孕期和哺乳期高脂飲食易化子代大鼠高血壓生成的中樞機(jī)制研究.pdf

1、大量證據(jù)表明母親肥胖或高脂飲食與成年子代代謝性疾病和心血管疾病相關(guān)。外周脂肪組織研究發(fā)現(xiàn)，腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin-system，RAS)和促炎因子(proinflammatory cytokines，PICs)表達(dá)異常參與子代心血管疾病的發(fā)生。孕期高脂飲食可誘發(fā)子代交感神經(jīng)系統(tǒng)活性增加，促使高血壓的發(fā)生。高脂飲食使子代對(duì)中樞刺激的敏感性增強(qiáng)，然而，參與子代高血壓形成的中樞位點(diǎn)和調(diào)節(jié)機(jī)制尚不清楚。終板（l

2、amina terminalis，LT）和室旁核(paraventricular nucleus，PVN)是重要的心血管中樞區(qū)域。LT包括穹隆下器(subfornical organ，SFO)、正中視前核（median preoptic nucleus，MnPO）和終板血管器（organum vasculosum，OVLT）。PVN是下丘腦的一個(gè)關(guān)鍵核團(tuán)，由兩部分組成，一是可合成和分泌血管加壓素和催產(chǎn)素的大細(xì)胞區(qū)，另一是發(fā)出纖維直接投射

3、到腦干和脊髓調(diào)節(jié)交感活動(dòng)的小細(xì)胞區(qū)，小細(xì)胞區(qū)接受來(lái)自SFO關(guān)于循環(huán)肽的關(guān)鍵信息，然后PVN神經(jīng)元通過(guò)延髓頭端腹外側(cè)區(qū)(rostral ventrolateral medulla，RVLM)和脊髓中間柱來(lái)控制交感神經(jīng)。LT與PVN在血壓長(zhǎng)期調(diào)控及體液平衡中發(fā)揮重要作用，LT感知來(lái)源于循環(huán)的輸入信號(hào)，并將這些信號(hào)傳遞給PVN，PVN再將信號(hào)傳遞給脊髓心血管控制中心，最后將信號(hào)發(fā)布到外周。SFO是一個(gè)缺乏血腦屏障的室周器官，是直接感知循環(huán)系統(tǒng)

4、中各種信號(hào)分子的界面，更重要的是SFO和血腦屏障內(nèi)參與心血管和能量調(diào)節(jié)核團(tuán)PVN有直接的纖維聯(lián)系，因此它能把其感知的外周關(guān)于心血管、體液和能量狀態(tài)的信號(hào)傳遞給這些調(diào)節(jié)核團(tuán)，從而維持機(jī)體正常的機(jī)能。大量研究證實(shí)SFO和PVN參與充血性心衰、高血壓和代謝綜合征的調(diào)節(jié)。因此本課題旨在探討:母代高脂飲食是否通過(guò)調(diào)節(jié)子代鼠腦組織中重要心血管核團(tuán)SFO和PVN的RAS成分、氧化應(yīng)激和PICs的mRNA表達(dá)，從而改變子代大鼠對(duì)血管緊張素Ⅱ(Angio

5、tensinⅡ，AngⅡ)和腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的敏感性，并且易化AngⅡ引起的高血壓？
　　為此，采用孕期和哺乳期給予高脂飲食的方法繁殖子代大鼠，所有子代交叉喂養(yǎng)（被原來(lái)組喂養(yǎng)或者相反組）分為四組:正常飲食子代被正常飲食母親哺乳組(offspring of dams with CD during pregnancy and lactation，OCC)、正常飲食子代被高脂

6、飲食母親哺乳組(offspring of dams with HFD during lactation only，OCH)、高脂飲食子代被正常飲食母親哺乳組(offspring of dams with HFD during pregnancy only，OHC)、高脂飲食組子代被高脂飲食母親哺乳組(offspring of dams with HFD during pregnancy and lactation,OHH)。灌注AngⅡ

7、前后，通過(guò)記錄血壓和心率的變化，并測(cè)量腦內(nèi)重要心血管核團(tuán)PVN和LT區(qū)域的RAS成分和PICs的mRNA表達(dá)，評(píng)價(jià)子代大鼠心血管指標(biāo)的異常情況，確定參與血壓調(diào)節(jié)的RAS成分和PICs。進(jìn)一步通過(guò)子代大鼠股動(dòng)、靜脈置管，應(yīng)用硝普鈉和苯腎上腺素，檢測(cè)清醒狀態(tài)下子代大鼠壓力感受反射功能，來(lái)評(píng)估心血管功能。同時(shí)，建立子代大鼠的腦室插管模型，清醒狀態(tài)下腦室微量注射AngⅡ和TNF-α，觀察血壓和心率變化，評(píng)估動(dòng)物對(duì)中樞刺激的敏感性。
　　實(shí)

8、時(shí)熒光定量多聚核苷酸鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction，RT-qPCR)分析顯示，孕期和/或哺乳期高脂飲食的3周齡子代鼠（OHH，OHC及OCH組）與孕期和哺乳期普通飲食子代鼠（OCC組）比，腦組織RAS成分(LT中AGT和ACE1;PVN中AT1R)，NADPH氧化酶(LT中NOX2)及PICs(LT和PVN中TNF-α)的mRNA表達(dá)明顯增加。10周齡OHC，O

9、CH和OHH組與OCC組比較，給予PE升壓誘發(fā)心率下降的斜率值均顯著減小，OCH和OHH組大鼠給予SNP降壓誘發(fā)心率增快的斜率值與OCC組比也顯著減小，但是OHC組與對(duì)照組比并沒(méi)有顯著差異。與OCC組比較，腦室給予AngⅡ引起的增壓效應(yīng)在OCH和OHH組顯著增加，但在OHC組未見(jiàn)明顯差異。腦室給予AngⅡ均可引起各組動(dòng)物心率下降，但各組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)，與OCC組比較，腦室給予TNF-α引起的升壓效應(yīng)在OHC，OCH和OHH組顯著

10、增強(qiáng)，四組給予TNF-α后心率均顯著增強(qiáng)，且OHC，OCH和OHH組引起心率增快效應(yīng)較OCC組顯著增強(qiáng)。緩慢泵注升壓劑量AngⅡ后OHH，OHC和OCH組血壓升高(21.3±3.9，25.0±3.8，29.7±2.9mmHg)，與OCC組（13.1±2.4mmHg）比，高脂飲食大鼠表現(xiàn)出增壓效應(yīng)明顯增強(qiáng)的趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)各組給予AngⅡ前后心率無(wú)明顯變化。（OCC+ANGⅡ）組與(OCC+saline)組比，LT中RAS成分(renin，AG

11、T，ACE1和AT1R)、NOX2和促炎因子（TNF-α和IL-6，除IL-1β外）的mRNA表達(dá)顯著增加，且與OCC組給予ANGⅡ比較，高脂飲食組給予AngⅡ后RAS成分及促炎因子表達(dá)顯著增加:OHC組的TNF-α和IL-1β;OCH和OHH組的renin，ACE1，TNF-α和IL-1β。此外，OCH和OHH組大鼠腦組織中的renin和ACE1及OHH組的IL-6和IL-1β的mRNA表達(dá)比OHC組給予ANGⅡ后增加更明顯。（OCC

12、+ANGⅡ）組與(OC C+saline)組比，PVN中NOX2，TNF-α，IL-6和IL-1βmRNA表達(dá)明顯增加，但renin，AGT，ACE1和AT1R的mRNA表達(dá)并沒(méi)有顯著增加。高脂飲食組大鼠泵注AngⅡ后與（OCC+ANGⅡ）組大鼠比較，NOX2，IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá)顯著增加，而且OCH和OHH組的NOX2的mRNA表達(dá)比OHC組更明顯。
　　總之，高脂飲食子代表現(xiàn)出壓力感受性反射敏感性減弱，及對(duì)腦室微