duì)子癇前期胎盤(pán)絨毛膜板動(dòng)脈血管張力的影響及機(jī)制.pdf

1、目的:通過(guò)對(duì)比正常血壓妊娠(NP)和子癇前期(PE)胎盤(pán)絨毛膜板動(dòng)脈(CPAs)上Kv7通道表達(dá)及其對(duì)血管張力調(diào)節(jié)功能的差異，探討Kv7通道對(duì)子癇前期胎盤(pán)絨毛膜動(dòng)脈血管張力的影響及可能的機(jī)制。
　　方法:
　　1、離體血管環(huán)張力實(shí)驗(yàn):①檢測(cè)不同濃度Kv7通道阻滯劑XE991(10-7-10-4mol/L)對(duì)NP組(n=10)和PE組(n=10) CPAs血管環(huán)基礎(chǔ)張力的影響，并分析比較NP組和PE組CPAs血管在10-6、1

2、0-5、5×10-5 mol/L不同濃度XE991作用下基礎(chǔ)張力的變化;②檢測(cè)不同濃度血管預(yù)收縮劑U46619（血栓素A2受體激動(dòng)劑）（10-10-3×10-6 mol/L）在無(wú)XE991預(yù)處理或有XE991預(yù)處理時(shí)對(duì)NP組(n=10)和PE組(n=10) CPAs血管環(huán)張力的影響，并分析比較NP組和PE組XE991對(duì)預(yù)收縮劑U46619收縮作用影響的差異;③檢測(cè)不同Kv7通道開(kāi)放劑Retigabine、BMS-204352、ICA-2

3、7243、ML277（10-7-10-4mol/L）對(duì)NP組(n=10)和PE組(n=10) U46619(10-7mol/L)預(yù)收縮CPAs血管環(huán)張力的影響;
　　2、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(QPCR):15例確診為子癇前期并在該院終止妊娠孕婦為PE組，15例我院終止妊娠的血壓正常孕婦為NP組，分離提取胎盤(pán)絨毛膜板動(dòng)脈血管平滑肌總RNA，合成cDNA并進(jìn)行SYBR Green熒光定量PCR反應(yīng)，得到相應(yīng)的Ct值，計(jì)算出ΔCt值（=目

4、的基因Ct值-β-actin內(nèi)參基因的Ct值），然后以NP組第一個(gè)樣本為參照因子計(jì)算ΔΔCt（=目的基因ΔCt值-NP1目的基因ΔCt值），2-ΔΔCt處理后可進(jìn)行相對(duì)表達(dá)量分析;
　　3、Western blotting實(shí)驗(yàn):NP組和PE組標(biāo)本各15例均來(lái)自定量PCR實(shí)驗(yàn)中研究對(duì)象，提取CPAs血管平滑肌總蛋白并測(cè)定蛋白濃度，SDS-PAGE電泳后轉(zhuǎn)至PVDF膜，抗體孵育后凝膠成像系統(tǒng)成像后保存圖像，用Quantity-One軟

5、件測(cè)量灰度值，以目的蛋白與內(nèi)參β-Actin蛋白灰度值比值作為該目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用SPSS11.0和GraphPad Prism5.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:
　　(1)離體血管環(huán)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:①Kv7離子通道非特異阻斷劑XE991(10-7-10-4 mol/L)能濃度依賴性的升高NP組(n=10) CPAs血管環(huán)的基礎(chǔ)張力，與DMSO（二甲亞砜溶劑）對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

6、意義;在5x10-5mol/L時(shí)張力變化百分比達(dá)最大，為44.67±9.52％，在10-4mol/L時(shí)出現(xiàn)明顯舒張反應(yīng)，張力下降達(dá)29.61±6.47％左右。Kv7離子通道非特異阻斷劑XE991(10-6，10-5，5×10-5M/L)收縮PE組(n=10) CPAs血管環(huán)的作用較NP組明顯減弱，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②對(duì)NP組來(lái)說(shuō)，未加X(jué)E991預(yù)處理時(shí)，預(yù)收縮劑U46619（10-10-3×10-6mol/L）能濃度依賴性的收縮CPA

7、s血管環(huán)，與DMSO對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;加10-5mol/L XE991孵育后，U46619（10-10-3×10-6 mol/L）各濃度引起的張力變化百分比均較未用XE991孵育明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)PE組來(lái)說(shuō)，加10-5mol/LXE991孵育后，U46619在10-8、10-7、10-6mol/L濃度引起的CPAs血管環(huán)張力變化百分比較未加10-5mol/L XE991孵育相比差異不大，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③NP

8、組:與DMSO對(duì)照組相比，Kv7通道開(kāi)放劑Retigabine(n=10)、BMS-204352(n=10)（10-9～10-4mol/L）均能濃度依賴性的舒張U46619(10-7mol/L)預(yù)收縮的CPAs血管環(huán),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;但I(xiàn)CA-27243(n=10)、ML277(n=10)對(duì)U46619(10-7mol/L)預(yù)收縮的血管環(huán)張力無(wú)影響,差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PE組:與NP組對(duì)比，Retigabine(n=10)、BMS-

9、204352(n=10)(10-9～10-4mol/L)舒張U46619(10-7mol/L)預(yù)收縮的CPAs血管環(huán)的能力明顯減弱，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;ICA-27243(n=10)(10-9～10-4mol/L)在10-5mol/L和10-4mol/L濃度能舒張CPAs血管環(huán),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ML277對(duì)U46619(10-7mol/L)預(yù)收縮的CPAs血管環(huán)的舒張作用不明顯,差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(2)NP組(n=1

10、5)和PE組(n=15)兩組比較發(fā)現(xiàn)基因KCNQ1、KCNQ2、KCNQ3、KCNQ4、KCNQ5的mRNA相對(duì)表達(dá)量分別是:1.1148±0.0351、1.0172±0.0247、1.0337±0.0224、1.0223±0.0473、1.0280±0.0510和1.1017±0.0547、0.9993±0.0589、1.7448±0.0678、0.1123±0.0117、0.1133±0.0129;而且與NP組相比，KCNQ1和KC

11、NQ2的mRNA的表達(dá)水平差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，基因KCNQ3、KCNQ4和KCNQ5的mRNA的表達(dá)水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; PE組基因KCNQ3的mRNA表達(dá)水平明顯上調(diào)，基因KCNQ4和KCNQ5的mRNA表達(dá)水平明顯下調(diào)。
　　(3)NP組(n=15)KCNQ3-5的蛋白相對(duì)表達(dá)量分別是:0.1845±0.032、0.6147±0.0426、0.5738±0.0192，PE組(n=15)KCNQ3-5的蛋白相對(duì)表達(dá)量分別是

12、:0.5083±0.0377、0.2657±0.0461、0.2594±0.0587，三者之間兩兩比較差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與NP組相比，PE組基因KCNQ3的蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)，基因KCNQ4和KCNQ5的蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1.Kv7通道參與調(diào)節(jié)正常血壓妊娠的胎盤(pán)絨毛膜板動(dòng)脈血管張力;與正常血壓妊娠相比，Kv7通道調(diào)節(jié)子癇前期的胎盤(pán)絨毛膜板動(dòng)脈血管張力的能力明顯減弱;
　　2.與正常血壓妊

13、娠相比，子癇前期妊娠婦女CPAs血管平滑肌上KCNQ1、KCNQ2的mRNA表達(dá)差異不明顯，KCNQ3亞型的mRNA及蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，KCNQ4、KCNQ5的mRNA及蛋白表達(dá)明顯下調(diào);
　　3.Kv7離子通道調(diào)節(jié)子癇前期絨毛膜板動(dòng)脈張力的能力明顯減弱主要與KCNQ4和KCNQ5亞型表達(dá)下調(diào)有關(guān);
　　4.KCNQ3通道可能參與調(diào)節(jié)子癇前期妊娠婦女的CPAs血管的舒張，即KCNQ3通道的表達(dá)及功能的轉(zhuǎn)變可以看作是KCNQ4