錳對人群和SH-SY5Y細胞中PARK2表達的影響.pdf

1、目的：研究錳對人群和SH-SY5Y細胞中PARK2表達的影響。
　　方法：⑴選取鐵冶煉廠的20名工人為對照組，錳鐵合金冶煉廠的26名工人為錳暴露組。收集工人的血液和唾液，采用原子吸收分光光度法(atomic absorption spectrometry, AAS)測定錳和鐵（iron, Fe)的濃度；實時熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測PARK2 mRNA表達水平。⑵SH-SY5Y細胞實驗：0、100、300、500μ

2、M濃度的MnCl2染毒SH-SY5Y細胞24小時后，用MTT法測細胞存活率（線粒體損傷），AAS測定細胞內(nèi)錳濃度，高度水溶性四唑鹽（WST-1）法測定細胞內(nèi)超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活力，硫代巴比妥酸法(thibabituric acid, TBA)測定細胞內(nèi)丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量，反相高效液相(reverse phase high performance liq

3、uid chromatography, RP-HPLC)-熒光法測定細胞內(nèi)多巴胺(dopamine, DA)含量, RT-PCR檢測PARK2 mRNA表達水平，蛋白免疫印跡法(western blot, WB)檢測Parkin蛋白表達水平。
　　結(jié)果：①與對照組比較，錳暴露組血漿、紅細胞（red blood cell, RBC）、唾液和累積錳暴露的錳濃度分別高出2.2,2.0,1.7和3.0倍（P<0.05），錳暴露組血液中PA

4、RK2 mRNA的表達降低42％（P<0.05）。相關(guān)性分析顯示，PARK2 mRNA的表達與血漿、RBC、唾液以及累積錳暴露的錳濃度呈負相關(guān)，r值分別為-0.526(P<0.05)、-0.317(P<0.05)、-0.652(P<0.05)、-0.737(P<0.05)。②SH-SY5Y細胞實驗：與對照組比較，MnCl2濃度為300、500μM時，細胞存活率降低（P<0.05）。與對照組比較，染錳組細胞內(nèi)錳濃度增高（P<0.05）。與

5、對照組比較，MnCl2濃度為300、500μM時，SOD活力和DA含量降低（P<0.05），MDA含量升高（P<0.05）；細胞PARK2 mRNA表達和Parkin蛋白表達降低（P<0.05）。相關(guān)性分析顯示，PARK2 mRNA表達與線粒體損傷、細胞內(nèi)錳含量、MDA含量呈負相關(guān)，r值分別為-0.902,(P<0.05)、-0.880(P<0.05)、-0.862(P<0.05)；PARK2 mRNA表達與SOD活力、DA含量、Par