復(fù)方金銀花中藥漱口水的制備及其功效實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：
　　牙周炎是造成中國成年人牙齒喪失的主要原因。目前，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，牙周炎是多因素疾病，其中牙菌斑生物膜的細(xì)菌及其毒性產(chǎn)物是引發(fā)牙周炎必不可少的始動(dòng)因子。因此，控制和去除牙菌斑是牙周炎治療的關(guān)鍵。菌斑控制的常用方法為機(jī)械性菌斑控制法，包括齦上潔治、齦下刮治、刷牙等。在基礎(chǔ)治療的基礎(chǔ)上，以含有抗菌成分的漱口水作為輔助手段，能取得更好的菌斑控制效果。
　　漱口水在口腔疾病的預(yù)防及輔助治療中起著重要的作用。根據(jù)功能及成

2、分的不同，漱口水可分為防齲類漱口水、抗敏感類漱口水、抗生素類漱口水、抑制牙菌斑類漱口水、口氣清新類漱口水及中草藥類漱口水，在清除口腔異味、防齲齒、抗炎等方面有很好的效果，常作為牙周炎、牙齦炎、冠周炎及口腔潰瘍等疾病的輔助用藥。其中，抑制牙菌斑類漱口水作為自我菌斑控制手段的一種，可通過液體流動(dòng)力進(jìn)入牙刷、牙線、潔治器等器械不能到達(dá)的區(qū)域，補(bǔ)充機(jī)械性菌斑控制法的不足。目前，臨床上常用的漱口水中多含有抗生素、碘、乙醇等成分，如洗必泰、含碘新型

3、漱口水等，長期使用易引起牙面著色、口腔菌群失調(diào)、口腔黏膜刺激等問題。因此，尋找有效、安全、無酒精、可長期使用的漱口水成為牙周病防治的新熱點(diǎn)。
　　在中國，天然藥物的應(yīng)用歷史悠久、且毒副作用小，取材方便，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，有的還具有殺菌消炎作用，因而廣泛用于基礎(chǔ)研究及臨床實(shí)踐。中藥制劑在口腔中的運(yùn)用廣泛，大量研究表明中藥在治療牙周病、口腔潰瘍等疾病上具有良好的療效。但目前對(duì)于該類中藥的報(bào)道多為某種單一中草藥的作用，對(duì)中藥復(fù)方的研究較少，而中

4、藥復(fù)方更能體現(xiàn)中醫(yī)辨證論治的特點(diǎn)，充分發(fā)揮藥物的協(xié)同作用及中醫(yī)藥多種有效成分多靶點(diǎn)作用。隨著人們對(duì)漱口水安全性的關(guān)注，中藥類漱口水的優(yōu)勢(shì)逐漸顯現(xiàn)出來。市面上已有成品銷售的中藥類漱口水，但普遍存在色澤渾濁、口感較差或含有酒精等問題，使得其接受度較其他類漱口水低。且對(duì)于中草藥類漱口水的研究，從基礎(chǔ)到應(yīng)用的系統(tǒng)研究較少，缺乏科學(xué)客觀的療效觀察，且對(duì)于其毒性及不良反應(yīng)報(bào)道較少，未能給臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。中醫(yī)理論認(rèn)為胃火熾熱、腎氣虛虧和氣血不足

5、是牙周炎的主要病因。茵陳、野菊花、金銀花、白芷、細(xì)辛生物活性強(qiáng)，被證實(shí)具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫等作用，且對(duì)包括口腔致病菌在內(nèi)的多種細(xì)菌具有抑制作用。將這5種藥物進(jìn)行復(fù)方配伍，應(yīng)用于防治牙周疾病中尚未見報(bào)道。
　　綜上所述，本研究擬從茵陳、野菊花、金銀花中提取單味藥液，并提取細(xì)辛+白芷混合藥液，通過均勻設(shè)計(jì)法獲得5種藥物的最佳配比，制備復(fù)方金銀花中藥漱口水，通過動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)，研究該漱口水的毒性及對(duì)牙周疾病的功效，為進(jìn)一步開發(fā)出安全有效的復(fù)方

6、金銀花中藥漱口水提供科學(xué)依據(jù)。
　　研究方法：
　　1.采用揮發(fā)油提取法對(duì)茵陳、野菊花、金銀花、細(xì)辛、白芷5種藥物進(jìn)行提取，制備茵陳、野菊花、金銀花單味藥液及細(xì)辛+白芷混合藥液，其中白芷與細(xì)辛的比例為33∶17。
　　2.采用瓊脂稀釋法測(cè)定各藥液的最低抑菌濃度。將P.gingivalis ATCC33277接種于含藥瓊脂平板上，37℃厭氧培養(yǎng)（80％N2、10％CO2、10％H2）72h，觀察菌落形成情況。
　　

7、3.收集健康牙齦組織，采用改良組織塊酶消化法進(jìn)行人牙齦成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)，并通過免疫組化法鑒定細(xì)胞來源。
　　4.以茵陳、野菊花、金銀花及白芷+細(xì)辛為因素，以對(duì)牙齦卟啉單胞菌抑菌活性、生物膜形成抑制率及對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞毒性為考察指標(biāo)，通過均勻設(shè)計(jì)法，篩選出最優(yōu)配比，并以此配比制備復(fù)方金銀花中藥漱口水原液。
　　5.將漱口水原液作用于大鼠口腔內(nèi)，每天3次，每次40μL。陰性對(duì)照組為滅菌水。每天觀察大鼠大體表現(xiàn)及記錄體重。作用

8、4周后，處死大鼠，取大鼠肝、脾、肺、腎組織，制作HE染色切片進(jìn)行組織學(xué)觀察。
　　6.將30只大鼠隨機(jī)分為藥物作用組（T組）、陰性對(duì)照組（N組）及牙周炎造模組（P組）三組，采用絲線結(jié)扎+涂布牙齦卟啉單胞菌+高糖飲食法構(gòu)建大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型，造模期間觀察大鼠口腔內(nèi)牙周情況，第4周時(shí)從各組中隨機(jī)選擇處死大鼠，制作HE染色切片觀察造模情況。
　　7.將漱口水原液涂布于T組大鼠左側(cè)上頜第二磨牙齦緣，每天3次，每次20μL。N組涂布

9、滅菌水。P組不作任何處理。持續(xù)用藥20d后，處死所有大鼠，取造模牙及牙周組織制作HE染色切片進(jìn)行觀察。
　　研究結(jié)果：
　　1.各單味藥液對(duì)牙齦卟啉單胞菌最低有效抑菌濃度分別為:茵陳40mg/mL，野菊花10mg/mL，金銀花10mg/mL，白芷+細(xì)辛(33∶17)40mg/mL。
　　2.通過二項(xiàng)式逐步回歸得出5種藥物的最佳配比為:茵陳55mg/mL，野菊花45mg/mL，金銀花40mg/mL，白芷+細(xì)辛(33∶17

10、)40mg/mL。
　　3.毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組大鼠體重?zé)o明顯差異，大鼠肝、脾、肺、腎組織未見明顯異常。
　　4.成功構(gòu)建大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型。大鼠口腔檢查及組織HE染色切片結(jié)果顯示:與P組及N組相比，T組牙周組織炎癥細(xì)胞浸潤減少，牙周膜纖維排列整齊。
　　研究結(jié)論：
　　1.通過均勻設(shè)計(jì)法篩選出的復(fù)方金銀花中藥漱口水無明顯急性毒性作用，且短期內(nèi)連續(xù)使用無毒性作用。
　　2.復(fù)方金銀花中藥漱