TRB3介導(dǎo)的脂肪組織巨噬細胞極化與糖尿病冠狀動脈病變關(guān)系的研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行了論述:
　　論文Ⅰ 脂肪組織巨噬細胞極化與合并糖尿病的冠心病患者冠脈病變嚴重程度的相關(guān)性研究
　　本研究選取了進行冠狀動脈搭橋手術(shù)的單純冠心病與合并糖尿病的冠心病患者，手術(shù)中獲取患者的脂肪組織，檢測合并糖尿病的冠心病患者心外膜與皮下脂肪組織巨噬細胞極化與TRB3/PPARγ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的改變，并分析脂肪組織巨噬細胞M1/M2比值與冠狀動脈病變嚴重程度的關(guān)系，以探討糖尿病是否是通過誘導(dǎo)巨噬細胞M1/M

2、2比值的改變而加重了冠狀動脈病變進程。
　　目的：
　　1.探討單純冠心病與合并糖尿病的冠心病患者心外膜與皮下脂肪組織中巨噬細胞數(shù)量、M1/M2型巨噬細胞比例的不同;
　　2.探討心外膜與皮下脂肪組織中巨噬細胞M1/M2型比值與冠心病嚴重程度的關(guān)系;
　　3.檢測單純冠心病與合并糖尿病的冠心病患者心外膜與皮下脂肪組織中TRB3/PPARγ信號通路蛋白表達水平的改變。
　　方法：
　　1.冠心病患者脂肪

3、組織的獲取:收集擬進行冠狀動脈搭橋手術(shù)的冠心病患者，分為單純冠心病組(n=30)與合并糖尿病的冠心病組(n=30)，在患者知情同意的基礎(chǔ)上，手術(shù)中獲取患者的左室前壁心外膜脂肪組織與胸骨前的皮下脂肪組織。
　　2.冠心病患者冠狀動脈嚴重程度的評估:通過冠狀動脈造影，采用Gensini評分方法評價各患者冠狀動脈病變嚴重程度。
　　結(jié)果：
　　1.患者的一般臨床特征:
　　(1)合并糖尿病的冠心病患者與單純冠心病患者在

4、年齡、性別、體重及血壓方面無明顯統(tǒng)計學(xué)差異;與單純冠心病患者相比，合并糖尿病的冠心病患者腰圍(WC)(90.67±7.07vs95.8±7.43，P=0.008)、臀圍(HC)（95.43±5.83vs98.27±4.81，P=0.044）及體重指數(shù)(BMI)(24.45±2.41vs25.84±2.41，P=0.029)均顯著增加;
　　(2)與單純冠心病患者相比，合并糖尿病的冠心病患者Gensini評分(74.13±41.1v

5、s114.73±54.47，P=0.002)顯著增高。
　　2.患者血清學(xué)指標改變:合并糖尿病的冠心病患者與單純冠心病患者血清TC、LDL-c水平無顯著統(tǒng)計學(xué)差異;與單純冠心病患者相比，合并糖尿病的冠心病患者空腹血糖（4.91±0.53vs7.41±1.99，P＜0.001）、TG（1.33±0.63vs1.74±0.84，P=0.024）及FFA（65.73±36.21vs96.50±67.90，P=0.034）顯著增加，而HD

6、L-c顯著降低（1.15±0.23vs1.03±0.19，P=0.0024）。
　　結(jié)論:
　　1.與單純冠心病患者相比，合并糖尿病的冠心病患者心外膜脂肪組織中巨噬細胞含量，包括總的巨噬細胞、M1型巨噬細胞及M2型巨噬細胞均顯著增加，巨噬細胞M1/M2比值顯著增加，冠狀動脈粥樣硬化斑塊病變程度更為嚴重;
　　2.冠心病嚴重程度與心外膜脂肪巨噬細胞M1/M2比值具有數(shù)量依存關(guān)系;
　　3.心外膜脂肪組織巨噬細胞M1

7、/M2比值在糖尿病加重冠脈病變進展過程中起著重要作用;
　　4.合并糖尿病的冠心病患者心外膜與皮下脂肪組織TRB3蛋白表達顯著增高，而PPARγ蛋白表達顯著降低，提示TRB3/PPARγ信號通路可能在糖尿病加重冠心病進程中起著重要作用。
　　論文Ⅱ TRB3基因沉默調(diào)控巨噬細胞極化及改善脂肪功能紊亂的機制研究
　　本研究通過建立胰島素抵抗的脂肪細胞，研究脂肪細胞對巨噬細胞M1/M2比值及巨噬細胞M2a/M2b型轉(zhuǎn)化的影

8、響，以及巨噬細胞M1/M2比值及巨噬細胞M2a/M2b型轉(zhuǎn)化改變對脂肪細胞功能的影響，以確定功能紊亂脂肪細胞與巨噬細胞之間惡性循環(huán)的存在;并通過TRB3基因沉默確定TRB3是否打破了這種惡性循環(huán)，從而為肥胖、糖尿病及其心血管并發(fā)癥的治療提供新的靶點。
　　目的：
　　1.建立脂肪細胞胰島素抵抗模型，確定功能紊亂的脂肪細胞對巨噬細胞M1/M2比值以及巨噬細胞M2a/M2b型間轉(zhuǎn)化的作用;
　　2.確定巨噬細胞M1/M2比

9、值以及巨噬細胞M2a/M2b型間的轉(zhuǎn)化對脂肪細胞功能的影響;
　　3.通過TRB3基因沉默及應(yīng)用PPARγ抑制劑確定TRB3/PPARγ信號通路在脂肪細胞功能紊亂與巨噬細胞表型轉(zhuǎn)化間相互影響中的作用。
　　方法：
　　1.胰島素抵抗脂肪細胞的建立:首先，應(yīng)用胰島素、地塞米松以及3-異丁基-1-甲基-黃嘌呤將3T3-L1前脂肪細胞分化為成熟的脂肪細胞，然后，向分化成熟的脂肪細胞中加入高糖(25mM)+高胰島素(10nM)

10、刺激，繼續(xù)培養(yǎng)24h，建立脂肪細胞胰島素抵抗模型;
　　2.M2a型巨噬細胞誘導(dǎo)分化:采用含20ng/ml的M-CSF、20ng/ml的IL-4RPMI1640完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化Raw264.7巨噬細胞4天。
　　結(jié)果：
　　胰島素抵抗脂肪細胞模型的建立:與Oh相比，高糖加高胰島素刺激脂肪細胞24h后，脂肪細胞的IRS-1蛋白水平明顯降低(0.6783±0.11294vs0.2465±0.0796，P＜0.01);與0

11、h相比，高糖加高胰島素刺激脂肪細胞24h后，脂肪細胞胞膜的GLUT4水平明顯降低（1.00±0.00vs0.4318±0.09309，P＜0.01），而脂肪細胞胞漿的GLUT4水平明顯增多（1.00±0.00vs1.7673±0.0975，P＜O.001）。結(jié)果提示，高糖加高胰島素刺激條件下，脂肪細胞IRS-1蛋白水平與糖轉(zhuǎn)運明顯減少，出現(xiàn)胰島素抵抗。
　　結(jié)論：
　　1.胰島素抵抗脂肪細胞促進巨噬細胞M1/M2比值的增加及

12、巨噬細胞由M2a型向M2b型的轉(zhuǎn)化;
　　2.巨噬細胞M1/M2比值的增加及巨噬細胞由M2a型向M2b型的轉(zhuǎn)化促進脂肪細胞功能紊亂;
　　3.TRB3基因沉默通過抑制巨噬細胞M1/M2比值的增加及巨噬細胞由M2a型向M2b型的轉(zhuǎn)化，改善脂肪功能紊亂;
　　4.TRB3/PPARγ信號通路在脂肪細胞誘導(dǎo)的巨噬細胞極化過程中起著重要作用;
　　論文Ⅲ STAMP2基因過表達通過介導(dǎo)脂肪組織巨噬細胞極化改善糖尿病Apo

13、E-/-/LDLR-/-/小鼠胰島素抵抗
　　為了研究STAMP2對糖尿病小鼠不同部位脂肪組織中炎癥與巨噬細胞的影響，我們構(gòu)建了2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠模型，體內(nèi)應(yīng)用STAMP2腺病毒過表達，檢測STAMP2對各脂肪組織中巨噬細胞浸潤、極化、炎癥因子表達及信號通路的影響，探討在糖尿病狀態(tài)下，STAMP2可能通過調(diào)節(jié)不同脂肪組織中巨噬細胞的極化而作為整合炎癥與胰島素抵抗的樞紐，改善能量與代謝平衡。
　　目的

14、：
　　1.探討2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠不同部位脂肪組織中STAMP2表達量的改變;
　　2.探討2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠不同部位脂肪組織中巨噬細胞數(shù)量、M1/M2型巨噬細胞比例的不同;
　　3.探討STAMP2過表達對ApoE-/-/LDLR-/-小鼠不同部位脂肪組織中巨噬細胞數(shù)量、M1/M2型巨噬細胞比例的影響。
　　方法：
　　1.建立2型糖尿病ApoE-/-/

15、LDLR-/-小鼠模型:將32只3周齡小鼠隨機分為對照組(n=16)與高脂飲食組(n=16)，高脂飲食組高脂喂養(yǎng)6周后，經(jīng)糖耐量實驗證實出現(xiàn)胰島素抵抗的腹腔注射STZ，再高脂喂養(yǎng)2周，至小鼠11周齡時再行腹腔糖耐量實驗(IPGTT)，隨機血糖＞11.1mmol/1的小鼠入組為糖尿病組;
　　2.實驗動物分組:在ApoE-/-/LDLR-/-小鼠20周齡時，將對照組分為對照+STAMP2空載體組、對照+STAMP2過表達組、糖尿病+

16、STAMP2空載體組、糖尿病+STAMP2過表達組。
　　結(jié)果：
　　建立2型糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠模型:
　　IPGTT實驗顯示，3周齡時對照組與糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠在血糖水平無顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P均＞0.05）;高脂飲食6周后，與對照組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠在15min、30min、60min及120min血糖水平顯著增

17、加，血糖曲線下面積顯著增加（P均＜0.05）;11周齡時，與對照組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，糖尿病ApoE-/-/LDLR-/-小鼠在Omin、15min、30min、60min及120min血糖水平顯著增加，血糖曲線下面積顯著增加(P均＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.與對照組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠相比，糖尿病組ApoE-/-/LDLR-/-小鼠附睪與棕色脂肪組織中STAMP2表達水平顯著降低，