蛋白質(zhì)在疏水性相互作用色譜介質(zhì)上吸附的量熱學(xué)研究.pdf

1、疏水性相互作用色譜(HIC)是一種有效的色譜分離手段，被廣泛地應(yīng)用于蛋白質(zhì)等生物大分子和生物納米顆粒的純化中?，F(xiàn)有的研究表明，蛋白質(zhì)在HIC色譜介質(zhì)上的吸附可能導(dǎo)致蛋白構(gòu)象的改變和活性的降低。本文利用等溫滴定量熱儀和van't Hoff分析法，通過(guò)對(duì)牛血清白蛋白(BSA)在HIC色譜介質(zhì)PhenylSepharose6 Fast Flow上吸附過(guò)程的量熱分析研究蛋白構(gòu)象的變化行為。主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　 一、使用間歇搖瓶法考察

2、了鹽種類(lèi)、鹽濃度、配基密度、溫度條件對(duì)BSA在HIC介質(zhì)上靜態(tài)吸附平衡特性的影響，結(jié)果表明：Na2SO4對(duì)吸附的促進(jìn)作用強(qiáng)于(NH4)2SO4；提高鹽濃度和配基密度能夠促進(jìn)吸附：溫度在18℃到25℃之間，BSA在HIC介質(zhì)上的吸附是吸附主導(dǎo)的過(guò)程(adsorption-dominated process)，25℃到35℃之間，是分配主導(dǎo)的過(guò)程(partition-dominated process)。
　　 二、使用等溫滴定量熱

3、法(ITC)測(cè)量得到BSA在HIC介質(zhì)上吸附過(guò)程的熱量變化，并計(jì)算得到吸附過(guò)程的吉布斯自由能變?chǔ)，焓變?chǔ)，熵變?chǔ)，通過(guò)分析，得出結(jié)論：1、BSA在HIC介質(zhì)上吸附的過(guò)程存在焓熵補(bǔ)償(EEC)現(xiàn)象。吸附作用較弱時(shí)，焓變一部分用于補(bǔ)償不利的熵變，一部分驅(qū)動(dòng)吸附的進(jìn)行;吸附作用越強(qiáng)，焓變對(duì)熵變的補(bǔ)償程度越低；最后，焓變和熵變共同驅(qū)動(dòng)吸附的進(jìn)行。2、BSA在HIC介質(zhì)上吸附的過(guò)程中發(fā)生了較大的構(gòu)象變化，并伴隨著水分子的釋放，該過(guò)程對(duì)整個(gè)吸