碘海醇對HEK293細(xì)胞損傷作用及碳酸氫鈉和氯化鈉干預(yù)研究.pdf

1、目的:本文旨在通過分析碘海醇對HEK293細(xì)胞的損傷作用分析對比劑腎病的發(fā)病機(jī)制，并對比分析碳酸氫鈉及氯化鈉對細(xì)胞凋亡的影響，并就其中的機(jī)制在細(xì)胞學(xué)層面展開研究與探討。
　　目前對比劑腎病相關(guān)的腎衰已經(jīng)是急性腎衰的第三大原因。對比劑的直接毒性作用和對比劑導(dǎo)致的腎臟血流動力學(xué)改變以及氧化應(yīng)激損傷成為目前CIN的三大機(jī)制。
　　水化成為預(yù)防對比劑腎病(CIN)公認(rèn)的策略，氯化鈉還是碳酸氫鈉選擇的問題至今仍沒有確切的證據(jù)。與此同時

2、，研究表示:相對應(yīng)的抗氧化策略（N-乙酰半胱氨酸、抗壞血酸、碳酸氫鈉）可以有效降低CIN的發(fā)生。目前:對于N-乙酰半胱氨酸和抗壞血酸的研究，負(fù)面的呼聲越來越大，碳酸氫鈉降低CIN發(fā)生率的研究成為CIN預(yù)防的一大熱點(diǎn)。當(dāng)前的細(xì)胞學(xué)研究得出:碳酸氫鈉可通過降低PH依賴的氧自由基的產(chǎn)生或通過消除NO產(chǎn)生的過氧亞硝酸鹽和其它活性物質(zhì)，或通過降低NF-KB的活化來減少炎癥和氧化應(yīng)激損害來減少細(xì)胞的凋亡。
　　研究方法:1.我們選取HEK29

3、3細(xì)胞，分為5組，每組選取碘海醇非離子低滲對比劑，濃度分別為0，80，100，120，160(mgI/ml)，采用Western blot實(shí)驗(yàn)6小時后檢測細(xì)胞凋亡。2.將HEK293細(xì)胞分為6組，培養(yǎng)基對照組、碘海醇刺激組、氯化鈉刺激組、碳酸氫鈉刺激組、碳酸氫鈉干預(yù)組、氯化鈉干預(yù)組。1）Westen blot檢測caspase-3的表達(dá)。2）流式AnnexinⅤ-FITC/PI雙染檢測細(xì)胞凋亡率。3）流式DCFH-DA活性法測定細(xì)胞活性

4、氧水平。
　　結(jié)果:1.碘海醇刺激的HEK293細(xì)胞，其caspase-3的蛋白表達(dá)呈劑量依懶性增加(P＜0.05)。2.碳酸氫鈉刺激組和氯化鈉刺激組對細(xì)胞凋亡率、caspase-3蛋白的表達(dá)、ROS的生成無影響(P＞0.05)。氯化鈉干預(yù)組和碳酸氫鈉干預(yù)組同碘海醇刺激組相比可以減少細(xì)胞凋亡(P＜0.05)。Western blot測定caspase-3含量，以caspase-3/β-tubulin來表示，分別為(3.74±0.2

5、0)、(2.64±0.13)和(4.99±1.36)(P＜0.05)。流式AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法測得細(xì)胞凋亡率分別為(7.53±1.14)％、(3.80±2.29)％比(10.43±2.87)％(P＜0.05)。3.氯化鈉干預(yù)組、碳酸氫鈉干預(yù)組同碘海醇刺激組相比，ROS水平分別為培養(yǎng)基對照組的(2.28±0.48)倍、(1.93±0.27)倍、(3.31±0.75)倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。碳酸氫鈉干預(yù)組和氯