小鼠肝臟引流淋巴結(jié)及其功能研究.pdf

1、肝臟是機(jī)體最大的實(shí)質(zhì)器官，它在代謝和造血等方面發(fā)揮重要功能。隨著研究深入，肝臟作為一個“免疫器官”的概念受到越來越廣泛的認(rèn)可。作為“免疫器官”，肝臟具有天然免疫優(yōu)勢和免疫耐受兩大特征:肝臟中含有豐富的天然免疫細(xì)胞，這使其能夠很好的發(fā)揮過濾血液、清除有害物質(zhì)及血源性病原體的重要功能;另一方面，肝臟中活化信號不足以及大量的免疫負(fù)調(diào)信號使其成為誘導(dǎo)免疫耐受的場所。肝臟具有發(fā)達(dá)的淋巴系統(tǒng)，它產(chǎn)生大量的淋巴液，攜帶抗原的淋巴液被引流入肝臟的引流淋

2、巴結(jié)中。然而作為肝臟免疫系統(tǒng)的重要組成部分，肝臟引流淋巴結(jié)在肝臟行使免疫功能的過程中所發(fā)揮的作用尚不清楚，而且關(guān)于肝臟引流淋巴結(jié)的基礎(chǔ)知識也還有待闡明。
　　本項(xiàng)研究中，我們詳細(xì)描述了肝臟引流淋巴結(jié)的解剖學(xué)位置，并對肝臟引流淋巴結(jié)的結(jié)構(gòu)、細(xì)胞組成、器官發(fā)生以及功能進(jìn)行了研究，主要結(jié)果包括以下四個方面:
　　1、肝臟引流淋巴結(jié)的解剖學(xué)位置和特征
　　通過給小鼠肝內(nèi)注射伊文思藍(lán)染料對肝臟的淋巴引流進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)肝門區(qū)域有兩

3、個淋巴結(jié)可以引流肝臟的淋巴液:其中一個淋巴結(jié)依附在肝門靜脈上，命名為肝臟門側(cè)淋巴結(jié);另外一個位于肝十二指腸韌帶中、在腹腔更深處，命名為肝臟腹側(cè)淋巴結(jié)。肝臟門側(cè)淋巴結(jié)和腹側(cè)淋巴結(jié)通過不同淋巴管引流肝臟的淋巴液，這證明它們是兩個獨(dú)立的肝臟引流淋巴結(jié)。另外，肝臟門側(cè)淋巴結(jié)和腹側(cè)淋巴結(jié)的解剖學(xué)特性不同種屬動物中保守。
　　2、肝臟引流淋巴結(jié)的基本結(jié)構(gòu)和細(xì)胞組成
　　通過組織免疫熒光染色，我們對肝臟門側(cè)淋巴結(jié)和腹側(cè)淋巴結(jié)的基本結(jié)構(gòu)進(jìn)行

4、觀察，結(jié)果表明肝臟門側(cè)淋巴結(jié)和腹側(cè)淋巴結(jié)都具有經(jīng)典的淋巴結(jié)的結(jié)構(gòu)。值得注意的是，肝臟門側(cè)淋巴結(jié)和腹側(cè)淋巴結(jié)不僅表達(dá)外周淋巴結(jié)地址素分子，還表達(dá)粘膜相關(guān)地址素分子。通過流式細(xì)胞術(shù)，我們對肝臟門側(cè)淋巴結(jié)和腹側(cè)淋巴結(jié)的細(xì)胞組成進(jìn)行了詳細(xì)分析。肝臟門側(cè)淋巴結(jié)和腹側(cè)淋巴結(jié)具有特殊的細(xì)胞組成:一方面，肝臟引流淋巴結(jié)的細(xì)胞組成與腸系膜淋巴結(jié)類似，而與外周淋巴結(jié)具有明顯差別，如肝臟引流淋巴結(jié)和腸系膜淋巴結(jié)中存在DX5-NK細(xì)胞、CD103+DC細(xì)胞、N

5、KT細(xì)胞，而缺少ICOS+Treg細(xì)胞、CD27-CD44h(i)γδT細(xì)胞;另一方面，肝臟門側(cè)淋巴結(jié)和腹側(cè)淋巴結(jié)的細(xì)胞組成存在明顯差異，如肝臟門側(cè)淋巴結(jié)中存在更多的CD103+DC和生發(fā)中心B細(xì)胞，而肝臟腹側(cè)淋巴結(jié)中存在更多的γδT細(xì)胞和NKT細(xì)胞。
　　3、肝臟引流淋巴結(jié)的器官發(fā)生
　　通過給處于不同妊娠期的孕鼠注射LTβR-Ig-Fc在小鼠胚胎期不同時(shí)間點(diǎn)阻斷淋巴結(jié)形成來觀察肝臟引流淋巴結(jié)的器官發(fā)生時(shí)相。結(jié)果表明，肝臟

6、門側(cè)淋巴結(jié)的器官發(fā)生起始時(shí)間早于胚胎期15.5天，肝臟腹側(cè)淋巴結(jié)的器官發(fā)生起始時(shí)間在胚胎期16.5天和18.5天之間;肝臟門側(cè)淋巴結(jié)的器官發(fā)生只部分依賴于LTβR的信號，而肝臟腹側(cè)淋巴結(jié)的器官發(fā)生完全依賴于LTβR的信號。值得注意的是，在Nfil3-/-小鼠中，肝臟腹側(cè)淋巴結(jié)發(fā)育異常，主要表現(xiàn)在數(shù)目的減少和體積的減小，這說明肝臟腹側(cè)淋巴結(jié)的器官發(fā)生受到轉(zhuǎn)錄因子NFIL3的調(diào)控;而肝臟門側(cè)淋巴結(jié)的發(fā)生發(fā)育則不受NFIL3缺陷的影響。器官發(fā)

7、生的時(shí)相、依賴的信號通路以及控制該過程的轉(zhuǎn)錄因子這些方面的不同，說明肝臟門側(cè)淋巴結(jié)和腹側(cè)淋巴結(jié)是兩個具有不同特征的淋巴結(jié)。
　　4、肝臟引流淋巴結(jié)的功能
　　肝臟門側(cè)淋巴結(jié)和腹側(cè)淋巴結(jié)具有不同的細(xì)胞組成且在器官發(fā)生方面存在諸多不同，那么它們的功能是否不同呢？鑒于清除血源性病原體和誘導(dǎo)針對腸道來源無害抗原的系統(tǒng)性免疫耐受是肝臟的兩大重要免疫功能，我們分別利用血源性病毒感染模型和口服耐受模型對肝臟門側(cè)淋巴結(jié)和腹側(cè)淋巴結(jié)的功能進(jìn)行

8、探究。利用嗜肝感染的腺病毒感染模型、乙肝病毒感染模型以及淋巴網(wǎng)狀脈絡(luò)叢腦膜炎病毒急性和慢性感染模型，我們發(fā)現(xiàn)肝臟發(fā)生病毒感染后肝臟腹側(cè)淋巴結(jié)是抗病毒應(yīng)答發(fā)生的主要場所，而肝臟門側(cè)淋巴結(jié)中的免疫應(yīng)答較弱。利用經(jīng)典的口服耐受模型，我們發(fā)現(xiàn)肝臟門側(cè)淋巴結(jié)是針對口服抗原誘導(dǎo)抗原特異性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的場所，而肝臟腹側(cè)淋巴結(jié)中雖然發(fā)生針對口服抗原的免疫識別，但并不誘導(dǎo)產(chǎn)生抗原特異性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。
　　結(jié)論:肝臟門側(cè)淋巴結(jié)和腹側(cè)淋巴結(jié)通過不同淋巴