猴B病毒血清學(xué)檢測方法的比較及表位研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行論述：
　　第一部分 猴B病毒血清學(xué)檢測方法的比較
　　目的:
　　猴B病毒(Monkey B virus，BV)(也稱猴皰疹病毒Ⅰ型(Cercopithecine herpesvirus1))，是重要的人獸共患病原，屬一類病原，四級生物安全實驗室防護。國家標(biāo)準(zhǔn)檢測要求猴B病毒作為抗原，但由于生物安全問題，其抗原制備受到很大限制，因此使用替代抗原進行其血清學(xué)檢測并對其比對驗證。
　　方法：

2、
　　應(yīng)用2種ELISA方法(抗原分別為BV和HVP2)、1種IEA方法（抗原為HSV-1）和1種IFA方法（抗原為HSV-1）對本實驗室135份送檢恒河猴血液樣品進行篩查，對陽性及可疑樣品再用Western Blot（抗原為HSV-1）方法以及以HSV-1gC1純化糖蛋白為抗原的免疫印跡方法驗證。
　　結(jié)果：
　　HVP2-ELISA、BV-ELISA、HSV-1-IEA和HSV-1-IFA陽性檢出率分別為36.3％

3、、38.5％、35.6％和34.1％;4種方法檢測結(jié)果一致的樣品占91.9％(124/135)，陽性結(jié)果均可被WB和免疫印跡方法確證;可疑樣品11份，27.3％(3/11)的樣品經(jīng)驗證檢驗為陽性。
　　結(jié)論：
　　幾種抗體檢測方法檢測結(jié)果符合率較高，均可以作為初篩檢測方法;陽性樣品及可疑樣品的確證檢驗應(yīng)使用多種方法，避免漏檢;在ELISA法初篩檢測中，陽性樣品的判定標(biāo)準(zhǔn)可適當(dāng)降低，避免可疑樣品漏檢。
　　第二部分 猴B

4、病毒診斷表位的研究
　　目的:
　　鑒定B病毒特異的檢測抗原表位。
　　方法:
　　利用生物信息學(xué)的預(yù)測分析技術(shù)對BV和HSV全病毒的序列進行分析比對，選擇B病毒特異表位以及B病毒可能的線性表位肽段合成多肽;同時，利用跨疊多肽陣列技術(shù)，針對B病毒核心抗原蛋白gB和gD的氨基酸序列進行跨疊陣列設(shè)計并合成多肽。再利用合成肽與B病毒標(biāo)準(zhǔn)血清樣品進行ELISA驗證，評價表位肽段的特異性和敏感性。
　　結(jié)果:

5、　　ELISA測定結(jié)果顯示，gD蛋白肽段（序列為AQLPPNWHVPEAS）和gB蛋白肽段（序列為YVRELLREQERRPGDAAATPKP SA）可檢測猴B病毒抗體，與傳統(tǒng)ELISA比較，二者的組合檢測敏感性為98％(49/50);然而，使用生物信息學(xué)預(yù)測的B病毒特異表位在多次實驗無法獲得證實。
　　結(jié)論:
　　多肽表位抗原，在ELISA實驗中與病毒顆粒抗原相比，具有較為一致的準(zhǔn)確性，且檢測靈敏度高，此類抗原可以作為初篩