子癇前期外周血及胎盤組織中相關(guān)蛋白的研究.pdf

1、目的應(yīng)用同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量（iTRAQ）技術(shù)聯(lián)合液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)技術(shù)檢測(cè)子癇前期及正常妊娠孕婦血漿中的差異蛋白，從而篩選出潛在的子癇前期血漿生物標(biāo)志物，并初步探討其在子癇前期中的可能作用機(jī)制。
　　方法臨床收集2012年6月～2013年6月在青島大學(xué)附屬醫(yī)院產(chǎn)科住院期間子癇前期患者60例，其中子癇前期重度患者30例（重度組），子癇前期輕度患者30例（輕度組），同期正常妊娠孕婦30例（對(duì)照組）。采血分離血

2、漿提取總蛋白，隨后對(duì)重度組和對(duì)照組血漿總蛋白進(jìn)行變性、還原、酶解，iTRAQ標(biāo)記后用質(zhì)譜儀進(jìn)行鑒定，得到差異表達(dá)蛋白。選取差異蛋白Gelsolin、S100A8應(yīng)用ELIAS、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。
　　結(jié)果①iTRAQ聯(lián)合LC-MS/MS技術(shù)共鑒定到血漿差異蛋白234個(gè)，重度組較對(duì)照組表達(dá)豐度相差1.5倍以上（上調(diào)比值＞1.50或下調(diào)比值＜0.67）且經(jīng)t檢驗(yàn)證實(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的蛋白質(zhì)點(diǎn)共有24個(gè)，其中14個(gè)蛋

3、白點(diǎn)較對(duì)照組表達(dá)上調(diào)，另10個(gè)點(diǎn)較之表達(dá)下調(diào)。②輕度組及重度組子癇前期患者血漿中Gelsolin水平分別為(0.288±0.013)ng/L、(0.363±0.152) ng/L，明顯高于對(duì)照組(0.204±0.101)ng/L，分別比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(P＜0.05);③輕度組及重度組子癇前期患者血漿中S100A8水平分別為(0.687±0.064) ng/L、(0.928±0.101)ng/L，明顯高于對(duì)照組(0.550±0.07

4、3)ng/L，分別比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(P＜0.05);④單因素方差分析顯示子癇前期患者胎盤組織中Gelsolin mRNA水平明顯高于對(duì)照組(0.90±0.037)，再比較輕度組(2.44±0.614)及重度組(4.42±1.059)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);⑤單因素方差分析顯示子癇前期患者胎盤組織中S100A8 mRNA水平明顯高于對(duì)照組(0.98±0.04)，再比較輕度組(3.83±0.879)及重度組(7.59±1.

5、803)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);⑥子癇前期患者血漿中Gelsolin水平與胎盤組織中Gelsolin mRNA的表達(dá)水平無相關(guān)性(r=0.163，P＞0.05);⑦子癇前期患者血漿中S100A8水平與胎盤組織中S100A8 mRNA的表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.701，P＜0.01)。
　　結(jié)論 iTRAQ聯(lián)合LC-MS/MS技術(shù)能夠有效地篩選出子癇前期血漿差異蛋白。Gelsolin和S100A8的差異表達(dá)與子癇前期的發(fā)