小干擾RNA納米遞送載體及其腫瘤治療應用研究.pdf

1、siRNA作為近年來興起的一種核酸類藥物，雖然給腫瘤治療帶來了新的機遇，但是臨床siRNA藥物的開發(fā)還面臨著巨大的挑戰(zhàn)。通過對腫瘤進行分類診斷，目前已經(jīng)找到了大量的分子靶點，如何從眾多的腫瘤相關基因中篩選出合適的靶點進行干預，以及如何設計出良好的siRNA遞送載體用于克服多重給藥障礙成為了目前研究的熱點。本課題根據(jù)腫瘤細胞和正常細胞基因功能的差異，通過合成新型的聚合物對現(xiàn)有納米載體進行優(yōu)化，實現(xiàn)高效遞送siRNA到腫瘤細胞進行腫瘤治療，

2、研究內(nèi)容主要分為以下兩個部分:
　　1.我們根據(jù)對腫瘤低糖環(huán)境下神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞代謝功能基因的分析，找到了神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞特異性高表達的葡萄糖轉(zhuǎn)運體3(GLUT3)。隨后我們篩選了高效靶向GLUT3的siRNA，并用聚乙二醇-聚乳酸嵌段聚合物(PEG-b-PLA)，輔以陽離子脂質(zhì)(BHEM-Chol)，通過雙乳化法制備了包載GLUT3siRNA的納米顆粒。在細胞實驗中，我們驗證了該納米顆粒將siRNA遞送到神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞和神經(jīng)膠質(zhì)瘤干

3、細胞的能力，并檢測了GLUT3基因沉默對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞葡萄糖攝取、乳酸產(chǎn)生等代謝指標的抑制效果，最后通過腫瘤治療實驗證明該siRNA遞送載體可以通過代謝抑制下調(diào)神經(jīng)膠質(zhì)瘤干細胞的比例，實現(xiàn)對腫瘤生長的抑制。
　　2.針對陽離子脂質(zhì)輔助的PEG-b-PLA納米顆粒在腫瘤細胞攝取和胞內(nèi)siRNA釋放上的不足，我們合成了腫瘤酸敏感化學鍵（Dlinkm）橋聯(lián)的PEG-Dlinkm-PLGA，這種聚合物只在PEG和PLGA中間改變了橋聯(lián)化學

4、鍵，對整個聚合物的改變很小，因此同F(xiàn)DA批準的PEG-PLGA一樣，具有很好的生物相容性和安全性。通過PEG-Dlinkm-PLGA制備的新型納米顆粒，可以在保留原納米顆粒血液長循環(huán)和腫瘤富集能力的前提下，通過Dlinkm化學鍵實現(xiàn)腫瘤部位酸響應PEG脫殼，增加腫瘤細胞對納米顆粒的攝取，并通過PLGA替代PLA，加快胞內(nèi)siRNA釋放，從而在整體上提高載藥納米顆粒對靶基因的沉默效果和腫瘤治療效果。我們分別在細胞水平和動物水平驗證了該納米